猴Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆及其在大肠杆菌中表达

Fertilin是一种异二聚体精子表面蛋白。业已证明,它在精卵反应中起着重要作用。成熟的Fertilinβ亚基的氨基端93肽含有与整联蛋白结合的整联蛋白配体区。该整联蛋白配体区与蛇毒整联蛋白配体区高度同源,它们能与细胞表面的整联蛋白相结合。 在此我们报道猴成熟Fertilinβ氨基端93肽基因的克隆和在大肠杆菌中的表达。用RT-PCR方法获得mFβNTP93基因,克隆人表达载体pT7-7/hCGβ的EcoRI和BamHI位点,该基因与hCGβ基因一起表达融合蛋白mFβNTP93-hCGβ,Western blotting结果显示,融合蛋白的表观分子量为33kDa,能与抗hCG抗体专一性结合。由于mFβNTP93基因与hCGβ基因相连,因此我们推测,mFβNTP93基因已获得表达。

绵羊fertilin β基因编码区的钓取与结构分析

Fertilin β与精卵的结合和融合有密切关系。为探讨fertilin β蛋白在绵羊受精过程中的作用机理,采用RACE技术,首次钓取了该基因的编码区。结果绵羊fertilin β基因的编码区cDNA全长为2,217bp。同源性分析显示,绵羊的fertilin β氨基酸序列与牛、猪和人的fertilin β具有79.4%、66.7%和58.1%的同源性。系统发育分析表明,绵羊fertilin β与牛属于同一分支,并且也显示了绵羊和牛分类地位最近,这和传统的分类一致。Fertilin β蛋白结构域分析显示,绵羊fertilin β去整合素识别序列为TDE,与牛的序列相同。除了上述三肽序列外,紧随X-D/E-E的ECD保守序列,从而形成了X-D/E-ECD五肽保守序列,在绵羊fertilin β中该五肽序列为TDECE。

精子头后部质膜融合蛋白fertilin的研究进展

精子头后部(或赤道区)表面fertilin糖蛋白由相关的两个跨膜亚基α和β构成异二体形式。这两个亚基前体均含有金属蛋白酶区(met-alloprotease domain)和整联蛋白配体区(disin-tegrin domain),属于ADAMs gene家族。α和β前体分别在睾丸和附睾中从上述两区域连接处水解后,得到成熟型亚基。受精时,穿过透明带的顶体反应后精子借助β亚基的disintegrin肽段与卵母细胞表面的整联蛋白结合,同时fertilin结构发生变化,暴露出α亚基上潜在的融合肽段(90—111aa),并介导精子与卵母细胞发生质膜融合,最终完成受精过程。