胎鼠真皮间充质干细胞对小鼠巨噬细胞极化的影响

目的:探究胎鼠真皮间充质干细胞(Fetal mice dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)对M1/2型巨噬细胞极化的影响。方法:本研究提取FDMSCs,利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激RAW 264.7诱导为M1型巨噬细胞,利用白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)刺激RAW264.7诱导为M2型巨噬细胞,并建立了FDMSCs-RAW 264.7共培养体系。共培养24 h后,收集巨噬细胞,用实时定量PCR和流式细胞学检测M1/2型巨噬细胞特征性因子白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、诱导性一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206的表达变化。结果:FDMSCs使M1型巨噬细胞表达的IL-6、iNOS、CD86减少,IL-10、CD206增多;使M2型巨噬细胞表达的IL-10、Arg-1、CD206表达增多,iNOS表达减少。结论:FDMSCs可以通过调控巨噬细胞极化来调控伤口愈合,对于探索FDMSCs在创面治疗过程中的免疫调节机制有积极意义。

人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中转化生长因子-β的表达

目的探讨人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中转化因子－β (TGF－β )的表达。方法利用已建立的人胎儿无瘢痕愈合动物模型，获取相应标本，结合临床所取成人皮肤标本，采用免疫组化染色方法，观察 TGF－β的表达情况。结果正常人胎儿皮肤及其创面愈合过程中 TGF－β的表达极低，无明显差异（ P>0.05），而上述表达与正常成人皮肤及其创面的表达之间差异显著（ P< 0.01）。结论 TGF－β的低水平表达可能是胎儿皮肤无瘢痕愈合的重要原因之一。

胎儿伤口无瘢痕愈合机制

早期妊娠胎儿创口愈合的特点是无瘢痕形成,产生这一现象的机制还完全不清楚。现将近几年来有关胎儿创口无瘢痕愈合方面的研究进展,从细胞因子、细胞外基质及基因差异显示等方面进行综述,以期为进一步研究提供资料。阐明胎儿创口无瘢痕形成的机制,对预防和治疗瘢痕是很重要的。

热休克蛋白47和基质金属蛋白酶2在增生性瘢痕皮肤和胎儿皮肤中的表达

目的研究热休克蛋白47（HSP47）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）在增生性瘢痕皮肤和胎儿皮肤中的表达及其生物学意义。方法收集妊娠终止的胎儿背部正常皮肤30例,胎龄13-33周;增生性瘢痕组织18例,平均年龄22岁。所有标本用常规石蜡包埋、切片,经HE染色、Masson三色染色和PASM染色,观察组织学结构和胶原纤维的表达;免疫组织化学染色、免疫荧光及免疫印迹试验检测HSP47和MMP-2蛋白在皮肤组织内的表达和定位,RT-PCR检测HSP47和MMP-2 mRNA的水平。结果胎儿皮肤组织内HSP47的表达水平显著低于增生性瘢痕皮肤（P〈0.01）,而MMP-2表达水平则显著升高（P〈0.05）。结论 HSP47和MMP-2对皮肤创面的无瘢痕修复可能具有显著的调节作用。

人胚胎成纤维细胞作为组织工程皮肤种子细胞的可行性研究

目的:评估人胚胎成纤维细胞(human embryonic fibroblasts,HEF)作为组织工程皮肤种子细胞的可行性和优越性。方法:取人流产胚胎皮肤、正常儿童皮肤,相同条件下分离培养成纤维细胞,比较两组细胞镜下、超微结构以及增殖特性,异体淋巴细胞混合实验对比其抗原性。以第三代细胞复合鼠尾胶原构建三维培养,ELASA法分别测定两组三维构建培养液中IL-6,TGF-β1含量。结果:与普通成纤维细胞相比,胚胎成纤维细胞扩增后具有更好的细胞形态和功能,生长速度快,分裂指数高,几乎不刺激异体淋巴细胞增殖。在鼠尾胶原支架中成纤维细胞生长状态良好,并且具有一定的组织强度。胎儿成纤维细胞组培养液中的TGF-β1和IL-6在各个时相上分别显著低于和高于普通成纤维细胞组。结论:胚胎成纤维细胞是组织工程皮肤较理想的种子细胞。

羊水、胎皮与脐血对创伤愈合的影响

为促进伤口以完全再生的方式无瘢痕或较少瘢痕愈合 ,在实验羊背部脊椎两侧制做伤口模型 ,用羊水、胎皮、脐血等不同成分对伤口进行治疗 ,并于治疗后 1、3、7、1 4d取材 ,分别做HE、马宋三色染色 ,7d组做电镜切片 ,观察疗效。结果 :同期内羊水组、胎皮组及脐血组比云南白药组及生理盐水组炎症清除反应及肉芽、胶原生长好 ,但未发现有明显减少瘢痕愈合的作用。结果提示 :胎羊不同组分 (羊水、胎皮、脐血 )可促进伤口愈合 ,缩短愈合时间。

胎兔软骨创伤愈合观察

目的 研究胚胎软骨在创伤愈合过程中是否也具有无瘢痕愈合的特点。方法 将孕 2 3天 (孕期为 31天 )的胚胎兔耳全层切开 ,缝合后送回子宫内。分别于术后 3、5、7、14天将创伤兔耳取下 ;同时在成兔耳上也做全层切开 ,并于手术后 3、7、14、2 1天将创伤兔耳取下 ,对标本进行大体、光镜和电镜观察。结果胎兔软骨是由纤维组织连接伤口 ,为瘢痕愈合 ,但愈合过程较成兔速度快 ,炎症反应小。结论 胎兔软骨的创伤愈合为瘢痕愈合 ,但不同于成兔 ,表现为愈合速度快 ,炎症反应小。

胶原在胎兔、成兔正常发育及创伤愈合过程中的变化

目的 :为了探索胎兔及成兔在正常发育及创伤愈合过程中胶原合成特点 ,分析胎儿型及成年型创伤愈合差别的原因 .方法 :用胃蛋白酶对胎兔及成兔皮肤的胶原进行提取 ,用酸水解法使胶原水解 ,采用氯胺T法进行羟脯氨酸 (HP)测定 .结果 :①正常成兔的HP含量明显高于正常胎兔 ,而正常胎兔不同孕期之间却无差别 .②胎兔皮肤创伤后 (1～ 6d)与对应的正常胎兔相比 ,只表现出第 1dHP显著增高 .③成兔皮肤创伤后与正常成兔相比 ,除第 1日无差别外 ,后 5dHP显著增高 .④胎兔皮肤创伤后HP动态变化呈现线性下降趋势 ,而成兔呈现线性上升趋势 .结论 :成兔皮肤合成胶原的能力高于胎兔皮肤 ;创伤后 ,胎兔及成兔均表现出胶原合成增加 ,而前者持续短暂 ,预示着愈合迅速 ;而后者持续增高 。

经红花保存的羊膜对创面愈合过程中TGF-β表达的影响

目的:研究红花注射液保存人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合中TGF-β表达的影响。方法:建立大鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术,通过计算机图像分析系统检测红花注射液保存人胎羊膜对大鼠皮肤组织中TGF-β表达的影响。结果:切创后2d、3d,红花+羊膜组的TGF-β积分光密度明显低于对照组、羊膜组、红花组(P<0.05);切创后5d、7d,四组的TGF-β表达无统计学差异(P>0.05)。结论:结果表明经红花注射液保存后的人胎羊膜在大鼠皮肤切创愈合的早期阶段(2d～3d),可减少创缘周围TGF-β的表达;促进创口的愈合、减少瘢痕形成。

创伤愈合过程中酸性粘多糖的定位分布

观察胚胎兔、成兔皮肤在正常发育及创伤愈合过程中羧基、硫酸基粘多糖的定位分布。利用胎兔创伤模型，切取皮肤组织标本，用Ｓｐｉｃｅｒ的特殊染色方法切片观察。随胎兔不断成熟，表皮层中除基底层外羧基粘多糖逐渐减少，真皮层呈一致弥漫的分布，成兔表皮层主要为硫酸基粘多糖，真皮网状层的羧粘多糖多围绕胶原纤维分布，密度较深，两者羧基粘多糖染色最浓的部位位于基底层附近。创伤后，胎及成兔均表现出表皮基底层及真皮层羧基粘多糖合成增加，两者的差别不甚显著，而胎兔则在创伤后第５天完全愈合。硫酸基粘多糖的分布部位主要在表皮浅层和真皮层的毛囊细胞、血管及腺体上皮之中，创伤后反应不明显。羧基粘多糖是参与创伤愈合反应的主要细胞外基质，在创伤愈合及瘢痕形成领域具有十分重要的作用。

CTGF,PCNA,IL-1α及α-SMA在人胎儿皮肤无瘢痕愈合中的作用

目的动态观察结缔组织生长因子(CTGF),增殖细胞核抗原(PCNA),IL-1α以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在人胎儿皮肤无瘢痕愈合过程中的表达及其与损伤时间的关系。方法将胎儿皮肤移植于裸鼠皮下,建立人胎儿皮肤无瘢痕愈合模型。并随机分为5组:未创伤组、创伤后1d组、创伤后2d组、创伤后3d组、创伤后7d组。通过免疫组织化学法检测创面中PCNA和α-SMA的表达变化,蛋白印迹法观察创面中CTGF的表达变化。通过酶联免疫吸附试验检测血浆IL-1α含量动态变化。结果创伤后,创面PCNA与α-SMA表达不断上调,创伤后7d开始下调。未创伤组、创伤后1d组、创伤后2d组、创伤后7d组CTGF蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),都呈现低表达;创伤后3d组CTGF蛋白表达上调,高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。创伤后1d到3d血浆IL-1α含量不断升高,创伤后7d急剧下降。结论 PCNA,α-SMA与IL-1α高表达与CTGF的低表达和人胎儿皮肤创伤后无瘢痕愈合相关。

胎膜早破与剖宫产术后伤口愈合不良的关系临床探讨

目的探讨胎膜早破与剖宫产术后伤口愈合不良的关系。方法 108例胎膜早破孕妇为观察组,随机选取同期108例无胎膜早破剖宫产者为对照组,观察两组切口愈合不良的发生率。结果观察组切口愈合不良的发生率16.67%高于对照组2.78%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胎膜早破的剖宫产患者相对容易发生伤口愈合不良,需制定有效的预防措施,以减少术后伤口愈合不良的发生。

胎兔伤口无瘢痕愈合的形态学和胶原构成研究

目的 探讨胎兔伤口无瘢痕愈合的可能机理及条件。方法 用 2 2～ 2 3d的孕兔建立胎兔伤口无瘢痕愈合的动物模型 ,并与孕兔、成年兔伤口愈合进行比较 ,对各组兔皮肤切口组织进行光镜和透射电镜检查 ,胶原含量测定 (羟脯氨酸法 )及分型。结果 ①胎兔切口无急性炎症反应 ,成纤维细胞 (FB)出现早 ,伤口无瘢痕一期愈合。②胎兔伤口中胶原含量及构成变化不显著 ;孕兔、成年兔胶原在术后 7d时升高 (P <0 .0 5 )。结论 无急性炎症反应。

用基因芯片研究不同皮肤组织创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达

目的探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达。方法采用包含有14000个靶基因cDNA克隆的基因芯片技术,对正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族的表达进行对比观察。结果正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族呈现差异表达,其中以PRX2、HOXB13、HOXB6和HOXB7的差异表达为显著。结论同源异形框基因的差异表达表明正常成人和胎儿皮肤的发育生物学状态存在差异,可能是胎儿和成人皮肤不同创面愈合方式的根本原因。

胎儿及成人皮肤创面愈合过程中PDGF和EGF表达的对比性研究

目的 探讨人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中PDGF和EGF的表达及意义。方法 利用已建立的人胎儿无瘢痕愈合动物模型 ,获取相应标本 ,结合临床所取成人皮肤标本 ,采用免疫组化染色方法 ,观察PDGF、EGF的表达情况。结果 ①正常胎儿皮肤中未见明显的PDGF阳性染色 ;创伤后 12h、1d的胎儿表皮及真皮浅层可见PDGF的弱阳性表达 ;创伤后 3d、1周的胎儿皮肤中PDGF的表达呈阴性 ;正常成人皮肤可在成纤维细胞、巨噬细胞及毛细血管见到阳性表达 ;创伤后表达加强。②正常胎儿皮肤表皮全层和毛囊、皮脂腺及汗腺细胞可见EGF的阳性表达 ;创伤后的胎儿皮肤中EGF的表达未见到明显变化 ;正常成人皮肤可见表皮基底层有中度阳性表达 ,毛囊、汗腺细胞也可见到轻度表达 ,创伤后表达有所减弱。结论 生长因子在胎儿和成人皮肤创面愈合过程中的差异表达可能是胎儿无瘢痕愈合的重要原因之一。

人创面愈合过程中同源异形框基因的表达及意义

目的 探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中 ,几种同源异形框基因的表达及在胎儿无瘢痕愈合中的作用。 方法 采用原位杂交方法 ,对正常成人和胎儿皮肤及创面愈合过程中PRX 2、HOXB13、HOX2 .2和HOX2 .3的表达进行观察。 结果 (1)在正常胎儿和成人皮肤中可见PRX 2阳性表达 ,以前者阳性程度为强。分布部位有所不同 ,在正常胎儿皮肤中 ,阳性表达主要见于真皮乳头层毛干部周围细胞 ,表皮中也可见阳性表达 ;而在正常成人皮肤中 ,表皮基底层细胞呈弱阳性表达 ,真皮组织中未见阳性表达。胎儿皮肤创伤后 ,接近切口的组织中阳性表达明显增强 ,而成人皮肤创伤后 ,阳性表达未见明显变化 ,仍局限于表皮基底层细胞 ;(2 )在正常胎儿及成人皮肤均可见HOXB13阳性表达 ,真皮部分主要集中在毛囊细胞 ,表皮部分主要集中在基底层细胞 ,创伤后其表达明显减弱 ,尤其是胎儿皮肤 ;(3)在正常胎儿皮肤中HOX2 .2和HOX2 .3阳性表达主要见于表皮全层 ,表皮基底层阳性表达比较强 ,真皮中可见弱阳性表达 ,创伤后近切口的组织中 ,表达增强。在正常成人皮肤及其创面 ,未见到阳性表达。 结论 同源异形框基因作为与发育生物学密切相关的基因 ,在人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中的表达有所不同 。

胎兔皮肤伤口中糖胺多糖及透明质酸含量分析

目的 探讨胎兔皮肤伤口无瘢痕愈合机理。方法 取胎兔、孕兔、成年兔切口及其周围组织 ,用阿利新蓝比色法 ,醋酸纤维素膜电泳分离法测定糖胺多糖 (GAG)和透明质酸 (HA)含量。结果 ①胎兔正常皮肤GAG及HA的含量均明显高于孕兔及成年兔 (P <0 0 1)。②手术区 ,胎兔、孕兔、成年兔在术后 3d时GAG及HA均升高 (P <0 0 5 )。但术后第 7d ,胎兔GAG含量仍维持在高水平 ,而孕兔及成年兔其含量下降到接近正常水平。

胚胎兔、成兔皮肤在正常发育及创伤愈合过程中IgG的表达

目的 分析胚胎兔、成兔皮肤在创伤愈合过程中IgG表达的差异 ,为胎儿型及成人型愈合机制的研究提供依据。方法 在建立胎兔皮肤创伤模型的基础上 ,采用皮肤均化的方法 ,提取正常及创伤组织中的免疫球蛋白IgG ,用双抗体夹心ELISA法进行含量测定。 结果 随正常胎兔(孕 2 3～ 2 8d)孕期的延长 ,皮肤中IgG有合成增加的趋势 ,而正常成兔皮肤的IgG含量显著高于胎兔 (P <0 0 1) ;胎兔皮肤创伤后不同时间 (1～ 6d)的IgG含量与对应的正常胎兔 (孕 2 3～ 2 8d)相比 ,只伤后第 1,2d增高 (P <0 0 1) ,而不同孕期的创伤胎兔之间差异无显著意义 ;成兔皮肤创伤后从第 2d起IgG合成量明显高于正常成兔 (P <0 0 1) ,并呈现明显的上升趋势 ;对胎、成兔皮肤创伤后IgG变化趋势的动态观察发现胎兔呈平坦线性 ,成兔呈上升线性。 结论 在胚胎发育成熟的过程中 ,免疫系统也日臻完善 ,虽然IgG在较低水平 ,但在创伤后仍表现出一定的免疫反应 ,而成兔在创伤后却表现出强烈的免疫反应 ,不仅含量高而且趋势显著 ,免疫反应的不同是胎儿愈合与成人型愈合的本质差别之一。

胎鼠皮肤无瘢痕愈合培养液优化及皮肤细胞增殖活跃区研究

目的 优化昆明远交系（KM）胎鼠皮肤无瘢痕愈合模型的培养液，定位并分析皮肤创伤愈合中细胞增殖活跃区。方法 取60只胎龄15 d小鼠背部皮片180块，用无菌微创器在皮片上统一造创，随机等分到6组培养液中培养3 d，包括高糖改良Eagle培养基（DMEM）组、DMEM ＋ 5%胎牛血清（FBS）组、DMEM ＋ 10% FBS组、低糖Eagle培养基（MEM）组、MEM ＋ 5% FBS组、MEM＋ 10% FBS组。HE染色后观察各组皮肤创口愈合情况，筛选最适培养条件。在最适培养条件下采用EdU细胞标记物定位皮肤创口愈合处细胞增殖活跃区，并用免疫荧光检测其中AP？1蛋白表达。结果 胎鼠微创皮片培养3 d后，DMEM组、DMEM ＋ 5% FBS组、DMEM ＋ 10% FBS组、MEM组、MEM ＋ 5% FBS组、MEM ＋ 10% FBS组皮片愈合率分别为0、3.33%、6.67%、3.33%、46.67%、26.67%，6组皮片愈合率差异有统计学意义（χ^2 = 41.39，P 〈 0.05）。两两比较显示，MEM ＋ 5% FBS组皮片愈合率显著高于除MEM ＋ 10% FBS组外的其他4组（均P 〈 0.01）。logistic回归分析显示，MEM（OR = 11.717，95% CI 3.274 ~ 41.934，P 〈 0.001）及FBS浓度（5% FBS：OR = 24.625，95% CI 3.027 ~ 200.299，P = 0.003；10% FBS：OR = 13.449，95% CI 1.618 ~ 111.813，P = 0.016）均是促进胎鼠微创皮片愈合的因素。在MEM ＋ 5% FBS培养条件下，真皮和表皮愈合形态最好，且创面处表皮无增厚现象。EdU细胞增殖标记分析显示，胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是创面愈合过程中两个主要的细胞增殖活跃区，同时AP？1蛋白在这两个细胞增殖活跃区也有大量表达。结论 MEM ＋ 5% FBS为体外培养胎鼠皮肤创伤愈合的最适培养液。胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是皮肤创伤愈合中两个主要的细胞增殖活跃区，在创面愈合过程中起到重要作用。

胚胎中晚期皮肤微小RNA差异表达谱及生物学功能分析

目的 通过比较胚胎中晚期皮肤中微小RNA（miRNA）表达谱差异,探讨miRNA在皮肤表型转变中的生物学功能.方法 应用芯片高通量筛选出3组胚胎第16和19天皮肤样品中差异表达的miRNA分子.miR-29b/c分子的表达差异经定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）验证.应用生物信息学软件miRGator和DAVID对差异MiRNA的靶基因进行预测和生物学功能分析.结果 E16和E19皮肤中共有16个差异表达的miRNA分子.定量PCR结果显示miR-29b/c,分别为26.4和16.7倍差异.所预测的1295个靶基因可能参与了多种信号通路包括转化生长因子（TGF）-β通路.结论 胚胎中晚期皮肤中差异表达的miRNA可能参与了胚胎皮肤表型的转变且在无瘢痕愈合过程中发挥重要作用.