血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备

目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。

ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨ODF1在胃肠道神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法收集2008-01—2021-12;胃肠道NEN标本254例,包括168例神经内分泌瘤(NETs)和86例神经内分泌癌(NEC)。采用免疫组化法检测ODF1在上述组织中的表达,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果ODF1在168例NETs中全部弥漫阳性表达,在86例NEC中的阳性表达率为24.4%,而且均为局灶阳性染色。ODF1在胃肠道NETs和NEC中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。ODF1的表达随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低(P<0.05)。ODF1的表达与患者性别和年龄无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析和单因素COX分析显示ODF1阳性NEC患者的预后较好,多因素COX分析显示ODF1表达不是NEC独立的预后因子。结论ODF1在胃肠道NETs中表达显著高于NEC。ODF1水平随着NEN分级增高、T分期增加、淋巴结转移和TNM分期增加而降低,对预后预测有一定价值。

基于血清4型禽腺病毒fiber-1蛋白间接ELISA检测方法的建立

为了获得血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)fiber-1重组表达蛋白,并建立快速鉴别检测方法,本试验将FAdV-4 fiber-1基因连入pET-32a表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,将测序正确的重组蛋白经IPTG诱导表达、纯化和Western blot鉴定。以纯化的pET-32a-fiber-1重组蛋白作为ELISA包被抗原,优化反应条件,建立了检测FAdV-4抗体的fiber-1-ELISA方法。结果成功表达pET-32a-fiber-1蛋白,证实可与FAdV-4阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。特异性结果显示,除FAdV-4与FAdV-10外,与其他病原的抗体无交叉反应;阳性血清稀释1 600倍仍可检测到,批内和批间最大变异系数均小于10%。检测了176份临床样品,75份为阳性,101份为阴性。fiber-1-ELISA方法易于操作,特异性强,重复性好,为FAdV-4抗体监测提供了有效方法。

白藜芦醇通过SIRT1/PGC-1α影响牛肌管细胞线粒体生物发生和肌纤维类型转化

以牛肌管细胞为研究对象,通过添加白藜芦醇探究其对牛肌管细胞肌纤维类型转化的影响及其作用机制。通过噻唑蓝法和比色法对细胞活力和相关代谢酶活力进行测定,对成肌调节因子、肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)以及线粒体生物发生相关分子的基因和蛋白表达量进行测定。结果表明,白藜芦醇处理显著提高了Myf5、Myf6、MyoG和MyoD的基因表达水平(P<0.05),促进了牛肌管细胞分化。白藜芦醇处理显著提高了慢肌纤维蛋白(slow MyHC)的表达,降低了快肌纤维蛋白(fast MyHC)表达,同时上调了MyHC I和MyHC IIa基因表达水平,下调了MyHC IIx和MyHC IIb基因表达水平(P<0.05)。白藜芦醇还能显著提高牛肌管细胞中的琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性,降低乳酸脱氢酶活性(P<0.05),此外,白藜芦醇显著提高了沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子(nucleus respiratory factors,NRF)-1、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。添加SIRT1抑制剂6-氯-2,3,4,9-四氢-1H-咔唑-1-甲酰胺(1H-carbazole-1-carboxam,EX527)后,显著削弱了白藜芦醇诱导的肌纤维类型转化(P<0.05),白藜芦醇对SIRT1、PGC-1α、NRF-1和TFAM的基因和蛋白表达的促进作用被EX527显著削弱(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进线粒体生物发生,进而促进牛肌管肌纤维类型的转化。

血清1型Ⅰ群禽腺病毒Fiber-2蛋白的表达及其中和作用研究

为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫SPF鸡制备抗血清,通过鸡LMH细胞研究Fiber-2蛋白抗血清对FAdV-1感染的中和作用。结果显示,FAdV-1 Fiber-2基因扩增产物大小为1 233 bp,构建了pCold-FAdV-1-Fiber-2重组质粒,表达的FAdV-1 Fiber-2蛋白分子量大小为105 ku;FAdV-1 Fiber-2蛋白的抗血清孵育LMH细胞后,与阳性对照组相同第4天细胞出现病变,而阴性对照组细胞均无病变。结果表明,FAdV-1 Fiber-2蛋白抗血清在体外试验中不能中和本血清型病毒的感染,FAdV-1 Fiber-2蛋白作为亚单位疫苗的研究存在风险。

羊毛KAPs家族基因及转录因子AP-1调控作用预测的研究进展

羊毛是养殖业重要的畜产品,具有较高的经济价值。角蛋白关联蛋白(KAPs)是羊毛纤维主要的蛋白质成分,包含诸多亚家族,构成了羊毛的主体,同时也决定了羊毛的各类经济性状。羊毛生长发育过程中角蛋白关联蛋白基因(KRTAPs)受到各种转录因子调控,KRTAPs表达具有高度的组织特异性和时空性,转录因子是KRTAPs表达的核心调控因素。本文主要从KAPs分类及其家族基因与羊毛性状的关系、转录因子AP-1的分类和功能以及KRTAPs启动子区域AP-1结合位点的预测等方面进行概述,以期为探究羊毛组分及其基因相关功能和羊毛性状的分子育种提供理论参考。

沉默海马LINGO-1对小鼠学习记忆以及有髓神经纤维的影响

目的:研究沉默海马含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的蛋白-1(LINGO-1)对APP/PS1小鼠空间学习和记忆能力以及海马有髓神经纤维的影响。方法:随机选取18只雄性APP/PS1小鼠,随机分为对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组,通过海马立体定位注射表达LINGO-1-shRNA的重组腺相关病毒rAAV-LINGO-1-shRNA,运用Morris水迷宫方法测试小鼠的空间学习和记忆能力;运用免疫荧光染色和real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1表达水平;运用real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1下游分子RhoA和ROCK的表达水平;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对小鼠海马(CA1~3和齿状回)的体积,海马内有髓神经纤维的长度、髓鞘体积及其损伤情况进行定量研究。结果:与对照组小鼠相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组小鼠的逃避潜伏期显著性缩短,穿台次数显著增多,而目标象限游泳时间及目标象限游泳路程比无显著性改变;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内LINGO-1显著下调,同时其下游RhoA和ROCK的表达水平降低;对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组海马体积无显著性差异;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内有髓神经纤维的长度和正常髓鞘的体积显著性增加,受损的有髓神经纤维占比和受损的髓鞘占比均显著降低。结论:沉默海马LINGO-1能够有效改善APP/PS1小鼠海马依赖的空间学习和记忆能力,抑制RhoA/ROCK的表达,减轻海马内有髓神经纤维及其髓鞘的损伤,这将为阿尔茨海默病的发病及治疗提供新的方向。

PLZT陶瓷纤维/环氧树脂1-3复合材料的制备和性能研究

以乙酸铅、乙酸镧、乙酸氧锆和钛酸丁酯为原料,用溶胶-凝胶法制备了掺镧锆钛酸铅(PLZT)凝胶纤维.该纤维经热解、烧结后成为直径约25μm的陶瓷纤维.陶瓷纤维的表面和断面形貌的电子扫描图象表明,该陶瓷纤维均匀致密.用阿基米德法测得陶瓷纤维的密度为:7.78×103kg/m3.对于直径为4.4mm、厚度为43μm、陶瓷含量为70％的PLZT陶瓷纤维/环氧树脂1-3复合材料压电片,测得其压电常数d33、机电转换常数kt分别为:410pC/N和0.631.

1-3型压电纤维主动叠层板扭转特性的研究

对4类典型铺层的1-3型压电纤维复合材料主动板的变形模式进行了理论分析。在此基础上对具有扭转变形模式的主动叠层板进行了振动特性分析,得到了该类型主动叠层板在外界电场激励下的稳态解。最后对该类主动叠层板的扭转振动特性进行了深入的研究,包括作用电场强度的大小、频率对扭转特性的影响、压电纤维铺层角和压电纤维体积比对主动叠层板扭转特性的影响等。算例表明本文计算模型和有限元得到的结果符合良好,同时算例结果表明含1-3型压电纤维复合材料主动叠层板具有良好的主动扭转特性。

1150nm掺镱光纤激光器输出特性实验研究

以光纤光栅对为激光腔、双包层掺镱光纤为增益介质、976nm半导体激光器为泵浦源,研制全光纤化的1 150nm波段长波光纤激光振荡器.在室温下实现了最大平均输出功率为12.7 W的1 150nm波段单模光纤激光输出,激光振荡器的光光转换效率为42.33%.最大功率输出时,激光中心波长为1 150.48nm,光谱的3dB线宽为0.45nm,边模抑制比达38dB.该研究对研制1 150nm波段高功率光纤激光振荡器具有一定的参考价值.

1-环己基-2-吡咯烷酮用于涤纶染色的初步探讨

合成1-环己基-2-吡咯烷酮并用于涤纶的低温染色,通过对染后织物的沾色情况、牢度等分析,得出1-环己基-2-吡咯烷酮确为一种有效的涤纶染色载体,染中、浅色织物时摩擦牢度和皂洗牢度都能达4级以上,并且其结构中不含苯环等基团,摆脱了通常工业上所使用载体如冬青油等毒性大、嗅味重、生物降解困难及污水多等问题,同时又节省能源,携染效果也不受影响.

烧伤后瘢痕组织中成纤维细胞ET-1表达及血管新生和胶原分布研究

目的研究烧伤后不同时期瘢痕组织中成纤维细胞内皮素1(ET-1)表达以及新生血管形成和胶原纤维分布情况。方法收集烧伤创面愈合后不同时期瘢痕组织标本(发生早期、增生期、消退期、成熟期各8例)和正常皮肤组织标本(正常对照,n=8)作为研究对象。体外分离培养成纤维细胞,RT-PCR半定量检测成纤维细胞中ET-1mRNA的表达情况;新生血管标志物CD34免疫组织化学染色检测瘢痕组织内新生血管形成(CD34阳性细胞面积百分率);Masson三色染色法观察瘢痕组织胶原纤维分布。结果瘢痕组织的发生早期,成纤维细胞ET-1mRNA的表达水平逐渐升高,并于增生期达到高峰,消退期逐步降低,成熟期下降至最低水平。发生早期、增生期、消退期、成熟期瘢痕组织及正常对照组织中CD34阳性细胞面积百分比分别为(1.961±0.159)%、(3.432±0.237)%、(0.412±0.026)%、(0.354±0.025)%和(0.1917±0.018)%,不同时期瘢痕组织间及其与正常对照比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Masson三色染色观察发现,增生期瘢痕组织胶原纤维显著增加,排列致密。结论烧伤后瘢痕发生和演变过程中,成纤维细胞ET-1表达水平呈现发生早期逐步升高、增生期达到高峰、消退期下降的变化,与不同时期瘢痕组织中新生血管形成及胶原纤维分布变化趋势一致。

1150nm波段光纤激光振荡器实验研究

为研制中红外波段掺钬光纤激光器的高功率泵浦光源,设计并搭建了一台中心波长为1150.41 nm的光纤激光振荡器。该光纤激光振荡器的最大平均输出功率为4.55 W,光-光转换效率为43.5%。在最大输出功率时,没有出现放大自发辐射光谱、泵浦光残余和寄生激光振荡,激光光谱的3 dB线宽为O.5 nm,边模抑制比达到38 dB。基于光纤激光振荡技术,有望获得3μm波段掺钬光纤激光器的高功率泵浦光源。

百棉1号纤维初期发育规律及元素含量研究

利用扫描电镜（SEM）与x射线能谱仪（EDS）对河南省审定品种春棉百棉1号初期纤维发育进行观察和元素组分能谱分析,研究棉花纤维初期发育及其所含矿质元素与纤维发育的关系。结果表明：在棉纤维细胞启始阶段（-2-0 d）胚珠表皮细胞迅速分化并在胚珠表面形成球形突起,而且含有较多的P和Mg元素;伸长阶段胚珠表皮细胞发育成纤维并快速伸长,在此阶段纤维细胞含有较多的K和Ca元素,根据棉纤维初期发育与矿质元素的关系在棉花苗期和初花期增施P肥、K肥和Ca肥有利于棉花的优质高产。

蛛网膜下腔出血后鼠脑底动脉内皮素-1能神经纤维的表达变化

本文旨在探讨大鼠蛛网下腔出血(SAH)诱发脑血管痉挛时脑底动脉内皮素-1(endothelin-1,ET-1)能神经纤维的表达变化及其诱发脑血管痉挛的作用。大鼠随机分为正常组、SAH组(3d、14d)。SAH组大鼠取股动脉自体血注入蛛网膜下腔,应用免疫组织化学ABC法,观察正常组、SAH组大鼠脑底动脉ET-1能神经纤维的表达。结果显示正常组大鼠脑底动脉可见棕褐色,细线状ET-1能免疫反应阳性纤维。SAH后3d组大鼠脑底动脉与正常组大鼠脑底动脉比较ET-1能神经纤维密度明显增多,统计学检验(P<0.05);而SAH14d组大鼠脑底动脉ET-1能阳性神经纤维密度与正常组比较无明显变化。以上结果提示脑底动脉ET-1能神经纤维在蛛网膜下腔出血诱发脑血管痉挛的病理生理过程中可能发挥重要的作用。

神经毡蛋白-1在创伤性颅脑损伤伴胫骨骨折愈合过程中的表达变化

目的:观察创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后神经毡蛋白-1(neuropilin-1,Nrp-1)及其受体脑信号蛋白3A(semaphorin 3A,Sema3A)、VEGF在胫骨骨折愈合中的表达变化,探讨Nrp-1在神经损伤后病理性骨痂形成中的作用机制。方法:雌性Wistar大鼠192只,8~10周龄,体重220~250 g,随机分为对照组(C组)、胫骨骨折组(F组)、TBI组、TBI合并胫骨骨折组(TBI+F组),每组48只。每组术后3,5,7,14,21及28 d处死8只大鼠取材。对骨痂中的Nrp-1行免疫组织化学及Western印迹定位、定量检测,对Sema3A及VEGF行Western印迹定量检测。结果:免疫组织化学显示Nrp-1在TBI+F组骨外膜成骨区域及软骨内成骨区域的软骨细胞中的表达较F组增高,尤其在术后7,14和21d(均P<0.05);Nrp-1在F组新生骨小梁周围成骨细胞中的表达较TBI+F组高,尤其在术后14和21 d(均P<0.05);Western印迹检测表明:Nrp-1,Sema3A和VEGF在TBI+F组、F组骨折愈合过程中表达趋势相同,但在各时间点TBI+F组Nrp-1表达量高于F组,下降缓慢,尤其在术后14,21和28 d(均P<0.05),同时TBI+F组Sema3A/VEGF比率高于F组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:神经损伤后Nrp-1在骨折愈合过程中呈异常表达,可能通过促进软骨细胞分化与增殖、阻止神经纤维在软骨痂的长入、降低成骨细胞分化,参与神经损伤后病理性骨痂的形成。

青光安有效组分对兔青光眼术后滤过道瘢痕组织中胶原纤维、成纤维细胞特异性蛋白-1、结缔组织生长因子及转化生长因子-β1表达的影响

目的观察青光安4种有效组分对兔青光眼术后滤过道瘢痕组织中胶原纤维、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,对比青光安4种有效组分及青光安混悬液抗滤过道瘢痕化的效果。方法采用青光眼滤过手术制作动物模型。实验兔按体质量随机分为空白组(A组)、模型组(手术对照组,B组)、丝裂霉素C组(C组)、有效组分1组(D组)、有效组分2组(E组)、有效组分3组(F组)、有效组分4组(G组)和青光安混悬液组(H组)。各给药组给予相应药物。观察各组兔滤过道瘢痕组织中胶原纤维、FSP-1、CTGF、TGF-β1水平。结果术后C、E、H组兔眼压回升缓慢,眼压值较术前和A组差异均有统计学意义(P<0.05);胶原纤维面积比值除B、D、G组外,其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);FSP-1表达除B、G组外,其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);CTGF表达除B、D、G组外,其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β1表达除B、G组外,其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论青光安有效组分2、丝裂霉素C及青光安混悬液通过抑制胶原纤维、FSP-1、CTGF、TGF-β1的表达,降低肌成纤维细胞和成纤维细胞的增殖,从而减少滤过道瘢痕组织的增生,有明显抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用,青光安有效组分2和青光安混悬液抑制滤过道瘢痕化效果基本相当。

外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。

JO-1综合征骨骼肌病理改变(附二例报告)

目的总结2例JO-1综合征患者骨骼肌病理改变特点并分析其发病机制。方法采用组织学、酶组织化学和抗CD68单克隆抗体的免疫组化染色对2例JO-1综合征患者骨骼肌活检标本进行病理观察。结果2例患者骨骼肌存在节段性肌束衣玻璃样变性伴随CD68阳性单核细胞浸润。可见散在或小组样分布的小角状萎缩肌纤维。结论JO-1综合征骨骼肌主要病理改变是节段性结缔组织断裂变性和单核细胞浸润,提示抗原靶点可能在成纤维细胞,并可伴发神经源性骨骼肌损害。

海岛棉杂种F_1纤维比强度的配合力分析及遗传表达特点研究

应用增广ＮＣⅡ设计对１０个海岛棉品种（系）的Ｆ１代纤维比强度进行了分析。配合力分析表明，父本间一般配合力差异显著，特殊配合力间存在着明显差异；海岛棉纤维比强度的遗传主要受加性作用控制，显性作用和上位性作用显著；在非加性方差中，上位性作用比显性作用相对重要些；比强度的狭义遗传力较低。现有亲本中，Ａ杂交铃是比强度最好的亲本。