酮脂酰ACP合成酶(beta-ketoacyl-acyl carrier protein synthase,KAS)是植物脂肪酸生物合成过程中的关键酶系。为探究KAS在油茶种子成熟和油脂积累中的作用,本研究通过生物信息学方法对CoKAS基因家族成员进行鉴定,分析其理化性质、染色...酮脂酰ACP合成酶(beta-ketoacyl-acyl carrier protein synthase,KAS)是植物脂肪酸生物合成过程中的关键酶系。为探究KAS在油茶种子成熟和油脂积累中的作用,本研究通过生物信息学方法对CoKAS基因家族成员进行鉴定,分析其理化性质、染色体定位、亚细胞定位、二级结构、进化关系、保守基序、启动子顺式作用元件,并采用RT-qPCR技术分析油茶果实油脂快速积累期的表达模式。结果表明:鉴定出的14个CoKAS家族成员分布在7条染色体上,相对分子质量在1.13~5.15 kDa之间,且大部分为酸性稳定蛋白。除CoKAS II-2定位于线粒体和叶绿体外,其余均定位于叶绿体。系统发育分析显示CoKAS基因被分为3个亚类,同一亚族成员的基因结构和保守基序具有相似性。CoKAS基因家族成员的启动子区域富含与生长发育、光响应、激素诱导和胁迫应答相关的顺式作用元件。通过表达分析发现,大部分CoKAS基因在油茶种子油脂快速积累期的表达量较高。此外,在油茶果实成熟过程中,CoKAS与CoMYB基因家族间存在有较强相关性的成员。本研究结果为深入解析CoKAS基因在油茶油脂生物合成中的调控机制提供理论基础。展开更多
背景:Siblings家族蛋白为一种外分泌蛋白家族,可由多种细胞分泌至细胞外基质,使其黏附于细胞外基质胶原,反过来作用于细胞,产生相应的生理、病理作用。目的:归纳现阶段关于Siblings家族蛋白在心血管疾病方面的研究。方法:通过计算机对Pu...背景:Siblings家族蛋白为一种外分泌蛋白家族,可由多种细胞分泌至细胞外基质,使其黏附于细胞外基质胶原,反过来作用于细胞,产生相应的生理、病理作用。目的:归纳现阶段关于Siblings家族蛋白在心血管疾病方面的研究。方法:通过计算机对PubMed、Web of Science、Engineering Village及中国知网数据库相关文献进行检索,检索时限为2008年1月至2024年3月,英文检索词为“Current research status,Siblings,Siblings protein family,Cardiovascular,Cardiovascular diseases”;中文检索词为“研究进展、Siblings家族蛋白、心血管、心血管疾病”,依据入选标准对检索结果进行筛选排除,最终纳入76篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)Siblings家族蛋白在心血管多种疾病中起了很大的作用,尤其是在瓣膜钙化、血管硬化的疾病中有十分大的研究潜力。(2)部分Siblings家族蛋白可以沉积钙盐形成羟基磷灰石核心,开始形成微钙化结节,并通过RGD肽段与细胞表面的整合素受体结合促进细胞成骨样分化的正反馈机制,增加自身的表达量。(3)整合素受体可成为治疗心血管钙化性疾病的潜在靶点,临床可通过阻断整合素受体达到延缓钙化进程的目的。展开更多
背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供...背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。展开更多
文摘背景:Siblings家族蛋白为一种外分泌蛋白家族,可由多种细胞分泌至细胞外基质,使其黏附于细胞外基质胶原,反过来作用于细胞,产生相应的生理、病理作用。目的:归纳现阶段关于Siblings家族蛋白在心血管疾病方面的研究。方法:通过计算机对PubMed、Web of Science、Engineering Village及中国知网数据库相关文献进行检索,检索时限为2008年1月至2024年3月,英文检索词为“Current research status,Siblings,Siblings protein family,Cardiovascular,Cardiovascular diseases”;中文检索词为“研究进展、Siblings家族蛋白、心血管、心血管疾病”,依据入选标准对检索结果进行筛选排除,最终纳入76篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)Siblings家族蛋白在心血管多种疾病中起了很大的作用,尤其是在瓣膜钙化、血管硬化的疾病中有十分大的研究潜力。(2)部分Siblings家族蛋白可以沉积钙盐形成羟基磷灰石核心,开始形成微钙化结节,并通过RGD肽段与细胞表面的整合素受体结合促进细胞成骨样分化的正反馈机制,增加自身的表达量。(3)整合素受体可成为治疗心血管钙化性疾病的潜在靶点,临床可通过阻断整合素受体达到延缓钙化进程的目的。
