基于蛋白酶活力的地龙酒制工艺优选

目的优化地龙酒制工艺。方法采用纤维蛋白平板法检测酶活力;以炮制温度、炮制时间、加酒量和焖润时间为考察因素,以蚯蚓纤溶酶活力为考察指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验法优选地龙酒制工艺参数。结果每100kg地龙,加黄酒12.5kg拌匀,焖润30min,70℃翻炒2min时,其酶活力最高(每克31.8万单位)。结论该炮制工艺稳定、可行,可用于地龙的酒制。

纤维蛋白平板法测定纳豆激酶方法的改进

对利用琼脂糖-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活力的方法进行了改进,对测定纳豆激酶活力的标准曲线的规律进行了研究。研究发现,当尿激酶活力在200U/mL～10000U/mL时,尿激酶活力的常用对数lgU与对应的溶圈面积S呈线性相关,其表达式的斜率与孵育时间、孵育温度和平板厚度有关。通过试验确定了测定纳豆激酶活力的最佳孵育时间为15h,此时的酶活测定标准曲线为:lgU=0.0052S+b,b值的确定方法为:将2种标准尿激酶液的酶活力和对应的溶圈面积分别带入标准曲线lgU=0.0052S+b中,分别求出其对应的修正系数b1、b2,以b=b1+2b2为标准曲线lgU=0.0052S+b的修正系数,利用此法计算酶活力的相对误差为0.22%。

纳豆激酶分离纯化与鉴定

为了提高纳豆激酶的溶栓活性 ,从纳豆粗提物中分离纯化了纳豆激酶。采用Butyl Toyopearl柱层析对纳豆粗提物进行了分离纯化 ,以试管法确定和收集了活性部位 ,用纤维蛋白平板法测定了活力 ,并用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS PAGE)对分离纯化的效果进行了检验。考察了纳豆激酶粗提物在不同温度和湿度条件下的稳定性。结果表明在SDS PAGE中观察到三条明显的蛋白谱带 ,其中相对分子质量为 192 75和 2 710 1的区带具有与文献报道类似的纳豆激酶的相对分子质量和纤溶活性 ,而相对分子质量为 14 4 0 0的蛋白区带与文献报道的纳豆激酶的相对分子质量大有差异。纯化倍数为 5 0倍 ,活性回收率为 75 .5 7%。初步稳定性实验结果表明 :其外观在 4 0℃和 6 0℃保存条件下发生变化 ,纤溶活力在 6 0℃保存条件下发生显著变化。而 4℃条件下活力和外观却很少有变化 ;纳豆粗提物在不同湿度条件下均具有较强吸湿性。纳豆粗提物对高温和高湿稳定性较差。

薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法对纤溶酶活性的体外检测

用薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法体外检测了6种市售心血管药物的纤溶酶活性,结果与所检测药物的相关药理作用相符,表明薄层聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法能够准确、可靠地进行纤溶酶活性的体外检测.

两种纳豆激酶活性测定方法对比及相关性分析

从线性和精密度两个方面对纤维蛋白平板法和四肽底物法测定纳豆激酶活性的两种方法进行了比较研究,并验证了两种方法测定值之间的直线相关性。结果表明:纤维蛋白平板法和四肽底物法分别在10.77IU/mL～80.73IU/mL和0.03U/mL～0.09U/mL浓度范围内呈线性,且日间和日内变异系数均小于10%。两者结果具有直线相关性,其关系为纤维蛋白平板法测定值(IU)=264.87×四肽底物法测定值(U)-19.633,(R2=0.9942)。结论:纤维蛋白平板法与四肽底物法均能用于纳豆激酶活性测定,前者测定结果直接,但四肽底物法更灵敏,还可应用于高通量筛选。

纳豆菌(Bacillus natto)纤溶活性分析

通过纤维平板法测定了纳豆菌（ＢａｃｉｌｕｓＮａｔｏ）的裂解纤维凝块抗血栓活性。同时，初步探索了该菌抗血栓有效成份—纳豆激酶（Ｎａｔｏｋｉｎａｓｅ）在３７℃下产率最高，该菌的液体培养５０ｈ左右酶活性最佳。并查明该酶在培养液ｐＨ为６．３０～１０．８０。

纳豆激酶的纯化及活力测定

利用SephadexG—100s柱凝胶层析法从纳豆菌（BacillusNatto）提取液中分离纯化出具有体外活性的纳豆激酶，并通过纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，发现其具有较强的促进纤维凝块溶解的作用。

溶栓丸水浸液药理作用的初步研究

本文报道了溶栓丸水浸液对血块、纤维蛋白溶解作用及降压作用。

中国根霉12~#纤溶酶活力单位的测定

主要阐述了根霉纤溶酶活性 (效价 )的测定方法 ,采用血纤维蛋白平板法 ,在以尿激酶为参照标准的情况下 。

大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶的研究

为研究大孔吸附树脂提取中药地龙中蚓纤维蛋白溶酶,通过对 6种树脂的吸附容量,吸附平衡时间,洗脱液等条件进行考察,筛选出了D4020和D3520两种分离效果较好的树脂。

高产纳豆激酶突变菌株产酶条件的研究

为了获得最佳产酶条件,通过研究不同碳源(葡萄糖、木糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉),氮源(牛肉膏、蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、硫酸铵),碳氮浓度比和无机离子组成的培养基发酵,利用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性。得到纳豆激酶的最佳产酶条件为:1.5%蛋白胨,1.5%麦芽糖,0.05%硫酸镁,0.2%氯化钙,0.2%磷酸二氢钠和0.1%磷酸氢二钠;碳氮浓度比为1∶1。

纳豆激酶活性测定的方法学研究

目的:确定一种测定纳豆激酶活性的方法。方法:建立琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶的活性,并对本法与纤维蛋白平板法、琼脂糖．纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性的特点进行了比较。结果:琼脂粉-纤维蛋白平板法测定纳豆激酶活性,具有溶圈明显、易于测量、机械强度好、操作简便、成本低等优点,该法的测定下限为55IU·mL^(-1),精确测定范围为326．6～2 200IU·mL^(-1)。结论:琼脂粉-纤维蛋白平板法可以测定纳豆激酶的活性。

响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺

采用响应面法确定固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件,为发酵鹰嘴豆的进一步开发利用提供技术参考。在单因素试验的基础上,以pH值、发酵时间和发酵温度为影响因素,以发酵鹰嘴豆的溶栓活力为响应值,根据中心组合试验原理设计(Central Composite Design)3因素3水平响应面试验,对固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的工艺进行优化。通过响应面分析建立发酵鹰嘴豆溶栓活力(Y)对pH值(A)、发酵时间(B)、发酵温度(C)的二次回归模型:Y=1861.47-74.56A+305.50B-28.82C+203.66AB+30.82AC-18.16BC-244.11A^2-203.68B2-70.64C^2(R^2=0.9981),模型的拟合程度良好,其中pH值、发酵时间、发酵温度对发酵鹰嘴豆的溶栓活力均有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵时间的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力也有极显著的影响(P<0.01),pH值与发酵温度的交互作用对发酵鹰嘴豆的溶栓活力则表现出显著的影响(P<0.05)。固载纳豆菌发酵鹰嘴豆的最佳工艺条件为:在pH 6.5、发酵时间58.5h、发酵温度37.5℃的条件下进行发酵,得到的发酵鹰嘴豆的溶栓活力达1976.24IU/g,与理论预测值1989.13IU/g接近。采用响应面法优化固载纳豆菌发酵鹰嘴豆工艺溶栓活力良好,优化后的新工艺可在实际生产中推广应用,并作为新型溶栓保健功能食品大规模在市场上推广。

基于分光光度法构建纳豆激酶纤溶活性快速测定方法

为建立一种快捷、有效的纳豆激酶纤溶活性测定方法,在研究纤维蛋白平板法的基础上,构建了以透明圈面积为中间参数的纳豆激酶纤溶活力与吸光度值之间关系模型,通过测定纳豆激酶显色反应中的吸光度值,直接获得纳豆激酶的纤溶活性。结果显示改进后的酪蛋白方法可行,其模型方程为y=1877.77x-481.08(R2=0.9924)。验证结果显示模型相关性强,准确度较高,操作简便、快速、检测成本低,是一种高效的纳豆激酶纤溶活性快速检测方法。

一种改良的纤维平板法

介绍一种改良的用以快速地定性和半定量检测纤溶活性蛋白的纤维平板法.对该方法中的几个关键因素作了详细的研究和探讨.纤维平板中纤维蛋白原和纤溶酶原的浓度对裂解面积不产生任何影响,但是纤维蛋白原的浓度会对裂解圈的观察产生影响,纤维蛋白原浓度低于0.2 mg/mL时会使背景色过淡而不能清晰地观察到裂解圈.尿激酶浓度在2～250 mU/μL范围时,尿激酶浓度的对数和裂解圈相互垂直的两条直径乘积的对数之间存在明显的线性关系.在本实验设计方案下,尿激酶的最佳使用浓度为10～20 mU/μL.同时,本文还探讨了纤维平板中纤溶酶原的去活条件,当琼脂纤维平板凝固后很难完全去活纤溶酶原,但是,在琼脂纤维蛋白原混合物凝固前于95℃持续温浴40 min,则能彻底去活纤维蛋白原中残留的纤溶酶原.

瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究

目的评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法。方法分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法,测定同一批瑞替普酶样品的生物活性。结果4种测活方法的误差分别为10%,3%,3%和6%,表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性。结论平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好,特异性好,灵敏度高,较适合测定瑞替普酶活性的要求。

溶栓Ⅰ号抗血栓作用的研究

采用体外溶栓法、纤维蛋白平板法及家兔颈动脉血栓形成法 ,观察溶栓Ⅰ号的溶栓作用 .结果表明 :溶栓Ⅰ号可以溶解体外血栓 ;对正常及加热纤维蛋白平板均有溶解作用 ;

慢性扁桃体炎组织中的纤溶酶原激活剂测定

目的 :为探讨蛋白分解酶在扁桃体炎发展和转归中所起的作用。方法 :运用纤维蛋白平板的方法对 19例慢性扁桃体炎患者的扁桃体组织进行初步研究。结果 :慢性扁桃体炎的扁桃体组织中有纤溶酶原激活物的活性 ,平均比活性值为(2 2 8.847± 2 2 7.90 5 ) mm2 /μg。结论 :提示抗纤溶疗法是治疗慢性扁桃体炎很有潜力的手段。

不同纳豆产品纳豆激酶纤溶活性的比较

本研究对不同品牌纳豆产品的纳豆激酶的纤溶活性进行了比较,并检测了纳豆激酶的pH稳定性和热稳定性.在实验室条件下,通过盐析法浸提、硫酸铵分级沉淀,从纳豆中提取纳豆激酶,通过建立琼脂糖—纤维蛋白板对样品进行点样试验,测其纤溶活性并比较.结果表明,美屋大粒纳豆和美屋黑粒纳豆的纳豆激酶纤溶活性较高;纳豆激酶的纤溶活性最适pH为8,当pH<5时,纳豆激酶失去活性;纳豆激酶在40℃以下时活性稳定,超过70℃,酶活力显著下降.