鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的:建立一套可靠的鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究间质性肺病的发病机制及治疗方法。方法:采用胰酶消化出生后2 d SD大鼠肺组织块及SD大鼠肺泡灌洗液,经差时贴壁法,分离、纯化红皮鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)和SD大鼠肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,AM),并进行原代培养。用波形蛋白(Vimentin)、CD14细胞免疫荧光染色、蛋白质印迹和电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果:所得细胞产量大、纯度高。细胞免疫荧光染色LF细胞波形蛋白染色阳性而CD14染色阴性;AM细胞则相反。扫描电镜观察可见肺成纤维细胞有微绒毛,细胞间连接成网状,蛋白质印迹结果显示波形蛋白表达。结论:该方法是一种可靠的红皮鼠肺成纤维细胞及大鼠肺巨噬细胞的分离纯化培养技术,可用于间质性肺病(interstitial lung disease,ILD)的发病机制及治疗方法的体外研究。

维甲酸下调高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞MMP-2表达

目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2 (MMP -2 )表达的影响及调控。方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA组。于培养2、6、12、2 4和4 8(AECⅡ)或72h(LFs)时,采用半定量RT- PCR方法检测MMP 2和TIMP 2mRNA表达,应用Westernblot检测p38和磷酸化p38(p p38)蛋白表达水平。结果(1)与空气组比较,高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA和胎鼠LFsp p38表达(P <0 . 0 1或P <0. 0 5 ) ;(2 )RA能部分下调高氧诱导的胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA高表达和明显降低胎鼠LFsp p38表达;(3)高氧、RA对胎鼠LFs、AECⅡTIMP -2mRNA和胎鼠LFsp38蛋白表达无明显影响;(4)胎鼠LFsp p38与MMP 2mRNA表达呈显著性正相关(r =0. 76 7,P <0. 0 1,n =18)。结论高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA表达;p38通路参与高氧状态下胎鼠LFsMMP -2表达调控;RA可在转录后水平调节p38的活性状态从而实现对MMP-2的表达调控。

红景天素抗老化作用的实验研究

本实验以体内、外相结合的研究方法,探讨了药用植物红景天提取物—红景天素对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)和大鼠肝脏的影响,观察了红景天素对2BS细胞生长和增殖的影响,以及对大鼠肝脏细胞形态和组化改变和肝组织中过氧化脂质(LPO)与肝血清超氧化物歧化酶(SOD)的变化。实验结果是红景天素能促进2BS细胞生长和增殖,降低大鼠肝组织LPO及肝细胞内脂褐素含量及酸性磷酸酶活性(ACPase)。结果证明红景天素有延缓细胞老化抗退变作用。

穿山龙水溶性总皂苷对RA细胞模型及其下游因子的影响

目的:观察穿山龙水溶性总皂苷对TNF-α加IL-17诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364核转录因子NF-κB活化的调控作用及下游基因TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3分泌的影响。方法:用IL-17加TNF-α刺激RSC-364建立类风湿性关节炎(RA)细胞模型,以不同浓度穿山龙水溶性总皂苷干预,采用半定量RT-PCR的方法检测各组NF-κBp65基因和IκB-α基因的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3蛋白水平的变化。结果:穿山龙水溶性总皂苷可呈浓度依赖性抑制TNF-α加IL-17刺激的RSC-364中NF-κBp65的活化,提升IκB-α的表达,并抑制TNF-α、IL-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-3的分泌。结论:穿山龙水溶性总皂苷可抑制NF-κB通路的活化,阻碍下游多种基因的分泌与活化,提示其可能具有抑制RA滑膜炎症的作用。

薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核转录因子-κBp65表达的影响

目的:观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎细胞模型核转录因子NF-κBp65及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:用白介素-17(IL-17)+TNF-α共同孵育大鼠RSC-364细胞,以不同浓度薯蓣皂苷片进行干预,MTT法检测不同药物浓度对细胞存活率影响,采用Western blot检测各组NF-κBp65及其抑制蛋白(IκB-α)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中VEGF、MMP-9、TNF-α蛋白水平的变化。结果:薯蓣皂苷片可促进κB抑制蛋白的表达量,降低NF-κB蛋白水平的高表达,并降低细胞分泌VEGF、MMP-9、TNF-α水平。结论:薯蓣皂苷片对RSC-364细胞核因子κB有负向调节作用,提升IκB-α的表达并能降低炎性因子和血管新生因子分泌,提示其在类风湿发病中可能起到潜在的调节作用。

保护素对原代肺成纤维细胞炎症及纤维化增殖的影响

目的:探讨保护素(PDX)对脂多糖(LPS)诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导其纤维化增殖转化的影响。方法:分离、纯化、鉴定得到小鼠肺成纤维细胞,用LPS诱导建立成纤维细胞体外炎症模型,用TGF-β_1诱导建立体外纤维化增殖模型。PDX分别作用于经过LPS或TGF-β_1诱导的原代肺成纤维细胞。采用细胞浓度试剂盒测定细胞增殖,采用实时定量PCR测定基因表达,采用ELISA法检测细胞上清液前列腺素E_2(PGE_2)水平,应用Western blot检测COX-2蛋白的表达。结果:采用10ng/mL TGF-β_1刺激诱导体外培养的原代肺成纤维细胞48h能建立较为合理的体外纤维化增殖模型。PDX抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞COX-2蛋白的表达及上清液PGE_2水平,同时可能通过剂量依赖方式抑制TGF-β_1诱导的原代肺成纤维细胞的增殖。PDX抑制TGF-β_1诱导的原代肺成纤维细胞collagen 1α_1、collagen 1α_2的合成以及α-SMA、纤连蛋白的基因表达。结论:PDX能抑制LPS诱导的小鼠原代肺成纤维细胞COX-2表达及PGE_2水平,同时能抑制TGF-β_1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞纤维化增殖、胶原蛋白合成及向肌成纤维细胞转化。

正常及炎症牙髓组织中白细胞介素1的活性检测

用细菌内毒素建立豚鼠的牙髓炎模型，借助体外培养的Ｌ９２９细胞，在培养液中加入正常和炎症的牙髓组织上清液，采用成纤维细胞增殖法测定正常和炎症牙髓组织中白细胞介素１（ＩＬ１）的活性。结果发现正常牙髓组织无ＩＬ１的活性，炎症牙髓组织产生明显的ＩＬ１活性，并随内毒素诱导时间的延长而增强。ＩＬ１为牙髓炎的主要介质之一，介导了牙髓炎的发生和发展。

高氧、维甲酸对胎鼠肺角化细胞生长因子及其受体表达的影响

目的 探讨高氧、维甲酸 (RA)对胎鼠肺成纤维细胞 (LFs)和肺泡II型上皮细胞 (AECII)角化细胞生长因子 (KGF)及其受体 (KGFR)表达的影响。方法 原代培养胎鼠肺LFs及AECII ,待生长至亚汇合状态时 ,随机分为 :空气组 ,空气 +RA组 ,高氧组 ,高氧 +RA组。于培养 2、6、12、2 4、4 8(AECII)和 72h(LFs)时 ,采用半定量RT -PCR方法检测KGF和KGFR的mRNA表达。结果 与空气组比较 ,高氧 2h时 ,胎鼠LFsKGFmRNA表达即明显下降 ,6h时达极点 ,以后下降趋势逐渐减弱 ,至 4 8h后已无显著性差异 ;高氧 2、6、12和 2 4h时 ,其下降幅度分别为 3 0、5 2、2 3和 2 1倍 (P <0 0 5、0 0 1、0 0 1和 0 0 5 )。RA可上调高氧状态下胎鼠LFsKGFmRNA表达 ,与高氧组比较 ,高氧 +RA组在 2、6、12和 2 4h时KGFmRNA表达分别是高氧组的 2 4、3 4、1 7和 1 8倍 (P <0 0 5、0 0 1、0 0 1和 0 0 5 )。高氧对胎鼠AECIIKGFRmRNA表达影响较小 ,与空气组比较 ,仅在高氧 12h和 2 4h时其表达量分别是空气组的 2 3和 1 3倍 (P <0 0 5 ) ;RA对AECIIKGFRmRNA表达没有影响。

细胞直接共培养模型在大鼠肺成纤维细胞转分化中的应用

目的:探讨细胞直接共培养模型在大鼠肺成纤维细胞转分化研究中的应用价值。方法:分离SD大鼠肺巨噬细胞和成纤维细胞,采用ThinCertTM进行共培养,并分为4组:对照组加入无SiO2粉尘的培养基,SiO2低、中、高剂量处理组分别加入终质量浓度为25、50和100mg/L的SiO2粉尘悬液,培养24h后,收集成纤维细胞和培养上清,分别采用real-time PCR检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)的mRNA水平,ELISA法测定培养上清中α-SMA、COLⅠ和COLⅢ蛋白。结果:SiO2处理组的α-SMA、COLⅠ和COLⅢmRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,且随SiO2质量浓度的升高,α-SMA、COLⅠ和COLⅢmRNA和蛋白的表达水平有升高的趋势(P<0.05)。结论:细胞直接共培养模型可用于大鼠肺成纤维细胞转分化的研究。

羟基喜树碱对人胚肺成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HFL1)增殖与凋亡的影响。方法:常规培养HFL1细胞,以未加HCPT的HFL1为对照组,以不同浓度梯度(0.008～32 mg/L)HCPT处理的HFL1作为实验组,采用MTT法检测HCPT干预24、48、72 h后HFL1的增殖情况;光学显微镜观察干预后细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜下观察细胞凋亡的改变。结果:HCPT对HFL1有明显的抑制作用,在一定程度上呈现剂量-时间依赖性;HCPT处理组HFL1凋亡率较阴性对照组显著升高(F=399.51,P<0.01),并呈药物浓度依赖性。HCPT 0.5 mg/L作用HFL1 48 h,透射电镜下可见细胞缩小,核仁消失,染色质浓聚的凋亡状态。结论:HCPT在体外通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制HFL1的生长。

硒抑瘤作用的实验研究

亚硒酸钠对胃癌细胞系SGC—7901有54％的杀伤能力,对人早幼粒白血病细胞(HL—60)生长有明显抑制作用。单独用于治疗小鼠移植性肿瘤S_(180)无效,联合大蒜治疗有较好效果。有可能硒是通过诱导癌细胞(如HL—60细胞)的成熟分化和阻断某些致癌物质(如MNNG)对正常细胞恶性转化,它能否起防癌作用值得进一步研究。

^(238)Pu α粒子体外照射肺巨噬细胞的生物效应及致肺成纤维细胞恶性转化的实验研究

本文综合报道了^(238)Puα粒子体外照射所致肺巨噬细胞(AM)及类巨噬细胞系 P388D_1细胞免疫功能的改变以及对肺成纤维细胞恶性转化的剂量效应关系的实验研究结果。从卡介苗(BCG)激活的大鼠肺中灌洗出的肺巨噬细胞,在体外经^(60)Co γ射线照射后,对 Hela 细胞和人肺腺癌细胞的细胞毒效应降低,降低程度与剂量(100—500Gy)呈依赖关系,同时还看到 AM细胞膜完整性的损伤。以类巨噬细胞系 P388D_1细胞作为 AM 的模拟细胞,在体外经^(238)Puα粒子照射(0.3—6.0Gy)后,观察到 EA 花环形成率、特异吞噬功能在受到0.3Gy剂量照射后受抑制,且抑制程度与剂量有依赖关系,细胞膜也受到损伤。在培养体系中加入膜保护剂——硒后,上述两类细胞的免疫功能抑制程度减轻,提示膜的完整性在巨噬细胞的免疫功能表达中起重要作用。文中还对AM 在辐射诱发肺癌中的作用进行了讨论。用^(238)Puα粒子和 X 射线分别照射成年大鼠肺成纤维细胞系(WAL-F_1),其剂量分别为0.01—1.5Gy 和0.5—5.0Gy,进行形态转化、ConA 凝集试验、染色体畸变、半固体琼脂培养集落形成以及转化细胞移植后的致癌性等方面的实验观察。结果证实 X 射线和α粒子均可诱发 WAL-F_1细胞恶性转化,以 X 射线为参比.^(238)Puα粒子的 RBE 约为6。

大鼠肺成纤维细胞原代分离培养方法优化

目的:探索大鼠肺成纤维细胞(PFs)快速分离培养方法,为肺纤维化体外研究提供更为科学便利的技术支持。方法:取新生SD大鼠肺组织,采用Ⅱ型胶原酶/胰酶混合酶消化法,应用显微镜对每次组织消化细胞悬液及沉淀进行观察分析,选择性收集细胞悬液,同时对细胞差速贴壁时间进行梯度分组,优化最佳细胞贴壁时间节点,应用考马斯亮蓝染色观察细胞形态的均一性,应用波形蛋白标记鉴定PFs的纯度,应用α-平滑肌肌动蛋白标记鉴定细胞的分化能力,绘制细胞生长曲线检测细胞生长活性。结果:新生SD大鼠肺组织经前2次8 min消化,细胞悬液中主要为血细胞成分,沉淀多为血凝块和实质性组织成分;第3~6次消化后的细胞悬液主要为有核细胞成分,消化液沉淀多为胶原、黏连蛋白等基质团块。选择第3~6次消化细胞悬液进行差速贴壁分离细胞,综合细胞数量和细胞纯度分析,35 min差速贴壁最为理想,细胞活性较好,第1~4代细胞24 h达到对数生长期。结论:采用分次酶消化组织,有目的性地选取细胞悬液,35 min差速贴壁分离PFs,培养效果较好。

高氧对胎鼠肺成纤维细胞p53和增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨高氧对胎鼠肺成纤维细胞(LFs)p53和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法原代培养胎鼠肺LFs,待生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组和高氧组(95%O2/5%CO2)。于培养12 h和24 h时,采用噻唑蓝(MTT)实验测定细胞增殖状况,半定量RT-PCR方法检测p53 mRNA表达,Western blot技术检测p53和PCNA蛋白的表达。结果 (1)与空气组比较,高氧组12 h和24 h的LFs生长抑制率分别为8%和23%;(2)高氧组在12 h和24 h时p53 mRNA表达明显高于空气组(P<0.01);(3)高氧组在12 h和24 h时p53蛋白表达明显高于空气组(P<0.01),而PCNA蛋白表达水平在24 h明显低于空气组(P<0.01)。结论高氧暴露抑制PCNA表达、促进p53表达,从而抑制LFs增殖和DNA复制,是导致肺发育异常的重要因素。

原代培养人肺癌相关成纤维细胞对肺癌细胞放射敏感性影响研究

目的 探讨在体外直接接触共培养条件下人肺癌相关成纤维细胞（CAF）对肺癌细胞系放射敏感性的影响.方法 采用人肺癌组织进行原代培养后获取人肺CAF,采用免疫荧光技术鉴定.CAF与肺癌细胞系A549、H1299进行直接接触共培养,采用细胞克隆形成实验观察其对肺癌细胞系放射敏感性的影响.结果 新鲜人肺腺癌经组织块贴壁法原代培养出可稳定传代的CAF,其特异表达α-平滑肌肌动蛋白、波行蛋白和成纤维细胞活化蛋白,而无细胞角质蛋白-18表达.在0 Gy照射时单独组和共培养组A549细胞的克隆形成率分别为（20.0±3.9）％和（32.3±5.5）％（P＜0.05）,H1299细胞的分别为（20.6±3.1）％和（35.2±2.3）％（P＜0.05）.单独组和共培养组A549细胞的SF2分别为0.727 ±0.061和0.782±0.089（P＞0.05）,H1299细胞分别为0.692±0.065和0.782±0.037（P＞0.05）;人肺CAF对A549、H1299细胞的放射保护增益比分别为1.29和1.25.结论 人肺CAF与肺癌细胞系直接接触共培养后使肺癌细胞放射敏感性降低,原因可能为CAF促进了肿瘤细胞增殖.

电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨电针足三里对严重烫伤致大鼠急性肺损伤的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组（n=8）：对照组、烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-银环蛇毒素组（α-BGT组）.对照组尾静脉注射生理盐水1 ml.烫伤组、足三里组、非经非穴组和α-BGT组先制备30%总体表面积Ⅲ度烫伤模型,然后烫伤组尾静脉注射生理盐水1 ml;足三里组于双侧足三里穴垂直进针7 mm,给予脉冲电流（电压3V,电流2ms,频率3 Hz）持续刺激12 mim,间隔8 h刺激1次,持续2 d;非经非穴组于双侧足三里穴旁5mm处给予脉冲刺激,方法同足三里组;α-BGT组尾静脉注射α-BGT 1.0 μg/kg,再于双侧足三里穴给予脉冲刺激,方法同足三里组.各组处理结束后,处死大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,电镜下观察超微结构,采用ELISA法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGBl）含量,采用免疫组化法测定HMGBl蛋白表达,采用RT-PCR法测定HMGBl mRNA表达.结果 烫伤组肺组织光镜下可见肺泡壁崩解,泡内大量渗出液,间质水肿、肥厚和增生,伴大量炎性细胞浸润;电镜下可见细胞核形态不规则,核膜僵硬,部分凸凹不平和核溶解,胞质内板层小体明显减少,肺组织病理损伤程度较对照组减轻.与对照组比较,烫伤组、非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）,足三里组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）;与烫伤组比较,足三里组肺组织HMGBl含量降低,HMGBl蛋白及其mRNA的表达下调,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl mRNA表达下调（P〈0.05）;与足三里组比较,非经非穴组和α-BGT组肺组织HMGBl含量升高,HMGBl蛋白及其mRNA的表达上调（P〈0.05）.结论 电针足三里可减轻严重烫伤致大鼠急性肺损伤,其机制与激活含α7亚基N型胆碱能受体介导的胆碱能抗炎通路,抑制肺组织HMGBl的表达有关.

不同标本处理方法降低COPD模型SD大鼠肺成纤维细胞原代培养过程中污染率的实验研究

目的:通过对比不同方法处理COPD模型大鼠肺组织,寻找适当方法减少在COPD模型大鼠细胞培养中的污染机会,提高细胞培养成功率。方法:将同一COPD模型大鼠肺组织分成两部分,分别用不同方法对其预处理,用组织块培养法进行原代细胞培养,观察第24h、72h及后续培养情况。结果:经过刮除肺叶及气管内膜的组织原代细胞培养组污染率较直接组织培养的要低,肺叶培养污染率为100%。结论:(1)刮除肺叶及气管内膜的方法有助于减少COPD模型大鼠原代细胞培养组织法的污染;(2)COPD模型大鼠肺成纤维细胞原代培养的污染来源主要为肺部感染灶。

miR-149靶向抑制胰岛β细胞中FGF21表达对胰岛素分泌的影响及机制研究

【目的】探讨胰岛β细胞中miR-149对成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)靶向调控作用及抑制胰岛素分泌的作用机制,以期更好地了解糖尿病发病机制并为糖尿病诊断治疗提供新靶点。【方法】生物信息学预测靶向调控FGF21的miRNA;双荧光素酶报告基因检测实验验证靶向调节关系;q PCR检测大鼠胰岛素瘤细胞株(rat insulin-secreting betacell line,INS-1)胰岛β细胞中miR-149与FGF21 mRNA表达;应用酸醇提取INS-1胰岛β细胞中胰岛素,放射免疫法检测细胞内胰岛素含量;分别用5.6、16.7 mmol/L葡萄糖建立基础糖刺激胰岛素分泌模型(basal insulin secretion model,BIS)、高糖刺激胰岛素分泌模型(high glucose stimulates insulin secretion model,GSIS),放射免疫法测定各处理组胰岛素分泌量;western blotting检测INS-1胰岛β细胞中FGF21、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK的表达。【结果】MiR-149是潜在靶向调控FGF21的miRNA,其过表达可显著抑制FGF21荧光素酶活性,FGF21 3'URT中miR-149结合位点突变后荧光素酶活性恢复。过表达miR-149靶向抑制FGF21 mRNA与蛋白表达,进而降低INS-1细胞内胰岛素含量及分泌量,而外源过表达FGF21恢复了miR-149的抑制作用。MiR-149可靶向FGF21表达抑制其下游JNK、ERK信号通路活性。【结论】本研究揭示了在INS-1胰岛β细胞中,miR-149可通过直接靶向FGF21阻断其下游JNK、ERK信号通路抑制胰岛β细胞分泌胰岛素,进一步揭示了糖尿病发生发展恶化机制,为临床诊断治疗提供了新思路。

低血清培养基培养人胚肺二倍体细胞(2BS株)及其增殖甲型肝炎病毒的初步研究

目的研究2种低血清培养基对人胚肺二倍体细胞(2BS株)的培养效果及甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)在低血清培养基中的增殖情况。方法使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清培养细胞,显微镜下观察细胞形态、贴壁情况,细胞计数并绘制生长曲线;优化低血清培养基B的血清浓度;使用5层细胞工厂连续传代培养,放大低血清培养基细胞培养工艺;使用低血清培养基连续进行3次细胞传代后接种HAV,检测病毒滴度。结果使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清,细胞生长密度峰值分别为1.55×10^(5)、2.07×10^(5)和1.30×10^(5)个/cm^(2),统计学分析表明,低血清培养基B+5%新生牛血清达到细胞生长密度峰值高于低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清,差异具有统计学意义(P均<0.05);低血清培养基B+5%新生牛血清同B+3%新生牛血清连续培养3代细胞生长密度差异均无统计学意义(P=0.47、0.07、0.12);使用5层细胞工厂培养细胞,低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清连续培养3代,细胞生长密度均高于E-MEM+10%新生牛血清;低血清培养基B+3%新生牛血清与低血清培养基B+5%新生牛血清的病毒滴度分别为9.50和9.33 lgCCID_(50)/mL,低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清的病毒滴度分别为8.50和9.00 lgCCID_(50)/mL。结论低血清培养基适用于培养2BS细胞增殖HAV,为低血清培养基在甲肝疫苗生产中的应用奠定了基础。