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新风胶囊通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路减轻RA-FLS诱导的HUVEC血管新生反应
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作者 刘菲菲 汪元 +3 位作者 刘健 黄传兵 黄旦 孙艳秋 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1057-1066,共10页
目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及其作用机制。方法建立RA-FLS与HUVEC共培养体外模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清;CCK-8法筛选最佳共培养比例和XFC含... 目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管新生的影响及其作用机制。方法建立RA-FLS与HUVEC共培养体外模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清;CCK-8法筛选最佳共培养比例和XFC含药血清浓度;构建lncRNA HOTAIR过表达质粒(pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR)及阴性对照组,转染至RA-FLS中。实验分为HUVEC对照组、模型组(HUVEC和RA-FLS共培养)、XFC组(200 mL/L XFC处理共培养RA-FLS)、HOTAIR阴性对照组(pcDNA3.1-NC转染共培养RA-FLS)、HOTAIR过表达组(pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染共培养RA-FLS)、XFC处理的HOTAIR过表达组(200 mL/L XFC处理pcDNA3.1-lncRNA HOTAIR转染的共培养RA-FLS)。采用CCK-8法检测HUVEC增殖能力;Transwell TM法检测HUVEC迁移能力;小管形成实验检测HUVEC成管能力;流式细胞术检测HUVEC中CD34及CD105的表达;实时定量PCR检测HUVEC中lncRNA HOTAIR、miR-126-3p、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、PI3K受体2(PIK3R2)、AKT、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达;Western blot法和免疫荧光技术检测HUVEC中PI3K、AKT、p-AKT、VEGF、bFGF蛋白表达。结果CCK-8法结果显示,RA-FLS与HUVEC最佳处理比例和时间分别为5∶1和48 h,XFC的最佳干预浓度和时间分别为200 mL/L和48 h。与对照组相比,模型组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调,miR-126-3p显著下调;与模型组相比,XFC组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调,miR-126-3p显著上调;与HOTAIR阴性对照组相比,HOTAIR过表达组,HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著提高,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显上调,miR-126-3p显著下调;与HOTAIR过表达组相比,XFC处理的HOTAIR过表达组HUVEC增殖、迁移、成管能力及CD34和CD105水平显著下降,lncRNA HOTAIR、PIK3R2、VEGF、bFGF、PI3K、AKT、p-AKT的表达明显下调,miR-126-3p显著上调。结论XFC含药血清可能通过抑制lncRNA HOTAIR/PI3K/AKT通路的表达,降低VEGF、bFGF的表达水平,减轻关节滑膜血管新生而发挥治疗作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 新风胶囊(XFC) 人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 滑膜成纤维细胞(fls) 长链非编码RNA同源盒转录本基因间RNA(lncRNA HOTAIR) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) 蛋白激酶B(AKT) 血管新生
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Synovial mesenchymal stem cells in vivo:Potential key players for joint regeneration
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作者 Elena Jones Dennis McGonagle 《World Journal of Rheumatology》 2011年第1期4-11,共8页
Unlike bone marrow(BM)mesenchymal stem cells(MSCs),whose in vivo identity has been actively explored in recent years,the biology of MSCs in the synovium remains poorly understood.Synovial MSCs may be of great importan... Unlike bone marrow(BM)mesenchymal stem cells(MSCs),whose in vivo identity has been actively explored in recent years,the biology of MSCs in the synovium remains poorly understood.Synovial MSCs may be of great importance to rheumatology and orthopedics because of the direct proximity and accessibility of the synovium to cartilage,ligament,and meniscus.Their excellent chondrogenic capabilities and suggested transit through the synovial fluid,giving unhindered access to the joint surface,further support a pivotal role for synovial MSCs in homeostatic joint repair.This review highlights several unresolved issues pertaining to synovial MSC isolation,topography,and their relationship with pericytes,synovial fibroblasts,and synovial fluid MSCs.Critically reviewing published data on synovial MSCs,we also draw from our experience of exploring the in vivo biology of MSCs in the BM to highlight key differences.Extending our knowledge of synovial MSCs in vivo could lead to novel therapeutic strategies for arthritic diseases. 展开更多
关键词 MESENCHYMAL stem cells SYNOVIUM fibroblastS synovial fluid ARTHRITIS
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靶向成纤维细胞生长因子受体1信号改善类风湿关节炎的骨破坏
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作者 韩海慧 冉磊 +5 位作者 孟晓辉 辛鹏飞 向峥 边艳琴 施杞 肖涟波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第9期1905-1912,共8页
背景:尽管科研人员已注意到成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中展现出巨大潜力,但尚未有学者对成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的研究进展作全面综述。目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析成纤维细胞生长... 背景:尽管科研人员已注意到成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中展现出巨大潜力,但尚未有学者对成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的研究进展作全面综述。目的:通过查阅国内外相关文献,综合分析成纤维细胞生长因子受体1在类风湿关节炎骨破坏中的机制。方法:以“成纤维细胞生长因子受体1,类风湿关节炎,骨破坏,骨细胞,成骨细胞,破骨细胞,软骨细胞,巨噬细胞,滑膜成纤维细胞,T细胞,血管内皮细胞”为检索词检索中国知网数据库,以“fibroblast growth factor receptor 1,rheumatoid arthritis,bone destruction,osteocytes,osteoblasts,osteoclasts,chondrocytes,macrophages,synovial fibroblasts,T cells,endothelial cells”为检索词检索PubMed数据库,检索时间范围重点为1992年4月至2024年1月。通过阅读文献题目、摘要及全文,根据纳入与排除标准进行筛选,最后纳入82篇文献进行综述。结果与结论:成纤维细胞生长因子受体1广泛表达于骨组织相关细胞,包括骨细胞、成骨细胞、破骨细胞等,可以通过调控这些细胞的功能来影响骨重塑过程和维持骨稳态,促进类风湿关节炎骨破坏的发生和发展。成纤维细胞生长因子受体1还可以在滑膜成纤维细胞和巨噬细胞中参与炎症反应,在内皮细胞中调控滑膜血管生成,从多个方面促进骨破坏。成纤维细胞生长因子受体1可能是类风湿关节炎骨破坏的一个重要参与因素,为进一步研究类风湿关节炎治疗靶点提供依据。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维细胞生长因子受体1 骨破坏 成骨细胞 破骨细胞 滑膜成纤维细胞 血管内皮细胞
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类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响 被引量:1
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作者 刘楠楠 赵薇 +4 位作者 穆楠 田菲 薛晓畅 颜真 张伟 《生物技术通讯》 CAS 2015年第3期305-310,共6页
目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚... 目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RA FLS细胞侵袭能力的影响。结果:Ⅱ型胶原刺激引起RA FLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示Fc DDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RA FLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RA FLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论:波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RA FLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RA FLS细胞的侵袭。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 盘状结构域受体2 波形蛋白 成纤维样滑膜细胞
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DNMT1对RA模型大鼠FLS凋亡的影响 被引量:1
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作者 缪成贵 周国梁 +1 位作者 陈建中 刘健 《畜牧与饲料科学》 2014年第5期13-15,共3页
[目的]研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。[方法]采用Real-time qPCR检测对照大鼠和RA模型大鼠FLS中DNMT1表达,检测DNMT1 siRNA转染对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响;采用MT... [目的]研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。[方法]采用Real-time qPCR检测对照大鼠和RA模型大鼠FLS中DNMT1表达,检测DNMT1 siRNA转染对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响;采用MTT检测DNMT1 siRNA转染对FLS增殖的影响。[结果]与对照组相比,RA模型大鼠FLS中DNMT1表达显著升高,DNMT1表达抑制后,Bcl-2表达显著降低;MTT检测发现,DNMT1表达抑制后,FLS增殖活力显著减弱。[结论]DNMT1表达抑制可能引发RA模型大鼠FLS凋亡。 展开更多
关键词 DNA甲基转移酶1 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 Bcl-2
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芍药苷抑制佐剂性关节炎大鼠FLS异常增殖 被引量:7
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作者 缪成贵 周丽丽 +3 位作者 熊友谊 魏伟 陈兵兵 常俊 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1809-1813,共5页
目的:研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)异常增殖的影响。方法:采用完全弗氏佐剂足跖注射法制备AA大鼠,造模后第28天股动脉放血处死大鼠,分离培养FLS,大鼠足爪肿胀评分法检测PF灌胃治疗对AA大鼠的治... 目的:研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)异常增殖的影响。方法:采用完全弗氏佐剂足跖注射法制备AA大鼠,造模后第28天股动脉放血处死大鼠,分离培养FLS,大鼠足爪肿胀评分法检测PF灌胃治疗对AA大鼠的治疗作用,ELISA检测PF对AA大鼠FLS细胞因子IL-8表达的影响,MTT检测PF加入FLS培养液对AA大鼠FLS增殖的影响,Real time q PCR检测PF加药对AA大鼠FLS促凋亡基因Bax、凋亡因子Caspase 3、抗凋亡基因Bcl-2、RA病理基因Fibronectin表达的影响。结果:PF显著抑制AA大鼠足爪肿胀程度,PF加入FLS培养液后对FLS增殖具有一定的抑制作用,对AA大鼠FLS中Bax、Caspase 3表达具有显著上调作用,对Bcl-2、Fibronectin、IL-8表达具有显著抑制作用。结论:PF可能通过抑制AA大鼠FLS异常增殖抑制AA大鼠病理发展。 展开更多
关键词 芍药苷 佐剂性关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 凋亡
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lncRNA-H19通过促进成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)活性参与胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠滑膜炎症进展 被引量:4
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作者 杨羽淇 刘楠楠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期865-871,共7页
目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNA-H19)对成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)功能及对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠模型的影响。方法分离并培养类风湿性关节炎(RA)患者FLS,利用过表达腺病毒和小干扰RNA(siRNA),分别上调和下调RA FLS的H19表达水... 目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNA-H19)对成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)功能及对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠模型的影响。方法分离并培养类风湿性关节炎(RA)患者FLS,利用过表达腺病毒和小干扰RNA(siRNA),分别上调和下调RA FLS的H19表达水平,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测RA FLS增殖、Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、细胞划痕实验检测RA FLS迁移能力;建立小鼠CIA模型,关节局部注射H19短发夹RNA慢病毒(LV-sh-H19),通过测量足厚度、关节炎指数和HE染色评价疾病进展。结果H19促进FLS的增殖、侵袭和迁移能力;注射LV-sh-H19的模型小鼠踝关节结构良好,关节局部有较少免疫细胞浸润和滑膜增生,敲低H19能够缓解CIA小鼠的关节炎症。结论H19通过促进FLS活化参与CIA小鼠滑膜炎症和疾病进展。 展开更多
关键词 长链非编码RNA H19(lncRNA-H19) 类风湿性关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 胶原蛋白诱导关节炎(CIA)
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β-arrestin-2靶向NF-κB通路抑制类风湿性关节炎中FLSs的炎性反应 被引量:2
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作者 曹峰 黄承 +1 位作者 程继伟 余霄 《医学研究杂志》 2022年第1期88-93,共6页
目的明确β-arrestin-2影响NF-κB通路调节FLS炎性反应的作用。方法通过构建小鼠CIA模型,分离获取RA-FLSs细胞,qRT-PCR法检测IL-1β、IL-6的表达情况;Western blot法检测MMP3、MMP13、p-P65、p-IκBα的表达情况;使用NF-κB通路抑制剂BA... 目的明确β-arrestin-2影响NF-κB通路调节FLS炎性反应的作用。方法通过构建小鼠CIA模型,分离获取RA-FLSs细胞,qRT-PCR法检测IL-1β、IL-6的表达情况;Western blot法检测MMP3、MMP13、p-P65、p-IκBα的表达情况;使用NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082刺激RA-FLSs细胞,分析细胞炎性因子、软骨基因表达情况。结果qRT-PCR结果显示IL-1β、IL-6的表达水平显著降低,过表达β-arrestin-2可以降低RA-FLSs细胞中炎性因子水平;Western blot法结果显示,β-arrestin-2能够降低软骨基因MMP3、MMP13、p-P65和p-IκBα的表达水平,抑制NF-κB的活性;BAY 11-7082与β-arrestin-2联合刺激RA-FLSs后,炎性因子与软骨基因的表达量进一步降低。结论β-arrestin-2靶向NF-κB通路,降低炎性因子、软骨基因的表达,抑制NF-κB信号通路的活化,调节RA-FLSs的炎性反应。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 β-arrestin-2 NF-ΚB 成纤维样滑膜细胞
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蠲痹强骨方含药血清通过FGFR1信号诱导人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的机制研究
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作者 韩海慧 冉磊 +4 位作者 郑林 丁立 解骏 施杞 肖涟波 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2748-2755,共8页
目的基于成纤维细胞生长因子受体1信号通路探讨蠲痹强骨方含药血清对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的蠲痹强骨方含药血清处理人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS),通过CCK8法检测细胞增... 目的基于成纤维细胞生长因子受体1信号通路探讨蠲痹强骨方含药血清对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的蠲痹强骨方含药血清处理人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS),通过CCK8法检测细胞增殖情况,筛选蠲痹强骨方抑制增殖的浓度。利用LPS诱导RA-FLS炎症反应,加入蠲痹强骨方含药血清干预,通过流式细胞仪检测蠲痹强骨方对RA-FLS细胞的凋亡情况。RT-PCR检测mRNA相对表达水平;Western blotting检测蛋白相对表达水平。结果通过CCK8实验发现,不同浓度的蠲痹强骨方含药血清48h和72h可以显著抑制RA-FLS细胞的增殖。流式细胞分析显示,在LPS诱导的炎症环境下,蠲痹强骨方含药血清可以促进RA-FLS细胞的早期和晚期凋亡。RT-PCR结果显示,蠲痹强骨方可以下调LPS诱导下RA-FLS细胞中抗凋亡基因AKT和Bcl-2的mRNA表达。Western blot结果表明,蠲痹强骨方可以抑制LPS诱导下RA-FLS细胞中FGFR1的磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进促凋亡蛋白BAX的表达。结论蠲痹强骨方含药血清对LPS诱导RA-FLS细胞增殖有显著的抑制作用,并可促使其凋亡,其机制可能与抑制FGFR1信号通路转导有关。 展开更多
关键词 蠲痹强骨方 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 成纤维细胞生长因子受体1
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新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡
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作者 李舒 万磊 +6 位作者 刘健 黄传兵 李方泽 程静 胡赛赛 陈莹莹 朱子衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期792-799,共8页
目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子... 目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 新风胶囊(XFC) 环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls) 细胞增殖 细胞凋亡 细胞因子
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芒果苷抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移及炎性因子的表达 被引量:1
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作者 胡梦凡 颜秋慧 +5 位作者 邓梦然 梁美美 梁亮 易思思 邓家刚 运晨霞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第11期1690-1695,共6页
背景:芒果苷是一种从芒果叶、树皮、根中提取的双苯吡酮类化合物,前期研究表明芒果苷可以通过NF-κB、JAK/STAT等转录因子的活化发挥抗全身性炎症作用。目的:探讨芒果苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast... 背景:芒果苷是一种从芒果叶、树皮、根中提取的双苯吡酮类化合物,前期研究表明芒果苷可以通过NF-κB、JAK/STAT等转录因子的活化发挥抗全身性炎症作用。目的:探讨芒果苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synovial cells,RA-FLS)增殖、迁移和炎症因子表达的影响及机制。方法:RA-FLS分为空白组、R848(TLR7/8激动剂)刺激组、芒果苷低、中、高浓度组(2,4,8μg/mL)、阳性对照组(Cu-CPT8,TLR8通路抑制剂)。CCK-8法检测不同质量浓度芒果苷对RA-FLS毒性的影响并筛选最终细胞用药质量浓度,细胞克隆形成实验检测RA-FLS的增殖能力,划痕实验及Transwell迁移实验检测RA-FLS的迁移能力,qRT-PCR检测RA-FLS中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果与结论:①与空白组比较,2-10μg/mL的芒果苷干预组对RA-FLS活力有抑制趋势,但差异不显著(P>0.05),说明对RA-FLS的毒性影响很小;②与R848刺激组比较,芒果苷低、中、高浓度组RA-FLS克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数均降低(P<0.01);芒果苷中浓度和高浓度组白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子αmRNA的表达降低(P<0.01);③与R848刺激组比较,阳性对照组细胞克隆数、划痕愈合率及迁移细胞数以及白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);白细胞介素1βmRNA表达水平无明显差异;④结果表明,芒果苷可能通过TLR7/8信号通路抑制RA-FLS增殖、迁移以及炎症因子表达发挥抗类风湿关节炎的作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 芒果苷 细胞因子 增殖 迁移
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新风胶囊通过结合Wnt5a经Wnt/β-catenin信号通路抑制类风湿性关节炎
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作者 黄玉蓉 彭艳慧 +2 位作者 王冰 缪成贵 王校 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1134-1145,共12页
目的:本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎(RA)潜在的诊断和治疗靶点,新风胶囊(XFC)如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法:在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因研究XFC... 目的:本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎(RA)潜在的诊断和治疗靶点,新风胶囊(XFC)如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法:在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因研究XFC对AA大鼠疗效,RT-qPCR检测验证XFC调控通过网络药理学预测的核心基因和关键通路。在体外原代AA成纤维样滑膜细胞(FLS)中采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光等方法研究XFC对Wnt/β-catenin通路的调节机制。结果:XFC显著下调AA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀,抑制AA大鼠关节炎症。XFC降低AA大鼠外周血中炎症因子TNF-α和IL-1水平,抑制AA大鼠关节滑膜和AA FLS中病理基因MMP3和fibronectin水平。网络药理学预测出Wnt通路与XFC治疗RA高度相关。细胞水平上,含XFC血清抑制Wnt通路相关基因β-catenin、CCND1和c-Myc的表达。分子对接结果显示XFC关键成分与Wnt5a的结合能力强,在AA FLS中Wnt5a过表达(Wnt5a-ove)干扰了XFC的作用。结论:Wnt5a在AA FLS和RA FLS中表达明显升高,XFC通过与Wn5a结合,抑制Wnt/β-catenin信号通路活化改善RA,为XFC改善RA提供新的治疗机制。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 新风胶囊 WNT5A WNT/Β-CATENIN信号通路
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环状RNA_0032131靶向微小RNA-145-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭
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作者 陶蕊 韩文朝 +1 位作者 丁天祥 范重山 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第11期53-57,62,共6页
目的探讨环状RNA_003213(hsa_circ_003213)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响。方法检测RA患者和健康体检者外周血、RA-FLSs、人正常滑膜成纤维细胞中hsa_circ_0032131和miR-... 目的探讨环状RNA_003213(hsa_circ_003213)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响。方法检测RA患者和健康体检者外周血、RA-FLSs、人正常滑膜成纤维细胞中hsa_circ_0032131和miR-145-5p的水平。将RA-FLSs分为对照(NC)组、si-NC组、si-hsa_circ_0032131组、miR-NC组、miR-145-5p组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组、anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组、pcDNA组、pcDNA-hsa_circ_0032131组。采用CCK-8和Transwell法检测RA-FLSs活力、迁移和侵袭数。通过双荧光素酶报告实验确定hsa_circ_0032131与miR-145-5p的靶向关系。结果与健康体检者相比,RA患者外周血中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与人正常滑膜成纤维细胞相比,RA-FLSs中hsa_circ_0032131表达增加,miR-145-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-145-5p组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0032131组比较,anti-miR-145-5p+si-hsa_circ_0032131组RA-FLSs的活力和迁移、侵袭数目增高,差异有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0032131组RA-FLSs中miR-145-5p水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-145-5p是hsa_circ_0032131的直接靶点。结论敲低hsa_circ_0032131通过上调miR-145-5p抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 环状RNA_003213 微小RNA-145-5p 细胞活力 迁移 侵袭
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用改良消减杂交筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中高表达基因 被引量:6
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作者 王吉村 药立波 +5 位作者 吕厚山 刘新平 邓艳春 聂晓燕 孙铁铮 燕太强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期244-249,共6页
为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表... 为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .将得到的基因片段克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,将阳性克隆进行核酸序列分析 ,最后用 Northern杂交方法检测一些高表达基因在 RA和 OA病人滑膜细胞中的表达水平 .结果显示 ,共分离到 1 50个 RA高表达基因片段 ,其中长于 1 0 0 0 bp的片段占 8% (1 2 /1 50 ) ,长于 40 0 bp的片段占 36.7% (55/1 50 ) ,在大于 40 0 bp的片段中 ,假阳性率为 2 3.7% (1 3/55) .在测序的 1 8个片段中 ,已知基因有 1 2个 ,其中包括 IGF- 1结合蛋白 (IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B等 .新序列有 6个 ,其中两个序列分别与 Ring- box蛋白 1和 SON DNA结合蛋白同源 .对 IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B基因的 Northern杂交分析显示 ,在 RA病人滑膜细胞中 ,这些基因的表达水平高于 OA病人滑膜细胞 .这些结果提示 ,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法 ;IGF- 1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶。 展开更多
关键词 改良消减杂交法 类风湿性关节炎 滑膜细胞 高表达基因
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桂皮醛对滑膜成纤维细胞增殖、凋亡及周期影响的实验研究 被引量:12
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作者 王欢 王庆甫 +7 位作者 杨黎黎 张栋 王伟利 丁昊彬 郭玉茹 杜汪洋 徐铭康 甘稳 《天津中医药》 CAS 2017年第1期54-58,共5页
[目的]研究不同浓度的桂皮醛(CA)对滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖、凋亡及细胞周期的影响,进而探讨CA对骨关节炎滑膜炎症的调控机制。[方法]不同浓度的CA分别作用于LPS诱导后的FLS,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(F... [目的]研究不同浓度的桂皮醛(CA)对滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖、凋亡及细胞周期的影响,进而探讨CA对骨关节炎滑膜炎症的调控机制。[方法]不同浓度的CA分别作用于LPS诱导后的FLS,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)对其增殖、凋亡和周期进行测定。[结果]低浓度的CA可轻度促进FLS的生长,较高浓度CA则可显著降低FLS的存活率(P<0.05),呈浓度依赖性。LPS可减少FLS的凋亡率,缩短G1期、延长S期,可用来制备炎症模型。与对照组相比,CA高浓度组与低浓度组均能是Q2和Q4区细胞比率明显增加(P<0.05),延长G1期并缩短S期(P<0.05),诱导FLS凋亡及抑制FLS的增殖,尤其是CA高浓度组作用更加显著。[结论]不同浓度的CA对FLS的生长均有一定的抑制作用,其中CA高浓度组的抑制作用更强,这可能是CA抗炎作用的潜在机制。 展开更多
关键词 骨关节炎 桂皮醛 滑膜成纤维细胞 增殖 流式细胞术
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丹酚酸B对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制 被引量:7
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作者 王慧莲 展俊平 +2 位作者 苗喜云 孟庆良 马俊福 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期334-339,共6页
目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,... 目的探讨丹酚酸B对人类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度的丹酚酸B(0、1、10、20、30、40和50μmol/L)处理人RA滑膜成纤维细胞MH7A,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,筛选丹酚酸B的最适作用浓度。取MH7A细胞,设置对照组(正常培养)、丹酚酸B组(加入丹酚酸B培养)与丹酚酸B+3-MA组(加入丹酚酸B和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA共培养)。采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况;qRT-PCR检测caspase-3 mRNA相对表达水平;Western blotting检测caspase-3、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白相对表达水平。结果与0μmol/L丹酚酸B组比较,30、40和50μmol/L丹酚酸B处理的MH7A细胞增殖率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),据此选择50μmol/L丹酚酸B进行后续实验。与对照组比较,丹酚酸B组细胞增殖率、p62蛋白相对表达水平明显降低,细胞凋亡率、caspase-3 mRNA和蛋白以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05);与丹酚酸B组比较,丹酚酸B+3-MA组细胞增殖率(63.47%±1.94%vs.51.33%±4.67%)、p62蛋白相对表达水平(0.97±0.06 vs.0.20±0.02)明显升高,细胞凋亡率(21.4%±1.8%vs.30.4%±0.6%)、caspase-3 mRNA(0.83±0.06 vs.1.27±0.15)和蛋白(0.64±0.05 vs.1.10±0.09)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.29±0.07 vs.1.23±0.21)、Beclin-1(0.36±0.05 vs.1.05±0.08)蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。结论丹酚酸B可能通过诱导自噬抑制人RA滑膜成纤维细胞的增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 丹酚酸B 类风湿关节炎 滑膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 自噬
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白藜芦醇对AA大鼠关节成纤维样滑膜细胞凋亡诱导作用及可能机制 被引量:5
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作者 宋先兵 黄焱平 +7 位作者 方安宁 杨珺 周文翰 王家昊 瞿子庭 朱浩辰 李娜 陈晓宇 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期660-665,共6页
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对低浓度H2O2处理的大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)成纤维样滑膜细胞(FLS)影响,及与线粒体氧化应激蛋白去乙酰化酶3(sirtuins 3,SIRT3)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的关系。方法20只SD大鼠,... 目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对低浓度H2O2处理的大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)成纤维样滑膜细胞(FLS)影响,及与线粒体氧化应激蛋白去乙酰化酶3(sirtuins 3,SIRT3)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的关系。方法20只SD大鼠,随机分为正常组、模型组,模型组足趾皮下注射弗氏完全佐剂,造模后d 28处死大鼠,检测大鼠血清氧化应激指标;免疫组织化学染色检测SIRT3、MnSOD在膝关节滑膜组织中的表达;CCK-8法观察不同浓度的H2O2,以及Res处理对FLS的增殖影响;Hoechst 33258和Western blot检测Res对低浓度H2O2处理FLS的凋亡和SIRT3、MnSOD蛋白表达的影响。结果与正常组大鼠比较,AA大鼠血清呈氧化应激状态,滑膜组织中SIRT3、MnSOD表达增加;低浓度H2O2可促进FLS增殖,Res能剂量依赖性抑制低浓度H2O2处理的增殖,增加FLS凋亡;且随着Res的剂量增加,FLS中SIRT3、MnSOD蛋白表达降低。结论低浓度H2O2可促进AA大鼠FLS生长,Res处理可抑制FLS增殖,促进FLS的凋亡,机制可能与Res抗氧化应激作用有关。 展开更多
关键词 成纤维样滑膜细胞 细胞增殖 细胞凋亡 线粒体 氧化应激 白藜芦醇
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甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增生及细胞周期的影响(英文) 被引量:5
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作者 刘巧红 滕云 +5 位作者 王慧 王波 沈凌汛 吴清敏 陈燕 杨真荣 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第7期8-10,共3页
目的研究甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增生及细胞周期的影响,揭示MTX治疗RA的机制.方法应用MTS/PMS比色法和流式细胞术分别测定MTX处理和未处理RA患者滑膜细胞的细胞增生水平和细胞周期.结果加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol... 目的研究甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增生及细胞周期的影响,揭示MTX治疗RA的机制.方法应用MTS/PMS比色法和流式细胞术分别测定MTX处理和未处理RA患者滑膜细胞的细胞增生水平和细胞周期.结果加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol/L),RA患者滑膜细胞接种后第4天起增生水平均显著低于未处理的RA患者滑膜细胞(P<0.05);细胞周期分析显示加入不同浓度MTX(0.2~2.0μmol/L)后第5、8天,RA患者滑膜细胞停留在G1期的比例要比未处理的RA患者滑膜细胞明显增加(P<0.05),而S、G2期的细胞比例比未处理的RA患者滑膜细胞则明显减少(P<0.05);MTX能以剂量依赖性明显抑制滑膜细胞的增生水平.结论MTX在治疗RA时,主要起到对RA患者滑膜细胞的增生及增生相关病理过程的抑制. 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 滑膜细胞 甲氨蝶呤 细胞增生 细胞周期
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中性粒细胞增强类风湿关节炎滑膜细胞产生基质金属蛋白酶及其细胞侵袭力 被引量:10
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作者 梁晓辉 朱平 +3 位作者 杨勇 汪莉 郑朝晖 丁进 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期827-830,共4页
目的:研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)产生基质金属蛋白酶(MMP)及细胞侵袭力的作用。方法:取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎(OA)患者的滑膜组织,体外分离培养FLS,通过流式细胞术(FCM)检测... 目的:研究中性粒细胞表面CD147分子对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)产生基质金属蛋白酶(MMP)及细胞侵袭力的作用。方法:取自关节镜或骨科手术治疗的RA、骨关节炎(OA)患者的滑膜组织,体外分离培养FLS,通过流式细胞术(FCM)检测细胞表面分子及形态学方法鉴定。采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞株)诱导中性粒细胞分化,并用硝基蓝四氮唑(NBT)还原反应测定其分化程度。进而以FCM测定分化前后的HL-60细胞及FLS表面CD147的表达,并通过明胶酶谱和重组基质侵袭实验检测分化前后HL-60细胞对FLS MMP表达和细胞侵袭能力的作用以及CD147拮抗肽(AP-9)对这种MMP表达和细胞侵袭能力的抑制作用。结果:成功建立了FLS分离培养和HL-60细胞分化的实验体系。培养的FLS具有典型成纤维细胞的形态,均一的高度表达CD90(>98%)而不表达CD14。分化后的HL-60细胞CD147表达上调,RAFLS细胞CD147表达水平低于分化前及分化后HL-60细胞(P<0.05)。明胶酶谱试验显示:①与OA FLS相比,单培养的RA FLS表达较高水平的酶原及活化形式的MMP-2(P<0.05);②分化前/后的HL-60细胞分别与FLS共培养,酶原及活化形式的MMP-2和MMP-9的表达水平较这些细胞单独培养均显著升高(P<0.05),且分化后的HL-60细胞与FLS共培养酶原及活化形式MMP-2表达水平较分化前HL-60细胞与FLS共培养明显升高(P<0.05);③AP-9显著抑制两共培养组中MMP-2和MMP-9的上调作用(P<0.05)。侵袭实验显示:RA FLS侵袭能力高于OA FLS(P<0.05);分化前后的HL-60均可增加RA FLS的侵袭能力(P<0.05),且分化后强于分化前(P<0.05);AP-9可抑制这一促进作用,降低FLS的侵袭能力(P<0.05)。结论:中性粒细胞可能通过CD147促进RA患者滑膜FLS MMP-2、MMP-9的表达和活化,增强FLS的侵袭能力,这种促进作用可被CD147拮抗肽所抑制,将为RA关节软骨和骨损伤机制和治疗的进一步研究提供了重要的线索。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 基质金属蛋白酶 EMMPRIN/CD147 中性粒细胞 HL-60细胞
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丹参诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2、bax基因表达研究 被引量:14
20
作者 刘青松 朱兴春 +4 位作者 蒋红 邢艳 杨明辉 唐中 袁国华 《现代中西医结合杂志》 CAS 2010年第21期2620-2622,共3页
目的探讨丹参作用类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax基因mRNA水平的表达。方法关节液原代培养获取成纤维样滑膜细胞,分别用终浓度为0,0.195和0.39 g/L的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存,采用rt-PCR方法检测bcl-2... 目的探讨丹参作用类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax基因mRNA水平的表达。方法关节液原代培养获取成纤维样滑膜细胞,分别用终浓度为0,0.195和0.39 g/L的丹参作用24 h后,提取总RNA并逆转录成cDNA保存,采用rt-PCR方法检测bcl-2和bax在mRNA水平的表达。结果以丹参浓度为0(bcl-2的相对表达量为0.55±0.27)作为溶剂对照组,bcl-2的表达在丹参浓度为0.195 g/L时(bcl-2的相对表达量为0.53±0.35)没有显著性差异(P=0.468),当丹参浓度达到0.39 g/L时,bcl-2的表达(相对表达量为0.25±0.17)显著性降低(P<0.05);bax的表达在2种丹参浓度条件下均无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞bcl-2的表达,从而通过降低bcl-2/bax的值促进成纤维样滑膜细胞凋亡。 展开更多
关键词 丹参 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 BCL-2 BAX
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