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题名Pg FimA Ⅱ型特异性单克隆抗体制备及鉴定
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作者
韩海芳
李智涛
梁梦歌
王烁
谷变利
高社干
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机构
河南科技大学基础医学与法医学院
河南科技大学临床医学院
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出处
《生物技术》
CAS
2023年第6期677-682,共6页
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基金
洛阳市社会发展医疗卫生重点项目(2101038A)
河南省科技攻关项目(212102310853)。
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文摘
[目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)FimAⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg FimAⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-FimAⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗原免疫BALB/c小鼠,经PEG融合法和腹水法获得FimAⅡ单克隆抗体;分别采用SDS-PAGE法、酶联免疫吸附实验检测抗体纯度、效价和亚型,Western Blot和Biacore检测抗体的特异性和亲和力。[结果]FimAⅡ重组蛋白为可溶性表达,最适诱导条件为1 mmol/L IPTG诱导12 h;纯化后的重组蛋白纯度为90%以上,该免疫原制备的FimAⅡ单克隆抗体为IgG1亚类,kappa亚型,效价为1:8×104以上,特异性良好,亲和力可达到9nM。[结论]成功诱导表达、纯化FimAⅡ蛋白并制备抗Pg FimAⅡ特异性单克隆抗体,为后续开发快速检测Pg诊断试纸条奠定基础。
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关键词
牙龈卟啉单胞菌
fimaⅡ菌毛蛋白
fimaⅡ型特异性单克隆抗体
特性鉴定
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Keywords
Porphyromonas gingivalis
fima i pilin
fima type ii specific monoclonal antibody
characteristic identification
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分类号
R735.1
[医药卫生—肿瘤]
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