兔波氏杆菌fimN蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立兔波氏杆菌(Bb)的快速检测方法,本研究采用纯化重组兔Bb fimN蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA抗体检测方法。通过优化反应条件,确定其检测临界OD450nm值为0.295。检测结果显示,该方法对兔Bb标准阳性血清检测的敏感性为1∶216;而与兔巴氏杆菌、兔出血症病毒阳性血清无交叉反应。重复性试验表明,其组内和组间变异系数均小于10%。采用建立的间接ELISA方法对浙江省5家兔场采集的150份兔血清样品的检测阳性率为55%。该方法的建立为进一步研发兔Bb ELISA诊断试剂盒提供了实验依据。

兔支气管败血性波氏杆菌fimN基因的原核表达

应用PCR方法扩增兔支气管波氏杆菌(Bb)的菌毛蛋白基因(fimN),将fimN基因克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET28a-fimN。将此重组质粒转化受体菌BL21后,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白分子量大小约为27 kD,与理论预期值相符。用Western-blot试验分析纯化的表达产物,结果表明,该重组蛋白能与Bb阳性血清发生特异性反应。

兔支气管败血波氏杆菌PCR快速检测方法的建立及应用

参考GeneBank中支气管败血波氏杆菌fimN基因序列设计了一对特异性引物,扩增出大小为387bp的目的基因片段,优化PCR反应条件,建立了兔支气管败血波氏杆菌的PCR快速检测方法。特异性和敏感性试验显示,该方法与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、魏氏梭菌和巴氏杆菌均无交叉反应,且检出最低浓度为10pg,可用于临床检测。