体细胞克隆技术扩繁超细型二狼山绒山羊的应用研究

【目的】通过体细胞克隆技术生产超细型二狼山绒山羊克隆个体,为该技术在地方优质羊品种资源扩繁及新品种培育中的应用提供理论依据。【方法】选择1只4岁龄羊绒细度为13.89μm的二狼山绒山羊(♂),采集耳组织并分离培养成纤维细胞,以其为供体细胞,利用体细胞克隆技术开展超细型二狼山绒山羊的扩繁研究,通过克隆羊体重、羊绒细度、繁殖性能等指标评估该技术的可行性。【结果】试验成功建立了稳定的山羊卵母细胞体外成熟培养及体细胞克隆技术体系,卵母细胞成熟率为44.8%,孤雌激活卵裂率、囊胚率分别为83.0%、22.4%;二狼山绒山羊克隆胚的卵裂率、囊胚率分别为77.8%、13.7%。获得5只克隆羊个体,其生长发育正常,二狼山绒山羊母羊自然交配共获得16只健康的F1代个体,具有正常繁殖能力。克隆个体羊绒细度极显著低于同龄对照个体(P<0.01)。【结论】本研究通过体细胞克隆技术成功克隆了超细型二狼山绒山羊个体,其具备正常生产性能和繁殖性能,并保留了超细羊绒的特性,为地方优良羊种质资源扩繁和新品种培育应用研究奠定了基础。

中规模推广级橡胶树优良品种热研7—33—97的选育

热研7—33—97是一个速生高产抗性较强的橡胶树优良品种。两院试验场高级试验区头9个割年的鉴定结果,其平均干胶产量为4.35千克/株·年、1910千克/公顷·年,分别为对照RRIM600的131.8％和169.5％,干胶含量高,产胶潜力大,干胶性能好,抗风、抗寒能力都优于RRIM600,1993年被评为中规模推广级品种。

低磷胁迫对不同油茶优良无性系酶活性的影响

通过沙培试验设计无磷(P0,0 mmol/L),低磷(P1,0.05 mmol/L),正常磷(P2,0.50 mmol/L)3种磷素处理水平,研究低磷胁迫对5个油茶优良无性系叶片SOD、POD、CAT、Apase酶活性及MDA质量摩尔浓度的影响差异。结果表明:无磷(P0)和低磷处理(P1)叶片保护酶活性及MDA质量摩尔浓度均极显著(P<0.01)高于正常磷处理(P2),5个油茶无性系表现出明显差异。在无磷(P0)和低磷(P1)胁迫下湘林67的叶片SOD、APase活性最高;湘林81叶片的POD、CAT活性最高,叶片MDA质量摩尔浓度最低。与正常磷(P2)相比,无磷(P0)和低磷(P1)胁迫下的5个无性系叶片保护酶活性及MDA质量摩尔浓度变化幅度也表现明显差异:湘林69的SOD活性增幅最大,分别增加了30.87%和18.61%;湘林81的POD活性增幅最大,分别增加了147.37%和70.53%;湘林67的CAT活性在无磷胁迫下(P0)的增幅最大,为52.84%,低磷胁迫下(P1)则以湘林81的增幅最大,为38.2%;湘林69的MDA质量摩尔浓度在无磷胁迫下(P0)增幅最小,为2.62%,低磷胁迫下(P1)则以湘林67的增幅最小,为1.33%。

水稻小穗特征基因FZP的图位克隆

FZP是水稻中控制小穗分化的一个关键基因 ,先前已将它定位在第 7染色体上。通过进一步对该基因进行精细定位和图位克隆 ,找到 2个SSR标记NRM6和NRM8,将该基因锁定在一个遗传距离为 1 2cM的范围内 (两标记与目标基因的遗传距离分别为 0 2cM和 1 0cM) ,相应的物理距离为 14 4kb。发现在预期的目标基因位置 ,存在一个具有类似AP2结构域的基因。已知AP2是一个控制植物花发育的重要基因。因此 ,这个基因应是FZP的一个候选基因。PCR扩增结果显示 ,突变体中该基因有一个大约 4kb的插入片段 ,与fzp共分离。由此可以初步认为 ,该基因就是FZP。

作物数量性状基因研究进展

分子生物技术的发展对作物数量性状基因 (QTL)研究提供了条件 ,不同的定位群体各有其特点 ,相继出现的QTL定位方法也逐步完善。大量的研究揭示了QTL的基本特征 ,剖析了重要农艺性状的遗传基础 ,给作物遗传改良带来了新的策略 ,不断深入的研究已经完成了特定QTL的精细定位和克隆。本文从QTL的定位群体 ,定位方法 ,研究现状 ,精细定位与克隆 ,以及QTL利用等方面对作物数量性状基因的研究进行了综述。

初选10个杜仲优良无性系耐旱性的研究

采用P-V技术,分别在萌芽期、新梢旺长期和休眠期对初选的10个杜仲优良无性系的耐旱性水分参数进行了测定。结果表明,杜仲优系在休眠期耐旱性最强;在新梢旺长期耐旱性最弱,且各优系耐旱性差异显著,依此差异对10个初选杜仲优系的耐旱性强弱进行了排序。

桉树优良无性系工厂化育苗技术

从桉树优良无性系工厂化育苗的生产流程入手,系统地介绍了桉树优良无性系组培苗的培育和以组培苗营养袋苗为母株,建立采穗圃,培育大量插条用以生产扦插苗的技术。其间以尾巨桉EF7为例,插入组培苗芽增殖培养基选择,促进生根培养基的选择,以及扦插条激素处理选择等的试验方法及过程,以加强桉树优良无性系工厂化育苗技术体系的力度。

陈山红心杉优良无性系组培快速繁殖技术研究

以陈山红心杉20个红心比例达70%以上的优良无性系基部萌条为外植体,建立了组培高效繁育体系。优化条件筛选结果表明:MS+BA2.0mg/L(单位下同)+NAA0.5为最佳诱导培养基;1/2MS+BA1.5+NAA0.5+适量有机物为最佳增殖培养基,苗木叶色嫩绿,生长正常,增殖系数可达4.5;1/2MS+NAA0.2+IBA0.5为最佳生根培养基,生根率达89.3%。

湖南省油茶良种选育及推广应用概况

油茶是我国特有的主要木本食用油料树种 ,在我省林业经济中占有很重要的地位。作者概述了全省油茶生产和科研的现状 ,以及 3 0多年来对油茶农家品种、优良家系和优良无性系等良种选育的成果和应用情况。阐述了油茶良种选育的趋势 ,分析了推广应用中存在的问题及其对策。

细毛羊黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与毛色表型的研究

为了研究黑素皮质激素受体1(MC1R)基因与黑色素生成的关系及该基因突变导致毛色发生改变的机理,研究采用RT-PCR和PCR等技术克隆得到了白色东北细毛羊MC1R基因长1 093 bp的cDNA片段,编码364个氨基酸,其中包括70个氨基酸信号肽和294个氨基酸的成熟肽,具有7个跨膜结构域。结果表明:细毛羊cDNA与绵羊、牛、马、人、小鼠、犬等同源性均大于91%,氨基酸序列与其他动物的同源性高于89%;除绵羊外与其他动物相比有5处发生突变,且这5处突变均位于MC1R蛋白跨膜结构区;而细毛羊和绵羊之间只有1处发生突变,由K→M,同源性达98.97%。说明细毛羊与绵羊的亲缘关系最近。

果刺两用皂荚优良无性系选育研究

皂荚是山西省重要的乡土经济型树种,近几年对皂荚良种苗需求不断增大,选育良种迫在眉睫。山西省林业科学研究院乡土树种课题组科技人员从2008年开始,在山西省设11个点,以皂荚果刺两用为目标,通过初选、复选和决选,选出6株皂荚优树。通过6 a的嫁接试验,对山西省6个产地的皂荚优良无性系的产量和经济性状指标进行测定和分析,并利用主成分分析法选出果刺两用皂荚最优品系为12号母树。嫁接5 a后,12号无性系单株产刺量1.06 kg,刺平均长度、平均粗度、平均重分别为16.21 cm,0.61 cm,4.84 g,荚果平均产量5.07 kg/株,荚果平均长度、平均宽度、平均厚度、平均重量、千粒重分别为23.41 cm,2.67 cm,1.08 cm,25.5 g,431.15 g.通过和母树比较,12号无性系保持了良好的遗传特性。

野生番茄单片段渐渗系的创建及应用

野生种质的自然变异是植物育种和品种改良的重要遗传资源,标记辅助单片段渐渗系的构建为野生资源优良等位基因的有效利用提供了新的工具。本文综述了野生番茄单片段渐渗系的创建及其在基因精细定位、QTL遗传效应分析以及图位克隆中的应用。

拟南芥网状突变体E-210基因精细定位

通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变与遗传分析,从拟南芥(Arabidopsis thaliana)中筛选到一株隐性单基因控制的网状突变体E-210。该突变体植株生长缓慢,叶脉呈绿色,叶肉呈黄色。通过透射电镜观察,发现野生型植株和突变植株在叶绿体结构上差异不大,猜测该突变体E-210基因与叶绿体的发育可能没有直接关系,而很可能同叶绿素或叶绿体的生物合成有关。通过图位克隆的方法,将该突变体的突变基因定位在第5条染色体上的MRB17和MBG8-5的分子标记之间,精确到87.130kb。对MRB17和MBG8-5的分子标记之间的22个基因进行了分析,预测突变体E-210基因可能是At5g54770,编码THI1,即噻唑合成酶。

毛白杨优良无性系生长性状的研究

经过９ａ的比较试验，从３７１个毛的杨无性系中选出５个优良无性系。对５个无性系生长性状、生物量、叶的净光合速率、光能利用率等进行了研究分析。结果表明：当选无性系７ａ生树高、胸径、材积生长比对照分别提高２５％～３７％，１０８．７％～１４１．３％，４３２％～５７８％，林分单位面积生物量、叶的净光合速率、光能利用率比对照分别提高１１９．８％～５０７．２％，２０．８％～６７．０％，２１９．８％～５３７．６％；中选系号有较强的适应性，在ｐＨ８～８．５的条件下，生长良好，仍表现出早期速生的特性，说明入选无性系均有较高生产力和早期速生特性，可在生产中推广应用。

作物染色体片段置换系研究进展

染色体片段置换系除含有供体基因组中的1个或几个片段外,其余背景与受体亲本完全相同,是用于QTL鉴定、精细定位、图位克隆、互作分析和品种改良等的理想材料。本文概述了作物染色体片段置换系的构建、特点、类型及在作物遗传育种中的应用价值。

台湾爱玉子无性系引种与栽培试验研究

台湾爱玉子首次在福建引种栽培能正常开花结果,取得较好的效果。试验表明,引种台湾的爱玉子无性系其品质较为优良,其中以红9、太和6、新25、太和2等4个无性系表现较好。这对福建省乃至南方各地继续引种栽培台湾爱玉子具有现实的指导意义。

油茶优良无性系采穗圃的营建与管理

近年来,油茶产业迅速升温,良种苗木的缺乏制约了油茶产业的发展,其中良种壮苗和适地适树适种源,特别是良种采穗圃建设与管理是关键因素。文章综述了油茶优良无性系采穗圃品种配置方法、营建、管理、采穗以及建档等。

水稻抽穗期基因的精细定位、克隆和生物学功能分析

介绍了水稻抽穗期QTL研究的进展,在相同亲本日本晴/Kasalath衍生的不同类型的多个群体中,共检测到15个QTL;应用高世代回交后代,精细定位了其中 8 个 QTL;将在初步定位时同一区间检测到的 1 个控制种子休眠期 QTL(Sdr1)和1个抽穗期QTL (Hd8 ),分解为两个紧密连锁的基因;将经过精细定位表明可能具有双重功能的单个孟德尔因子Hd3 ,分解为两个功能不同的紧密连锁的基因Hd3 a 和Hd3 b;根据 QTL近等基因系的光周期反应以及这些座位间上位性互作的研究,明确了其中6个QTL的生物学功能;应用图位法克隆了其中3个QTL,研究了它们的表达和调控,并与拟南芥的同源基因进行比较。为水稻其他数量性状以及其他作物数量性状的遗传学研究,提供了一个范例。

新疆细毛羊抑制素α亚基cDNA的克隆、序列分析与表达

根据GenBank上登录的绵羊抑制素α亚基基因序列,设计合成2对引物,以新疆细毛羊卵巢提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增获得了约812 bp片段,经pMD18-T载体克隆和测序分析证实为新疆细毛羊抑制素α亚基前体基因。进一步通过PCR反应扩增新疆细毛羊INHα亚基基因片段,经过NcoⅠ和HindⅢ双酶切后定向克隆于pET32a原核表达载体,获得pET-INH重组表达载体。将携带有重组表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)通过1 mmol.L-1IPTG进行诱导表达,经过SDS-PAGE电泳检测,显示诱导表达蛋白大约为32 ku,与预期表达蛋白大小一致。Western blot检测表明重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。新疆细毛羊抑制素α亚基基因的克隆、表达为进一步研究其功能和应用奠定了基础。

中国美利奴羊(新疆军垦型)核因子I/B基因的克隆及表达

【目的】研究绵羊核因子I/B(nuclear factor I/B,NFIB)基因的组织表达规律,并克隆中国美利奴羊(新疆军垦型)NFIB基因的全长编码区(coding sequence,CDS区)序列。【方法】采用半定量RT-PCR的方法分析NFIB基因的组织表达谱和皮肤表达特性,利用RT-PCR扩增绵羊NFIB基因的全长CDS区、克隆测序,并进行序列分析。【结果】①NFIB基因在绵羊多种内脏器官和皮肤组织中都有着不同程度的表达,且在皮肤组织中表达较高;NFIB基因在超细毛品系体表不同部位皮肤组织中的表达水平不存在显著性差异(P>0.05);同时在6个不同品系/品种绵羊体侧部皮肤组织中的表达水平也不存在显著性差异(P>0.05);超细毛品系绵羊皮肤组织NFIB基因的表达水平在不同季节存在显著性差异(P<0.05);②绵羊NFIB基因编码区至少存在3种剪接形式,其开放阅读框(open reading frame,ORF)的长度依次为1 263、1 128和1 038 bp,分别编码420、375和345个氨基酸。【结论】中国美利奴羊(新疆军垦型)NFIB基因在皮肤组织中的表达量较高,其在超细毛品系羊体侧部皮肤组织中的表达量具有显著的季节性差异;绵羊NFIB基因至少可以编码3种不同的蛋白剪接体(proteinisoform)。