佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响

观察了佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响.以B16黑色素瘤细胞感染小鼠建立动物肿瘤模型,设正常对照组、阴性对照组和阳性对照组及佛手挥发油低、中、高剂量组,各组荷瘤小鼠予以相应的药物实施干涉14 d,每天观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,14 d后测定荷瘤小鼠的心、肝、肾中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.与阴性对照组相比,50 mg/kg剂量佛手挥发油能显著抑制雌性荷瘤小鼠移植瘤的增殖(P<0.05),显著提高其肝脏中SOD活性(P<0.01).表明佛手挥发油对B16移植瘤具有抑制作用.

佛手挥发油对B16细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响

为检测佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响,采用台盼蓝排斥法测定了细胞存活率、瑞-姬氏混染法观察了细胞形态变化、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测了细胞的凋亡与坏死,用酶学方法测定了细胞中酪氨酸酶活性.结果表明:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性;62.50,125.00和250.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞6 h后,细胞核染色质凝聚于核膜内侧,呈固缩状或圆珠状,表现为典型的细胞凋亡特征;500.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞后,细胞膜破裂,出现细胞碎片,说明细胞已经坏死.酪氨酸酶活性检测结果显示:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.

指端黑色素细胞瘤的诊治

目的报道指端黑色素肿瘤临床诊断和治疗方法;探讨指端黑色素细胞瘤临床误诊或漏诊原因及鉴别诊断。方法临床诊治指端黑色素肿瘤11例,病理检查确诊恶性黑色素细胞瘤5例。结果3例患者于术后4.5mo、5.5mo和8mo左右死亡,1例术后失访,1例术后4年健在。结论应当重视对该病临床表现的认识,病理检查为确诊依据。

RNF43通过β-catenin抑制黑色素瘤细胞PD-L1表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应

目的探讨环指蛋白43(RNF43)对黑色素瘤中CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的调节作用。方法利用慢病毒感染技术对小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA进行RNF43基因过表达与敲低;通过小鼠皮下成瘤实验检测Lv-Ctrl-OE组、Lv-RNF43-OE组、Lv-Ctrl-KD组和Lv-RNF43-KD组小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA体内增殖情况,通过流式细胞术检测黑色素瘤肿瘤免疫微环境中CD8^(+)T细胞穿孔素和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平;采用实时荧光定量PCR实验检测细胞中β-catenin和程序性死亡受体配体1(PD-L1)mRNA的表达水平;通过双荧光素酶报告基因实验检测RNF43对PD-L1的转录调控作用。结果本研究成功构建RNF43稳定过表达与敲低的小鼠黑色素瘤细胞株Lv-RNF43-OE和Lv-RNF43-KD。小鼠皮下成瘤实验结果显示,Lv-RNF43-OE组瘤体质量为(0.08±0.06)g,明显小于Lv-Ctrl-OE组的(1.04±0.52)g,差异有统计学意义(t=3.71,P=0.032);Lv-RNF43-KD组瘤体质量为(1.94±0.29)g,与Lv-Ctrl-KD组的(1.15±0.74)g相比差异无统计学意义(t=-1.70,P=0.164)。流式细胞术结果显示,Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为9034±2628,明显高于Lv-Ctrl-OE组的3847±1637,差异有统计学意义(t=-3.35,P=0.015);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞穿孔素荧光强度为966±247,明显低于Lv-Ctrl-KD组的2226±646,差异有统计学意义(t=3.16,P=0.034);Lv-RNF43-OE组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为2422±429,明显高于Lv-Ctrl-OE组的1688±324,差异有统计学意义(t=-2.73,P=0.034);Lv-RNF43-KD组CD8^(+)T细胞IFN-γ荧光强度为614(454,863),与Lv-Ctrl-KD组的1159(1152,2068)相比差异有统计学意义(Z=-1.96,P=0.050)。实时荧光定量PCR实验结果显示,Lv-RNF43-OE组β-catenin mRNA相对表达量为0.67±0.16,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.11,差异有统计学意义(t=2.98,P=0.041);Lv-RNF43-OE组PD-L1 mRNA相对表达量为0.32±0.09,明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.09,差异有统计学意义(t=9.13,P=0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,pCMV6-NC组、RNF43组、RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性分别为1.00±0.00、0.84±0.00、1.49±0.00和1.57±0.03(F=2218.33,P<0.001),进一步两两比较发现,与pCMV6-NC组相比,RNF43组PD-L1启动子荧光素酶活性明显降低(P<0.001),RNF43^(+)β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001;P=0.003);与RNF43组相比,RNF43^(+)β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高(P<0.001)。结论RNF43可能通过抑制β-catenin的表达降低黑色素瘤中PD-L1 mRNA的表达并促进CD8^(+)T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。

手指甲下恶性黑色素瘤八例报告

为提高临床对手指甲下恶性黑色素瘤的认识，对我科１９８２～１９９２年收治的８例手指甲床恶性黑色素瘤进行分析。肿瘤发生部位；拇指甲床６例，食指甲床１例，食指末端皮肤１例。大部分病人未能早期诊治，症状出现至确诊时间平均７年２个月。主要采用诚指术及转移淋巴结清扫术，并辅以免疫治疗、化疗及放疗。８例中无病存活３例，带病存活２例，死亡３例。中位存活时间４年８个月，平均无病存活时间２年８个月。本组结果提示早期确诊非常重要，凡可疑病变均应做病理检查，一旦确诊即行手指截除术。术后免疫治疗有一定效果，免疫治疗应持续１～２年，以后间断巩固治疗。转移病灶对放疗、化疗不敏感。术后应严密随访．积极治疗转移病灶。

手指恶性黑色素瘤的临床特征与疗效分析

目的探讨手指恶性黑色素瘤的临床特征及治疗效果。方法回顾性分析1995年2月-2007年10月收治并经病理检查证实的22例手指恶性黑色素瘤的临床资料，其中拇指12例，示、中指各3例，环、小指各2例。手指黑斑及疼痛为共同的首发症状，15例有甲下病变，12例有外伤史，2例x线片显示指骨有溶骨性改变。主要采用手术、全身化疗及免疫治疗。所有患者均采用截指术，其中13例行同侧腋窝淋巴结清扫术。结果22例患者获得随访，其中3例2年后失访。随访时间为1～10年，平均4．5年。1年生存率为86．4％（19／22），3年生存率为63．2％（12／19），5年生存率为31．6％（6／19）。结论手指恶性黑色素瘤临床少见，治疗应以手术、化疗、免疫治疗等综合方法为主，其预后与肿瘤大小、浸润深度及临床分期有关。

miR-182增强黑色素瘤细胞增殖和侵袭的作用研究

目的探讨miR-182对人皮肤黑色素瘤细胞增殖、侵袭能力的影响及miR-182影响黑色素瘤细胞增殖的机制。方法选取2018年3月—2019年3月于蚌埠医学院第一附属医院就诊的黑色素瘤患者,其中黑色素瘤样本及癌旁组织样本各20例,通过RT-qPCR检测黑色素瘤组织与癌旁组织miR-182表达量的差异,利用阳离子脂质体Lipofectamin^(TM)2000将miR-182模拟物或抑制剂转染人黑色素瘤WM-115细胞,使miR-182过表达或低表达,采用CCK-8检测黑色素瘤细胞增殖变化,采用Transwell检测黑色素瘤WM-115细胞侵袭能力,同时通过RT-qPCR检测Zfp36L mRNA的表达情况,采用Western blotting检测Zfp36L蛋白的表达水平。结果黑色素瘤组织表达的miR-182(4.500±1.102)明显高于癌旁组织(1.214±0.286,t=7.070,P=0.001);与未处理组相比,miR-182过表达能够增强WM-115细胞增殖和侵袭能力(均P<0.05),增加Zfp36L蛋白与mRNA的表达水平(均P<0.05);miR-182沉默的作用与之相反(均P<0.05)。结论MiR-182过表达能够增强WM-115细胞增殖和侵袭能力,可能与增加Zfp36L蛋白表达相关。

miR-203调控锌指蛋白281表达对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响

目的初步探究微小RNA-203(miR-203)调控锌指蛋白281(ZNF281)对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况,Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组:对照组(细胞正常培养)、miR-203模拟物对照组(加入miR-203模拟物阴性对照)、miR-203抑制剂对照组(加入miR-203抑制剂阴性对照)、miR-203模拟物组(加入miR-203模拟物)、miR-203抑制剂组(加入miR-203抑制剂)。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达,CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性,Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量,Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法。结果与血管内皮细胞系ECV304相比,黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低(均P<0.05),ZNF281蛋白水平较高(均P<0.05)。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比,miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高(F=487.632、68.454,均P<0.05),细胞迁移数量均显著降低(均P<0.05),ZNF281蛋白表达均显著降低(均P<0.05);miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低(均P<0.05),细胞迁移数量均显著增加(均P<0.05),A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高(均P<0.05),36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高(均P<0.05),24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高(均P<0.05)。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。结论上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移,下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移,可能通过调控ZNF281的表达实现。