佛手凉果加工过程中功能性成分与抗氧化活性分析

目的 探究佛手凉果加工中功能性成分和抗氧化活性的变化规律。方法 以佛手凉果为研究对象,探究新鲜佛手柑经过盐渍、晒盐胚、糖渍、干燥等工艺成为佛手凉果(成品)的加工过程中功能性成分含量活性变化,监测1,1-二苯基-2-三硝基苯(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除能力、2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt, ABTS]阳离子自由基抑制率和铁离子还原抗氧化能力(ferric reducing antioxidant power, FRAP)在加工中的变化,研究各功能成分与体外抗氧化指标的相关性。结果 加工提高了佛手柑的总酸、多糖、黄酮、膳食纤维含量与抗氧化活性;DPPH、ABTS、FRAP分别比新鲜佛手柑增加1.35倍、1.57倍和2.16倍。糖渍和干燥可提高抗氧化活性。黄酮的含量影响了佛手凉果的抗氧化性,黄酮与FRAP呈极显著正相关(P<0.01),与DPPH、ABTS呈显著正相关(P<0.05)。多糖与FRAP、黄酮呈显著正相关(P<0.05)。结论 佛手柑加工可以提高多糖、黄酮、膳食纤维等功能成分以及抗氧化活性,糖渍和干燥是关键加工步骤。

佛手新品种飞天的选育

飞天佛手是芸香科柑橘属青皮佛手的自然芽变体嫁接培育而成的新品种。植株呈直立状,枝条带有互生刺,叶柄有翼;嫩叶颜色呈淡绿或斑驳分布,成熟叶大多为深绿色,大而厚。花蕾的花青苷显色,花瓣为紫红色。幼果呈指状,果实尖端为紫红色,其余部位早期为淡绿色。成熟后指状结构由顶端开裂至基部并反转向上张开。每年2—4月份开花,随后果实逐渐成熟,由绿色变为黄色,散发清香,可挂果至11月份成熟,果实呈金黄色。适宜于中国江南地区和西南地区(如广西、四川、云南和贵州等地)露地、温室或大棚栽培。飞天与青皮相比,手指张开程度更大,具有较高观赏价值,适宜制作盆栽。

基于超高效液相色谱三重四极杆质谱法同时检测佛手中香豆素类化合物含量

佛手作为一种药食两用的柑桔类水果,香豆素类化合物是其关键的生物活性成分之一。由于香豆素类化合物结构相似,并且有同分异构体,目前还没有快速准确的方法针对香豆素类化合物进行同时定量。该研究建立了一种超高效液相色谱三重四极杆质谱法(ultra-performance liquid chromatography tandem triple quaternary mass spectrometry,UPLC-QqQ-MS/MS),在14 min内定性并定量4个不同产地佛手柑中的41种香豆素类化合物,包括16种简单香豆素、23种呋喃香豆素和2种其他香豆素,其中有8组同分异构体。该方法灵敏度高、准确度高、精确度高,可用于佛手实际样品中香豆素的筛选和测定,这是迄今为止筛查并定量香豆素最全面和快速的方法。柠檬内酯是佛手中含量最高的香豆素,浙江佛手中检出的香豆素类化合物含量和种类均最多,并且有4种香豆素在佛手中首次检出。

客家娘酒调配饮料的研制及评价

选取具有疏肝理气功效的药食同源药材佛手、陈皮和山楂提取物作为主要配料,研制了一种以客家娘酒为基底的调配饮料。通过单因素实验和正交试验,明确客家娘酒调配饮料中,山楂、陈皮、佛手提取物和娘酒的最佳组合。结果显示,以50 m L为基准的客家娘酒调配饮料中,佛手、陈皮、山楂提取物和娘酒的最佳添加量分别为1 m L、3 mL、4 m L和25 mL。进一步检测发现娘酒调配饮料中含有丰富的总多酚和总黄酮,含量分别为分别为76.1 mg/L±3.2 mg/L和509.4 mg/L±13.9 mg/L。

佛手类黄酮和香豆素类物质的靶向筛查和定量分析研究

目前对佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)次生代谢产物筛查鉴定的物质种类偏少且缺乏系统的定量分析。该文采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(ultra-high performance liquid chromatography coupled with triple-quadrupole mass spectrometry,UPLC-QqQ-MS/MS)同时对金华和云南两地的佛手中36种类黄酮和23种香豆素类物质进行靶向筛查,共检出了36种类黄酮和21种香豆素类物质,并对其中的34种类黄酮和21种香豆素进行了准确定量,有2种物质能检出但不能准确定量,这是目前对佛手所含次生代谢产物进行定量分析物质数量最多的研究。结果显示,金华佛手和云南佛手中所测类黄酮总含量分别为(757.11±27.12)μg/g和(803.98±29.41)μg/g,香豆素类物质总含量分别为(1102.72±13.29)μg/g和(676.97±49.77)μg/g。地奥司明是金华佛手和云南佛手含量最高的类黄酮,分别高达(345.85±19.92)μg/g和(417.73±12.13)μg/g,其次是橙皮苷,含量分别为(201.93±1.07)μg/g和(271.78±13.08)μg/g。川陈皮素和枸橘苷在2种佛手中均有检出,但不能准确定量,栀子黄素B在金华佛手中有检出,但不能准确定量,在云南佛手中的含量也低于0.1μg/g;柠檬内酯(5,7-二甲氧基香豆素)是2种佛手中含量最高的香豆素类物质,分别高达(946.17±10.78)μg/g和(561±46.42)μg/g,花椒毒素和异补骨脂素在2种佛手中均无检出。此外,有14种类黄酮和4种香豆素首次在佛手中检出,包括牡荆素鼠李糖苷、5-羟基-7,8,4′-三甲氧基黄酮、半齿泽兰素-5-甲醚、根皮素、根皮苷、蔓荆子黄素、异橙黄酮、4′,5,7,8-四甲氧基黄酮、4′,5,6,7-四甲氧基黄酮、芹菜素、栀子黄素B、栎精-3,7,3′,4′-四甲醚、金合欢素、3′,4′,5,5′,6,7-六甲氧基黄酮以及6′,7′-环氧香柠檬亭、6′,7′-二羟基香柠檬亭、5-牻牛儿醇基-7-甲氧基香豆素和异紫花前胡内酯。研究结果将为佛手类黄酮和香豆素类次生代谢的相关数据库提供数据支撑,为佛手种质资源的开发利用提供参考。

‘阳光’佛手柑特征香气成分的GC-MS分析及感官评价

采用顶空固相微萃取(headspace solid phase micro-extraction,HS-SPME)结合气相色谱-质谱-嗅闻(Gas chromatography-mass spectrometry-olfactory,GC-MS-O)联用技术对‘阳光’佛手柑的挥发性物质组分及其特征香气成分进行鉴定,确定其特征香气成分。运用定量描述分析法(quantitative descriptive analysis,QDA)进行感官特量描述性分析,进一步验证‘阳光’佛手柑的特征香气成分。结果表明,在‘阳光’佛手柑中共检测出34种挥发性香气组分,结合气味强度值和香气活力值(odour activity value,OAV)初步确定对‘阳光’佛手柑香气贡献较大的组分。结合感官评价进行综合分析,确定‘阳光’佛手柑的特征香气成分为D-柠檬烯、柠檬醛、香叶醇、对伞花烃、γ-松油烯、β-罗勒烯、月桂烯。研究结果为完善佛手柑的香气组成鉴定,提高佛手柑品质和培育优质品种提供参考。

不同地区佛手柑挥发性风味物质对比分析

佛手柑是柑橘属芸香科的果实,在食品加工如饮料、酿酒等领域应用前景广阔。为了筛选不同地区不同品种佛手柑的关键挥发性物质,本文采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术对浙江金华、广东和云南地区的佛手柑的挥发性物质进行分析鉴定,并运用相对气味活度值(relative odor activity value,ROAV)和主成分分析方法分析确定佛手柑的关键挥发性物质。结果表明,不同品种的佛手柑共检测出挥发性成分77种,其中ROAV≥1的关键香气物质有17种,共有的关键香气物质有α-蒎烯、β-蒎烯、d-柠檬烯、双戊烯、石竹烯、壬醛、橙花醛、十一醛和香叶醇。金佛手特有的关键香气物质有蒎烯、左旋-α-蒎烯和癸醛;广佛手特有的关键香气物质有(Z)-3,7-二甲基辛-2,6-二烯醛;滇佛手中没有找到特有的关键香气,这些特征香气物质可以作为区分不同产地佛手柑的参考依据。

缺氮对佛手气体交换、叶绿素荧光及叶绿体超微结构的影响

利用土培试验研究不同氮素水平对佛手叶片光合作用、叶绿素荧光参数、叶绿素含量、叶绿体超微结构及抗氧化酶活性的影响.结果表明,缺氮降低叶绿素(Chl)含量、叶绿素a(Chla)含量以及Chla/叶绿素b(Chlb),同时增加类胡萝卜素(Car)/Chl值;缺氮条件下,佛手叶片气体交换率、PSⅡ的最大光化学效率(Fv/Fm)、PSⅡ实际光化学效率(ΦPSⅡ)、光化学猝灭系数(qP)、PSII的电子传递效率(ETR)呈下降趋势,初始荧光(Fo)以及非光化学猝灭系数(qN)则随氮缺乏程度的加剧而升高;同时,缺氮导致超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活性降低,膜脂过氧化程度加重,叶绿体类囊体片层结构损伤等.可见,缺氮主要是通过减少光合色素含量,降低光合电子传递速率,引起细胞的膜脂过氧化程度加剧,进而损伤叶绿体类囊体结构及光合反应中心,导致光合速率降低.

佛手挥发油抑菌活性的研究

以水蒸气蒸馏法对佛手挥发油进行提取,采用滤纸片法比较了不同提取部位挥发油抑菌作用的大小,测定了佛手果挥发油对各供试菌种的抑菌圈直径,同时就不同浓度及pH下佛手果挥发油的抑菌效果进行初步研究。结果表明:佛手果实挥发油的抑菌效果最好,佛手叶中挥发油只对酵母菌有一定的抑制作用,而枝中挥发油没有抑菌作用。用水蒸气蒸馏法提取果实挥发油得率为1.56%;佛手果实挥发油对酵母菌大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有较明显的抑制作用,其中对枯草杆菌的抑菌效果最强,对金黄色葡萄球菌的抑制作用相对较弱;并且挥发油具有很好的热稳定性及抑菌持久性,佛手果挥发油在100%、50%、25%三个浓度上的变化对其抑菌效果的影响明显,且在中性和偏酸性范围内抑菌效果最好。四种供试菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为:枯草杆菌1.25%、大肠杆菌1.25%、金黄色葡萄球菌2.5%、酿酒酵母2.5%。

佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞体外增殖的抑制作用

利用水蒸气蒸馏法提取佛手挥发油,MTT法测定细胞活力;倒置显微镜,Hoechst 33342/PI荧光染色及扫描电镜观察细胞凋亡与坏死的形态变化;彗星电泳法检测细胞DNA损伤程度。结果表明:佛手挥发油能够显著抑制B16黑色素瘤细胞增殖(P<0.05),呈剂量依赖效应;佛手挥发油处理B16黑色素瘤细胞6 h后,倒置显微镜下观察到低、中剂量组(62.5、125、250μg/mL)细胞体积缩小,形态变得不规则,细胞碎片增多,部分细胞成团生长,而高剂量组(500μg/mL)细胞膜崩解,胞浆外溢,细胞碎片增多;荧光显微镜下可见低、中剂量组细胞核固缩,核染色质凝集,边缘化等典型细胞凋亡特征,而高剂量组细胞核为PI染成红色,核染色质分布均匀,呈细胞坏死特征;扫描电镜观察到试验组细胞形态不规则,细胞表面不平整,微绒毛减少等细胞形态变化;彗星电泳试验结果显示:低、中剂量组细胞彗星头逐渐减小,彗尾较长且近似呈圆形,而高剂量组细胞彗星头较大,尾部相对较短。

短暂低温对佛手光合生理的影响

佛手(Citrus medicavar.sarcodactylisSwingle)是一种对冷胁迫较为敏感的观果植物,在生产中普遍存在着冷害影响植物生长的现象。通过模拟浙中地区冬季设施种植中常见的短暂低温弱光条件,研究了佛手叶片的光合生理变化。研究表明,15℃低温即显著降低佛手光合速率、气孔导度,显著提高胞间CO2浓度;引起Fv/Fm显著性下降及初始荧光Fo显著上升的拐点温度为10℃,但延长处理时间至72h情况下,15℃亦显著降低Fv/Fm;低温处理还降低佛手光合羧化效率、最大光合速率,并导致光抑制现象发生时对应光强降低;低温条件下佛手叶片质膜透性及MDA含量高于对照,SOD、POD、CAT等抗氧化酶的活性则呈下降趋势;由此可见,短暂低温弱光胁迫首先是降低核酮糖1,5-二磷酸羧化酶(Rubisco)等碳固定关键酶活性,引起氧自由基积聚,进而引发光抑制及光合速率的下降。

基于GC-MS和GC-O联用法分析佛手精油关键香气成分

研究佛手精油的挥发性物质和关键香气成分。佛手经水蒸气蒸馏法提取精油,利用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)结合气相色谱-嗅闻(gas chromatography-olfactometry,GC-O)技术对挥发性物质和香气成分进行分析。GC-MS-O检测出36种挥发性物质,主要成分为D-柠檬烯(34.69%)、γ-松油烯(20.42%)、β-甜没药烯(4.59%)。采用稀释法和强度法分析发现D-α-蒎烯、D-柠檬烯、β-芳樟醇、别罗勒烯、4-松油醇、α-佛手柑烯具有较大的香气强度;D-α-蒎烯、β-蒎烯、β-罗勒烯、橙花乙酸酯、α-佛手柑烯具有较大风味稀释因子。综合分析认为D-α-蒎烯和α-佛手柑烯是佛手精油的关键特征香味成分。

佛手GRAS基因的克隆及表达分析

利用抑制消减杂交法从芸香科柑橘属不耐寒植物佛手中分离得到了一个表达序列标签(EST)片段,结合RACE技术克隆获得该基因的1 669 bp序列,编码区长1 236 bp,编码413个氨基酸.通过Blastn同源序列比对分析,结果显示该基因与拟南芥已知的GRAS基因同源性较高;与GenBank数据库比对分析,表明该基因具有GRAS特有的保守结构域.因此,命名该基因为:CmsGRAS(GenBank登录号:JF440647).用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法研究了该基因在低温胁迫处理下的表达特性,结果显示该基因在低温胁迫后的表达量有明显的变化.

佛手叶挥发油的成分分析及生物活性研究

分析了佛手叶挥发油的成分,检测了其生物活性.采用水蒸气蒸馏法提取佛手叶挥发油,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)检测了佛手叶挥发油的成分,比浊法检测了其抑菌活性,噻唑蓝法检测了其细胞活力.佛手叶挥发油含有40种成分,以d-柠檬烯、γ-松油烯、对伞花烃、α-蒎烯、β-蒎烯为主要成分,其中d-柠檬烯和γ-松油烯的含量分别占50.53%和24.05%.佛手叶挥发油对草绿色链球菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌和溶血性链球菌等均有抑制作用,其半抑制浓度(IC50)分别为1.1,2.1,6.8,7.2,13.7和19.3 mg/mL;佛手叶挥发油对Hep3B,HUVEC,Huh7,SP2/0,A549和PANC-28等癌细胞具有抑制作用.

佛手低温胁迫相关基因的差异表达

佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)是药用及观赏价值都很高的经济植物,但它对低温反应敏感,容易发生冻害现象。因此,了解其冷敏感机制对提高抗寒性起着重要的作用。以佛手为试材,-4℃低温处理24 h后,采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)和半定量RT-PCR技术,分析和鉴定与冷敏感相关的差异表达基因。DDRT结果获得差异片段121个,经生物信息学分析,差异表达序列中有33条为功能已知序列,88条为未知序列(其中5条具有开放性阅读框);半定量结果获得34个阳性基因片段,其中上调基因片段29个,下调基因片段5个。除了3个基因功能未知外,其余基因主要涉及植物防御/应激反应,细胞壁的修饰,信号转导,代谢,氨基酸转运,氧化损伤,转录和蛋白质的合成,其中与植物防御/应激反应和光合作用有关的基因可能是造成佛手寒敏感的主要原因。

蒸制时间对佛手主要成分与抗氧化活性的影响

目的研究不同蒸制时间对佛手总黄酮、橙皮苷及5,7-二甲氧基香豆素成分及其抗氧化活性的影响。方法采用紫外分光光度法测定佛手总黄酮含有量;HPLC法测定橙皮苷及5,7-二甲氧基香豆素含有量;DPPH法检测这些化合物的抗氧化活性。结果 2.5 h蒸制时间对佛手总黄酮和橙皮苷的含有量均出现峰值,分别达到50.416 mg/g和1.038 mg/g,蒸制后5,7-二甲氧基香豆素含有量呈减少趋势,2.5 h蒸制下降最少,为1.628 mg/g。蒸制2.5 h的佛手抗氧化能力最强。结论蒸制时间对制佛手主要成分及抗氧化均有显著影响,且总黄酮和橙皮苷的量与其抗氧化活性之间具有相关性。

佛手油化学成分研究

本文通过GC/MS分析检索 ,从佛手叶油中鉴定了 30个成分、从佛手果油中鉴定了 11个成分。叶油主要成分为柠檬烯、香叶醛、橙花醛、6 甲基 5 庚烯 2 酮、β 月桂烯等。果油主要成分为柠檬烯、γ 松油烯、香叶醛。

佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响

观察了佛手挥发油对小鼠体内B16黑色素瘤生长的影响.以B16黑色素瘤细胞感染小鼠建立动物肿瘤模型,设正常对照组、阴性对照组和阳性对照组及佛手挥发油低、中、高剂量组,各组荷瘤小鼠予以相应的药物实施干涉14 d,每天观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,14 d后测定荷瘤小鼠的心、肝、肾中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.与阴性对照组相比,50 mg/kg剂量佛手挥发油能显著抑制雌性荷瘤小鼠移植瘤的增殖(P<0.05),显著提高其肝脏中SOD活性(P<0.01).表明佛手挥发油对B16移植瘤具有抑制作用.

佛手挥发油对B16细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响

为检测佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响,采用台盼蓝排斥法测定了细胞存活率、瑞-姬氏混染法观察了细胞形态变化、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测了细胞的凋亡与坏死,用酶学方法测定了细胞中酪氨酸酶活性.结果表明:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性;62.50,125.00和250.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞6 h后,细胞核染色质凝聚于核膜内侧,呈固缩状或圆珠状,表现为典型的细胞凋亡特征;500.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞后,细胞膜破裂,出现细胞碎片,说明细胞已经坏死.酪氨酸酶活性检测结果显示:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.

佛手柑挥发油成分提取鉴定

应用“同步蒸馏－萃取法”提取佛手柑外果皮、内果皮及佛手柑干粉中挥发油，经ＧＣ－ＭＳ鉴定，鲜佛手柑外果皮油分离得１６５个峰，鉴定了４６种成分，φ（萜烯类）＝７３．４４％，苎烯、萜品油烯、β－蒎烯和β－月桂烯的体积分数分别为５％以上肉质内果皮油中分离得到１５３个峰，鉴定了４９种组分，φ（烷烃类）＝６６．９２％，体积分数为５％以上的萜烯类有苎烯和γ－萜品烯佛手柑干粉提取物分离出１９４个峰，鉴定出５８种成分，仍以萜烯类为主，φ（萜烯类）＝７１．８４％，其中苎烯、β－月桂烯。