基于iTRAQ技术的伴放线聚集杆菌细胞致死性扩张毒素诱导Jurkat细胞的凋亡研究

目的探索伴放线聚集杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans,A.a)的一种毒力因子(cytolethal distending toxin,CDT)诱导人T淋巴细胞发生凋亡过程中表达改变的信号分子。方法培养Jurkat细胞,并进行分组:不做处理的正常细胞对照组、野生型A.a CDT刺激Jurkat细胞的野生组、突变型A.a CDT刺激Jurkat细胞的突变组,应用i TRAQ技术检测A.a CDT作用Jurkat细胞24 h过程中表达差异蛋白。结果通过筛选,我们得到20个凋亡相关的蛋白(变化倍数>1.3),其中表达上调的有8个(CASP8/CD3E/YY1/SH3BGRL3/P53/CASP3/UBE2I/TNFRSF10B),表达下调的有12个(F5/RPL18A/DAD1/MTCH2/HIST1H1E/CNBP/RBM25/SLC16A1/KDM2A/CD99/RAC2/TMX1)。结论本研究检测出了伴放线聚集杆菌细胞致死性膨胀毒素诱导人T淋巴细胞凋亡过程中表达差异的蛋白,并筛选了一条可能的信号通路UBE2I/P53/TNFRSF10B/CASP8/CASP3,为下一步研究及临床治疗局限型侵袭性牙周炎提供思路。

正畸过程中伴放线菌聚集杆菌的检测及其毒力因子细胞致死性膨胀毒素的研究

目的建立PCR方法对正畸治疗患者口腔中的伴放线菌聚集杆菌(Aa)及毒力因子细胞致死性膨胀毒素进行检测,并与牙龈指数进行相关性分析。方法 选择55例戴入矫治器后产生牙龈炎性反应患者为矫治组,34例未带矫治器的牙周健康者为对照组,49例口腔内科就诊的成人牙周炎患者为成人牙周炎组。记录牙龈炎症指数,用无菌纸尖法分别采集牙周袋最深处及龈沟内液标本进行细菌DNA提取及PCR反应。结果以16S rDNA引物PCR扩增138例患者临床标本,共扩增出Aa 44株;其中正畸治疗组29株;对照组5株;成人牙周炎组10株。用Spearm an等级相关分析矫治组Aa检出率与牙龈指数G I之间存在明显的正相关关系(P<0.01)。矫治组Aa的检出率明显高于牙周炎组和对照组(P<0.01);而牙周炎组与对照组之间的Aa检出率无明显差异(P>0.05)。44例PCR扩增阳性的患者平均年龄为16.23岁,而Aa阴性的患者年龄平均为38.73岁,二者具有明显差异(t=3.598,P<0.01)。以CDT引物直接扩增44例Aa16S rDNA阳性的临床标本中的CDT基因片段,13例为阳性,其阳性率为29.54%,其中扩增出667bp的CDT1型3例,扩增出1893bp的CDT2型10例。结论 Aa在青少年患者尤其在带矫治器的青少年患者发病中起到重要的作用,但对成人牙周炎的致病不起主要作用。CDT扩增产物有两种,但检出数量较少,还有待于进一步研究。