衍生物Fla-CN的抗糖尿病作用及其作用机制研究

目的:体内外研究黄酮衍生物Fla-CN的抗糖尿病作用及其机制。方法:体外实验以人肝HepG2细胞为研究对象,不同浓度Fla-CN孵育后,利用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG),通过检测HepG2细胞内2-NBDG的荧光强度,观察Fla-CN对肝细胞葡萄糖摄取的影响;采用硫酸-蒽酮比色法检测HepG2细胞内糖原含量;通过检测一定时间内葡萄糖生成量,观察Fla-CN对肝细胞糖异生过程的影响。体内实验采用2型糖尿病模型db/db小鼠为研究对象,给予Fla-CN和二甲双胍干预4周后,测定db/db小鼠空腹血糖、糖耐量以及胰岛素耐量,计算糖耐量、胰岛素耐量实验血糖-曲线下面积(AUC)。通过Western印迹法检测化合物干预后小鼠肝组织中磷酸化AMP活化蛋白激酶(AMPK)、糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)及转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)的表达。进一步通过Western印迹检测AMPK抑制剂Compound C或AMPK激动剂AICAR与Fla-CN联用后,HepG2细胞内PEPCK、G6Pase、PGC-1α的蛋白表达。结果:Fla-CN能够促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取(F=33.50,P<0.01)和糖原合成(F=93.63,P<0.01),抑制糖异生(F=44.19,P<0.01)。同时,Fla-CN显著降低2型糖尿病db/db小鼠空腹血糖以及时间-血糖曲线下面积(F=98.40,P<0.05)。Western印迹显示Fla-CN能够激活db/db小鼠肝组织中AMPK,抑制PEPCK、G6Pase以及PGC-1α的表达,并呈现一定剂量依赖性。Compound C能在一定程度上阻断Fla-CN对AMPK的激活和对PEPCK、G6Pase以及PGC-1α的抑制作用。结论:黄酮衍生物Fla-CN通过激活AMPK,有效调节肝HepG2细胞糖代谢,抑制肝糖异生,降低2型糖尿病db/db小鼠空腹血糖,改善其受损的糖耐量,提高胰岛素敏感性。

抗糖尿病先导化合物Fla-CN的合成工艺研究

目的:对抗糖尿病先导化合物Fla-CN(3-O-[(E)-4-(4-氰基苯基)-3-烯-2-酮丁基]山萘酚)的合成工艺进行研究。方法:以对氰基苯甲醛和山萘酚为合成起始原料,先后经过Claisen-Schimidt反应,α,β-不饱和酮的α位溴代反应和醚化反应得到目标化合物Fla-CN,并从反应温度、底物浓度、反应物当量比以及催化剂等方面进行单因素考察试验,摸索最佳反应条件,建立合成工艺,提高反应总收率。结果:通过单因素考察等方法,建立了Fla-CN的合成工艺,目标产物的总收率显著提高,达到50%。结论:该工艺采用价廉易得的原料,简便的合成工艺与纯化手段,提高了反应收率,降低了生产成本。

LC-MS/MS测定血浆中委陵菜黄酮衍生物(Fla-CN)浓度及其在大鼠药动学研究中的应用

目的建立测定血浆中委陵菜黄酮衍生物（flavone-CN,Fla-CN）的高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析方法。方法以委陵菜黄酮（tiliroside）为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-水（65∶35）为流动相,用Agilent XDB-C18柱分离,通过电喷雾三重四级杆串联质谱,以多反应监测模式（MRM）进行检测,检测离子对分别为m/z 454.0→255.0（委陵菜黄酮衍生物）和593.2→285.1（tiliroside,内标）。结果血浆中委陵菜黄酮衍生物在0.5~1 000 ng·mL-1内呈现良好的线性关系,方法的日内和日间精密度（RSD）均小于4.6%,准确度在±4.1%之内。在临床前药动学研究中,应用此方法测试了SD大鼠口服给药委陵菜黄酮衍生物后的血药浓度。结论应用高效液相色谱-质谱联用技术建立的测定血浆中委陵菜黄酮衍生物浓度的方法灵敏度高、专属性强,适用于大鼠体内药动学研究。