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姜黄素通过降低miR-135b-5p和FEN1表达增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性 被引量:2
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作者 马蓉 李娟 王芳 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2024年第4期324-330,共7页
目的:探究姜黄素对卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性的影响及其潜在机制。方法:(1)体外常规培养卵巢癌亲本细胞OVCAR-3并构建顺铂耐药OVCAR-3/DDP细胞,将OVCAR-3细胞分为Control(常规培养)、DDP-1(1μmol/L顺铂)、DDP-5(5μmol/L顺铂)、DDP-... 目的:探究姜黄素对卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性的影响及其潜在机制。方法:(1)体外常规培养卵巢癌亲本细胞OVCAR-3并构建顺铂耐药OVCAR-3/DDP细胞,将OVCAR-3细胞分为Control(常规培养)、DDP-1(1μmol/L顺铂)、DDP-5(5μmol/L顺铂)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-15(15μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-1(20μmol/L姜黄素+1μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-5(20μmol/L姜黄素+5μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-15(20μmol/L姜黄素+15μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30组(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为Control(常规处理)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、DDP-40(40μmol/L顺铂)、DDP-50(50μmol/L顺铂)、DDP-60(60μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-40(20μmol/L姜黄素+40μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-50(20μmol/L姜黄素+50μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-60组(20μmol/L姜黄素+60μmol/L顺铂),CCK-8法检测细胞活性,计算顺铂半数抑制浓度(IC 50),筛选顺铂和姜黄素的合适作用浓度。(2)将OVCAR-3细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(20.5μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+20.5μg/mL顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(42.1μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+42.1μg/mL顺铂),采用流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量(qRT)-PCR检测miR-135b-5p表达,qRT-PCR和免疫印迹法分别检测瓣状核酸内切酶-1(flap endonuclease 1,FEN1)mRNA和蛋白表达。结果:相同顺铂浓度时,与DDP组比较,姜黄素+DDP联合组OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞活性明显降低(P均<0.001)。DDP作用于OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞的IC 50分别为20.5μg/mL和42.1μg/mL。与OVCAR组或OVCAR/DDP组相较,姜黄素或顺铂致OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞凋亡率明显增加(P均<0.001),两者联合作用时效果更显著。此外,姜黄素或顺铂处理可明显降低OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞中miR-135b-5p表达及FEN1表达(P<0.01或<0.001),两者联合时效果更显著。结论:姜黄素可增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性,其可能与降低miR-135b-5p和FEN1表达相关。 展开更多
关键词 姜黄素 miR-135b-5p 瓣状核酸内切酶-1(fen1) 卵巢癌 顺铂敏感性
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FEN1调节肝细胞癌发生和预后的临床意义
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作者 赵建红 岑红兵 +1 位作者 杨志勇 陈峰 《局解手术学杂志》 2024年第4期349-354,共6页
目的 分析瓣状核酸内切酶1(FEN1)与肝细胞癌(HCC)发生和预后的关系。方法 选取2017年5月至2022年10月我院肝胆外科收治的91例HCC患者的HCC组织(HCC组)和90例肝硬化患者的LC组织(LC组),采集所有患者术前血清样本。另纳入90例健康志愿者... 目的 分析瓣状核酸内切酶1(FEN1)与肝细胞癌(HCC)发生和预后的关系。方法 选取2017年5月至2022年10月我院肝胆外科收治的91例HCC患者的HCC组织(HCC组)和90例肝硬化患者的LC组织(LC组),采集所有患者术前血清样本。另纳入90例健康志愿者的血清样本作为对照。免疫组织化学法分析组织FEN1表达,酶联免疫吸附试验法检测血清FEN1水平。记录HCC患者5年无病生存期(DFS)和总生存期(OS)。结果 LC组和HCC组患者血清FEN1水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HCC组织FEN1蛋白表达H评分与血清FEN1水平呈正相关(r_(s)=0.726,P<0.001)。血清FEN1诊断HCC或者鉴别诊断HCC和LC的曲线下面积(AUC)分别为0.943和0.897。血清FEN1水平>244.74 pg/mL为HCC患者5年DFS率和OS率的独立危险因素(P<0.05)。结论 FEN1在HCC组织和血清样本中过表达,并与HCC患者的不良预后呈正相关,可作为HCC患者的早期诊断和预后评估的生物标志物。 展开更多
关键词 瓣状核酸内切酶1 肝细胞癌 临床病理特征 诊断 预后
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FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中的表达研究 被引量:2
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作者 谭秋芬 胡惠军 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第3期311-315,321,共6页
目的探讨瓣状核酸内切酶-1(FEN1)、转录因子Ⅱⅰ假基因23(GTF2IP23)、赖氨酸特异性去甲基化酶4A(KDM4A)在乳腺癌组织中的表达及相关性。方法选取2020年7月至2021年8月进行手术的女性乳腺癌患者72例及同期进行手术的乳腺良性肿瘤患者70例... 目的探讨瓣状核酸内切酶-1(FEN1)、转录因子Ⅱⅰ假基因23(GTF2IP23)、赖氨酸特异性去甲基化酶4A(KDM4A)在乳腺癌组织中的表达及相关性。方法选取2020年7月至2021年8月进行手术的女性乳腺癌患者72例及同期进行手术的乳腺良性肿瘤患者70例,收集乳腺癌患者手术切除癌组织、距癌组织5 cm癌旁组织标本及乳腺良性肿瘤患者肿瘤病理组织,连续切片后做免疫组化标记、进行免疫组化染色。反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测FEN1表达,Western blot法检测GTF2IP23、KDM4A表达,分析FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中的表达相关性及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。结果与癌旁组织相比,良性肿瘤组织、乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达较高(P<0.05);乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达高于癌旁组织(P<0.05)。乳腺癌组织中FEN1、GTF2IP23、KDM4A表达与年龄、肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移、脉管侵犯、分化情况密切相关(P<0.05)。乳腺癌组织中FEN1与GTF2IP23、KDM4A表达呈正相关(r=0.404、0.553,均P=0.001);GTF2IP23与KDM4A表达也呈正相关(r=0.582,P=0.001)。与FEN1、GTF2IP23、KDM4A单项检测相比,三项联合检测对乳腺癌患者预后预测的灵敏度提高,特异度降低;FEN1、GTF2IP23、KDM4A的曲线下面积(AUC)分别为0.691、0.659、0.708(P<0.05)。结论FEN1、GTF2IP23、KDM4A在乳腺癌组织中呈高表达,三者具有相关性,同时与乳腺癌患者病理特征密切相关,能够较好预测乳腺癌患者的预后,为临床诊断及治疗乳腺癌提供理论依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 瓣状核酸内切酶-1 转录因子Ⅱⅰ假基因23 赖氨酸特异性去甲基化酶4A
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程序性翻译后修饰对FEN1功能调控的研究进展 被引量:2
4
作者 贾兰兰 王依依 +1 位作者 华跃进 徐虹 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1205-1212,共8页
瓣状核酸内切酶(FEN1)是结构特异性5′核酸酶超家族成员,以参与冈崎片段成熟、DNA重组、细胞凋亡DNA片段化和长片段碱基切除修复(LP-BER)而闻名,在生物体的多种代谢途径中发挥作用,对维持不同物种基因组的稳定性发挥着十分重要的作用。F... 瓣状核酸内切酶(FEN1)是结构特异性5′核酸酶超家族成员,以参与冈崎片段成熟、DNA重组、细胞凋亡DNA片段化和长片段碱基切除修复(LP-BER)而闻名,在生物体的多种代谢途径中发挥作用,对维持不同物种基因组的稳定性发挥着十分重要的作用。FEN1的功能或表达异常会导致生物体内的多个生命过程发生紊乱,如突变率增加、微卫星序列不稳定、DNA降解等,对生物体造成严重危害。因此,FEN1在生物体内的表达必须受到严格、精确、及时的调控。研究表明,翻译后修饰对FEN1蛋白的活性强弱、细胞定位及功能稳定性发挥着重要的调控作用。本文对关于FEN1翻译后修饰调控的相关研究进展进行总结,系统归纳翻译后修饰对FEN1功能的调控和影响,为后续开展FEN1程序性调控研究提供了参考。 展开更多
关键词 瓣状核酸内切酶(fen1) 磷酸化 琥珀酰化 甲基化 泛素化
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基于生物信息数据库分析FEN1基因在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量:2
5
作者 李镠祎 曹奔奔 +4 位作者 张婷 王晨 杨红健 戴五敏 蔡昀方 《浙江医学》 CAS 2021年第3期268-273,I0006,共7页
目的通过分析生物信息数据库相关资料,探讨瓣状核酸内切酶1(FEN1)基因在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法检索Oncomine数据库,分析FEN1基因在不同类型肿瘤中的表达情况;检索基因表达谱动态分析(GEPIA)数据库,对比乳腺癌组织与正常乳腺... 目的通过分析生物信息数据库相关资料,探讨瓣状核酸内切酶1(FEN1)基因在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法检索Oncomine数据库,分析FEN1基因在不同类型肿瘤中的表达情况;检索基因表达谱动态分析(GEPIA)数据库,对比乳腺癌组织与正常乳腺组织之间FEN1基因的表达差异,分析该基因的表达水平与乳腺癌临床病理分期的关系;检索人类蛋白质图谱(HPA)数据库,可视化乳腺癌组织与正常乳腺组织FEN1基因的差异表达情况;利用Kaplan-Meier Plotter在线分析FEN1基因表达水平与乳腺癌患者预后的关系;检索肿瘤单细胞(CancerSEA)数据库分析FEN1基因与乳腺癌单个细胞功能状态的相关性。结果FEN1在多种肿瘤组织中高表达。与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中FEN1基因的表达明显升高(P<0.05),且不同临床病理分期乳腺癌患者FEN1基因表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。从总体来看,FEN1基因高表达组总生存率低于低表达组(P<0.05)。此外,FEN1基因的表达与乳腺癌多种细胞功能状态相关,其中与乳腺癌细胞的细胞周期、DNA损伤、DNA修复正相关性最高。结论FEN1基因在乳腺癌组织中呈高表达,与患者预后相关,并且与乳腺癌细胞功能存在一定相关性,可为临床乳腺癌的治疗及基因靶向药物的研制提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 瓣状核酸内切酶1 乳腺癌 基因表达 预后
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肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1和复制因子C2的表达及临床意义
6
作者 李倩 金凤 +3 位作者 何佳慧 胡涛 吴峰 顾扬 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期655-660,共6页
目的探讨肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1(Flap-endonuclease 1,FEN1)和复制因子C2(replication factor C2,RFC2)的表达及其临床意义。方法采用生物信息学方法分析FEN1、RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的表达;采用免疫组化法检测80例肺... 目的探讨肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1(Flap-endonuclease 1,FEN1)和复制因子C2(replication factor C2,RFC2)的表达及其临床意义。方法采用生物信息学方法分析FEN1、RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的表达;采用免疫组化法检测80例肺鳞状细胞癌及癌旁组织中FEN1和RFC2蛋白的表达,利用RT-PCR法检测两者mRNA表达并分析相关性,分析FEN1、RFC2与临床病理特征的关系;收集患者随访资料,绘制患者的生存曲线。结果FEN1和RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的高表达率分别为77.50%(62/80)、70.00%(56/80),在癌旁组织中的高表达率分别为42.50%(34/80)、32.50%(26/80),与公共数据库分析结果一致。RT-PCR结果显示,肺鳞状细胞癌组织中RFC2、FEN1 mRNA表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01);相关性分析结果显示,两者的表达存在明显正相关。不同TNM分期患者的FEN1、RFC2蛋白表达差异有统计学意义,是否存在胸膜侵犯与RFC2蛋白的表达差异有关。FEN1、RFC2高表达肺鳞状细胞癌患者的总生存期均低于低表达组。单因素分析结果表明:RFC2高表达、FEN1高表达、TNM分期与肺鳞状细胞癌患者的预后有关;多因素分析结果表明:TNM分期、FEN1和RFC2高表达是影响肺鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素。结论FEN1和RFC2有助于评估肺鳞状细胞癌患者的预后,两者之间存在协同作用,可能成为新的肿瘤标志物。 展开更多
关键词 肺肿瘤 鳞状细胞癌 flap-核酸内切酶1 复制因子C2 预后
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重组flap核酸内切酶1的表达及活性测定方法的建立 被引量:3
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作者 盛楠 马寅姣 +2 位作者 王建平 邹秉杰 周国华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1433-1442,共10页
Flap核酸内切酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)是一种能催化核酸侵入反应的核酸内切酶,可应用于信号放大检测方法,但该酶详细的表达纯化工艺尚无报道,并且活性难以准确测定,限制了其应用。通过合成嗜热古球菌Archaeoglobus fulgidus来源的... Flap核酸内切酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)是一种能催化核酸侵入反应的核酸内切酶,可应用于信号放大检测方法,但该酶详细的表达纯化工艺尚无报道,并且活性难以准确测定,限制了其应用。通过合成嗜热古球菌Archaeoglobus fulgidus来源的FEN1基因序列,构建了p ET24a(+)-FEN1-His重组质粒,并通过优化表达条件,得到了FEN1最优表达条件为:37℃、200 r/min振荡培养8 h后,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.05 mmol/L,再于37℃、200 r/min诱导表达11 h,最终经镍亲和层析成功纯化得到了分子量约为38 k Da的重组FEN1。同时建立了基于荧光标记探针的FEN1活性测定方法,准确测定了重组FEN1的活性,为建立基于该酶的核酸检测方法提供了可靠的酶活力依据。最终将重组FEN1用于实时荧光PCR偶联高特异核酸侵入信号扩增法检测了乙醛脱氢酶2基因(aldh2)的基因型,得到了准确的分型结果,表明重组FEN1能用于基因多态性的分型检测中,为发展基于核酸侵入反应的核酸检测方法提供了可靠的工具酶。 展开更多
关键词 flap核酸内切酶1 信号放大 活性测定
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SUMO-1 modification of FEN1 facilitates its interaction with Rad9-Radl-Husl to counteract DNA replication stress 被引量:1
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作者 Xiaoli Xu Rongyi Shi +10 位作者 Li Zheng Zhigang Guo Liangyan Wang Mian Zhou Ye Zhao Bing Tian Khue Truong Yuan Chen Binghui Shen Yuejin Hua Hong Xu 《Journal of Molecular Cell Biology》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期460-474,共15页
Human flap endonuclease 1 (FEN1) is a structure-specific, multi-functional endonuclease essential for DNA replication and repair. We and others have shown that during DNA replication, FEN1 processes Okazaki fragment... Human flap endonuclease 1 (FEN1) is a structure-specific, multi-functional endonuclease essential for DNA replication and repair. We and others have shown that during DNA replication, FEN1 processes Okazaki fragments via its interaction with the proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Alternatively, in response to DNA damage, FEN1 interacts with the PCNA-like Radg-Radl-Husl complex instead of PCNA to engage in DNA repair activities, such as homology-directed repair of stalled DNA replication forks. However, it is unclear how FEN1 is able to switch between these interactions and its roles in DNA replication and DNA repair. Here, we report that FEN1 undergoes SUMOylation by SUMO-1 in response to DNA replication fork-staUing agents, such as UV irradiation, hydroxyurea, and mitomycin C. This DNA damage-induced SUMO-1 modification promotes the interaction of FEN1 with the Radg-Rad1-Husl complex. Furthermore, we found that FEN1 mutations that prevent its SUMO-1 modification also impair its ability to interact with HUS1 and to rescue stalled replication forks. These impairments lead to the accumulation of DNA damage and heightened sensitivity to fork-staUing agents. Altogether, our findings suggest an important role of the SUMO-1 modification of FEN1 in regulating its roles in DNA replication and repair. 展开更多
关键词 flap endonuclease 1 Rad9-Rad1-Hus1 complex replication stress SUMOYLATION
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姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响 被引量:7
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作者 邹娇 陈彬 +3 位作者 李强 朱琳琳 付晓红 王祥卫 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期1809-1814,共6页
目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0... 目的探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制。方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20μg/m L)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响。结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30μmol/L;与单独2μg/m L CDDP处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素、30μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)%、(51.1±0.5)%、(29.4±0.3)%,P<0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20μmol/L姜黄素联合2μg/m L CDDP、5μg/m L CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)%、(42.4±0.3)%、(31.6±0.4)%,P<0.05];2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P<0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)%vs(18.7±0.2)%,P<0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/m L CDDP联合20μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P<0.05)。结论姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 CISPLATIN fen1 乳腺癌
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瓣状内切核酸酶1基因重组真核表达质粒的构建及鉴定
10
作者 潘万龙 方岩 +5 位作者 许舸 单雪峰 徐蕾 陶颖 黄媛 胡接力 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期181-183,187,共4页
目的构建瓣状内切核酸酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)基因重组真核表达质粒,并进行鉴定。方法提取L02细胞总RNA,逆转录合成cDNA,经巢式PCR扩增FEN1基因,定向克隆至载体pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒,经酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确... 目的构建瓣状内切核酸酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)基因重组真核表达质粒,并进行鉴定。方法提取L02细胞总RNA,逆转录合成cDNA,经巢式PCR扩增FEN1基因,定向克隆至载体pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒,经酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确的真核表达质粒转染293T细胞,Western blot检测FEN1蛋白的表达。结果 FEN1基因重组真核表达质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;在相对分子质量约47 000处可见目的蛋白条带,转染细胞中FEN1蛋白表达量较空载体转染组及空白细胞对照组提高约3倍。结论已成功构建了FEN1基因重组真核表达质粒,并可在293T细胞中过表达FEN1。 展开更多
关键词 瓣状内切核酸酶1 真核细胞 基因表达
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火球菌Pyrococcus furious瓣状核酸内切酶1的表达纯化及酶学特征
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作者 谢娟娟 王风平 刘喜朋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1352-1361,共10页
【目的】克隆表达和纯化火球菌Pyrococcus furious来源的瓣状核酸内切酶1基因pFEN1(PF1414),对该蛋白的活性和酶学特征进行鉴定和分析。【方法】将pFEN1在大肠杆菌中进行重组表达,经亲和层析纯化得到电泳纯蛋白;利用人工合成的荧光标记... 【目的】克隆表达和纯化火球菌Pyrococcus furious来源的瓣状核酸内切酶1基因pFEN1(PF1414),对该蛋白的活性和酶学特征进行鉴定和分析。【方法】将pFEN1在大肠杆菌中进行重组表达,经亲和层析纯化得到电泳纯蛋白;利用人工合成的荧光标记的寡核苷酸片段作为底物,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定pFEN1在体外的酶学特性以及与其他蛋白的相互作用。【结果】pFEN1重组蛋白能在大肠杆菌中进行高效表达;高于100 mmol/L的NaCl会抑制pFEN1的活性;pFEN1的核酸酶活性依赖于金属离子Mg^(2+)或Mn^(2+),且Mn^(2+)的催化效率优于Mg^(2+);来自嗜热古菌的pFEN1是一种耐高温蛋白,最适反应温度为60–65°C;增殖细胞核抗原(PCNA)能促进pFEN1的内切酶活性。【结论】本研究证实pFEN1是一种Mg^(2+)或Mn^(2+)依赖的核酸内切酶,且PCNA能促进该酶的活性。 展开更多
关键词 嗜热古菌 火球菌 瓣状核酸内切酶1 增殖细胞核抗原
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基于人皮瓣核酸内切酶抗癌策略的研究进展 被引量:1
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作者 马龙 王海月 +1 位作者 周津 曹秀琪 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第3期1-7,共7页
人皮瓣内切酶1(human flap endonuclease1,FEN1)作为一种结构特异型的5′-核酸酶,在DNA复制和修复系统中起着重要的作用.FEN1在多种癌细胞中高表达,与癌症的发生和发展密切相关.癌细胞中某些DNA修复元素的上调是对放化疗策略产生抵抗和... 人皮瓣内切酶1(human flap endonuclease1,FEN1)作为一种结构特异型的5′-核酸酶,在DNA复制和修复系统中起着重要的作用.FEN1在多种癌细胞中高表达,与癌症的发生和发展密切相关.癌细胞中某些DNA修复元素的上调是对放化疗策略产生抵抗和耐药的重要原因之一,是癌症治疗的瓶颈.近年来,FEN1的作用机制被逐渐揭示,其在抗肿瘤策略开发中的意义也逐步受到重视.本文综述了FEN1的生物学功能和作用机制以及FEN1在癌症中的作用,从合成致死角度探索FEN1抑制剂抗癌的可能以及FEN1抑制剂的研究进展. 展开更多
关键词 抗癌 人皮瓣内切酶1 抑制剂 合成致死 增敏剂
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Taq DNA聚合酶及Flap核酸内切酶的玻璃化室温储存方法研究 被引量:1
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作者 邢思熙 阚俊虎 +5 位作者 王润元 王启扉 盛楠 邹秉杰 宋沁馨 周国华 《药物生物技术》 CAS 2020年第6期495-500,共6页
研究对商品化的Taq DNA聚合酶及自表达的重组Flap核酸内切酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)进行玻璃化的方法,实现室温(25℃)条件下储存的目的。对购置的商品化的Taq DNA聚合酶使用海藻糖作为赋形剂,对实验室自表达的FEN1使用海藻糖及普... 研究对商品化的Taq DNA聚合酶及自表达的重组Flap核酸内切酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)进行玻璃化的方法,实现室温(25℃)条件下储存的目的。对购置的商品化的Taq DNA聚合酶使用海藻糖作为赋形剂,对实验室自表达的FEN1使用海藻糖及普鲁兰糖作为赋形剂,采用快速降温以及真空冷冻干燥除水的方法进行玻璃化制备。产品外部放置干燥剂并密封于室温条件下存放,分别对两种玻璃化酶进行时间储存稳定性的考察,对Taq DNA聚合酶采用考察扩增效率与扩增灵敏度的方式表征酶活,对FEN1采用已建立的方法测定酶活性的绝对数值。采用玻璃化产品相对对照品随时间变化有无显著性差异来预计储存时间。时间稳定性考察说明玻璃化Taq DNA聚合酶在室温下可稳定储存至少6个月,其相对于按照说明书中-30℃存放的对照品酶的扩增灵敏度在0 d至第6个月无显著性差异(P>0.05),1年出现后延产生显著性差异(P<0.01)。玻璃化FEN1在室温下可稳定储存至少1个月,其相对于-30℃存放的对照品酶,活性比值在0 d至30 d无显著性差异(P>0.05),第2个月出现下降(P<0.01)。本文建立的方法成功制备了两种玻璃化酶,可用于室温下储存较长时间,便于运输和使用。 展开更多
关键词 Taq DNA聚合酶 重组flap核酸内切酶1 玻璃化 赋形剂 室温储存 稳定性考察
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