肝素黄杆菌肝素酶I的纯化

目的研究肝素黄杆菌素酶I的纯化方法。方法在中性低离子强度的磷酸盐缓冲液中,肝素酶能分别与DEAE和CM离子柱结合。基于此现象,提出了一种简便的肝素酶纯化工艺。结果粗酶液通过羟基磷灰石吸附-解吸附处理、DEAE-FF柱层析、CM-纤维素柱层析可获得电泳纯的肝素酶I。其比活为70.18U/mg蛋白,纯化倍数为159.5,酶活回收率13.4%。结论此纯化工艺比较简单,可获得电泳纯的肝素酶I。

肝素黄杆菌肝素酶性质的研究

目的研究肝素酶I的理化性质。方法测定肝素酶I的相对分子质量、等电点、紫外吸收光谱、N端序列,以及各种环境因素对酶活性和酶稳定性的影响。结果相对分子质量约为43×103,等电点为8.5。N端序列不能测到。酶的最适催化条件为:温度45℃,pH6.4～7.0,离子强度150mmol/L。酶在35℃以上极易失活,在pH7～11之间基本稳定。该酶的最大紫外吸收位于280nm。H2O2(1mmol/L,10mmol/L),NaN3(10mmol/L,100mmol/L),乙腈(1%,10%),1mol/L盐酸胍和1mol/L尿素对酶的活性无影响;1%SDS,4mol/L盐酸胍和4mol/L尿素则使酶完全失活;CaCl2和MgCl2是该酶的激活剂,FeCl2则对该酶的活性具有抑制作用。结论通过实验,测定了肝素酶I的主要理化性质。