丙酮沉淀法提取金花茶多糖的研究

[目的]确定丙酮沉淀法提取花金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)多糖的最佳工艺条件。[方法]以金花茶为研究对象,以水为溶剂,在一定的条件下提取金花茶多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取沉淀剂用量、沉淀时间和离心时间3个因素做单因素试验,然后以离心时间、丙酮加入量、沉淀时间作为因素,进行正交试验,来确定最佳提取条件。[结果]丙酮沉淀法的最佳工艺条件为:离心时间为15 min,丙酮加入量为20 ml、沉淀时间为12 h,在此条件下的所得粗茶多糖含量量为0.003 7 g。[结论]该研究建立的检测方法简便、快速,具有较强的实用性。

金花茶多糖单一成分的化学结构特征解析

目的:对金花茶粗多糖经过离子交换柱层析和凝胶柱层析法得到分子质量为4.15×106u的多糖单一成分(TPS3-1)的化学结构特征进行分析,旨为金花茶多糖的构效关系研究提供依据。方法:采用构成糖分析、红外光谱(IR)分析、核磁共振(NMR)分析以及阶梯式部分酸水解分析等手段对其毛发区域的化学结构特征进行解析。结果:构成糖分析结果显示,TPS3-1中中性糖约为半乳糖醛酸的2倍,其中鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖与葡萄糖质量比为1:4.2:3.0:0.4,另外,62.58%的半乳糖醛酸残基以甲酯化形式存在。阶梯式部分酸水解分析结果显示,约有73%的中性糖降解至0.01mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄聚糖支链、阿拉伯聚糖支链和半乳聚糖支链组成。约5%的中性糖降解于0.05mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄糖或半乳糖与阿拉伯糖交替连接的寡糖支链组成。约13%的中性糖降解于0.5mol/L三氟乙酸溶液中,该分子片段主要由半乳糖和阿拉伯糖交替连接的寡糖支链以及零散分散于聚半乳糖醛酸链上的阿拉伯糖残基组成。结论:TPS3-1由高度酯化的半乳糖醛酸平滑区域和3类不同化学结构特征的毛发区域片段组成。

金花茶种子对激素相关性肿瘤体外抑制作用的实验研究

目的观察金花茶种子不同提取物对激素相关性肿瘤体外抑制作用。方法采用噻唑蓝比色法(MTT)检测金花茶种子不同提取物对人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3细胞增殖的影响。结果金花茶种子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都显示了较强的抑制人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3细胞增殖的作用,其IC50分别为85.88,67.62,55.71μg/ml和63.06,56.20,68.53μg/ml,且抑制作用和样品浓度呈量效关系。结论金花茶种子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分在体外对激素相关性肿瘤具有抑制作用,为其抗癌活性的有效部位。

金花茶叶多糖超声波辅助提取工艺优化和含量测定

采用超声波辅助提取金花茶叶多糖(PCCT),在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对PCCT提取工艺进行优化研究,以多糖提取率为考察指标,使用苯酚-硫酸法测定PCCT含量。结果表明,最佳提取工艺条件为水料比46:1(mL/g)、温度87℃、提取时间54min、共提3次,测得PCCT的提取率4.39%,鲜叶PCCT含量66.8mg/g。

基于紫外分光光度法的金花茶叶中总黄酮含量的测定

[目的]建立金花茶材叶中总黄酮含量的测定方法。[方法]采用紫外分光光度法测定药材中总黄酮含量。[结果]采用紫外分光光度法测定总黄酮含量时,在0.00864～0.06912mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率=100.4%,RSD=0.0180。[结论]所用方法简便、准确,可用于金花茶药材的质量控制。

不同粒径金花茶茶花粉体物理特性

研究3种不同粒径范围金花茶茶花粉体的流动性、溶解性、功能成分皂苷溶出量等物理特性,并结合激光粒度分布仪和扫描电子显微镜进行直观分析。结果表明:普通粉(平均直径133.90μm)、超微粉(平均直径15.76μm)、纳米粉(平均直径201.50 nm)的粒径依次减小,细胞破碎程度、不规则度依次增加,差异显著;随粒径减小,粉体的流动性、松密度、润湿性、膨胀力先减小后增加,以普通粉最高;持水力普通粉最高,超微粉次之;水溶性、皂苷溶出量呈现先增大后略微减小的趋势。说明不同粒径金花茶茶花粉体特性各不相同,综合比较下,超微粉具有较高的溶解率、皂苷溶出量,更容易被人体吸收,生物利用度高,加工方便,具有较好的开发前景。

金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡及其机制的研究

目的探讨金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的机制。方法用不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物(CCEB)干预人前列腺癌PC3细胞,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测其对细胞凋亡及Bax、Bcl-2等表达的影响。结果 CCEB作用于人前列腺癌PC3细胞后,引起PC3细胞DNA片段化率增大,线粒体膜电位下降,细胞内caspase-3活性增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少,胞浆中细胞色素c含量增加。结论 CCEB诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关。

金花茶总黄酮体外抗肿瘤活性的实验研究

目的观察金花茶总黄酮对4种肿瘤细胞株体外增殖的作用。方法采用噻唑蓝染色法(MTT法)检测金花茶总黄酮在体外对人肝癌细胞株(SMMC-7721)、人高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)、人胃腺癌细胞株(SGC-7901)、人大细胞肺癌细胞株(H460)的增殖抑制率,并计算相应的半数生长抑制浓度(IC50)。结果金花茶总黄酮对SMMC-7721、CNE-1、SGC-7901、H460均有抑制作用(P<0.05),且呈一定的浓度依赖性,IC50分别为242.44μg/ml、313.79μg/ml、259.87μg/ml、385.87μg/ml。结论体外实验显示金花茶总黄酮有抗肿瘤活性。

金花茶茶花HPLC指纹图谱的研究

目的:以10批次的金花茶茶花为研究对象,建立金花茶茶花高效液相指纹图谱。方法:微波法提取金花茶茶花中的有效成分,采用高效液相色谱法建立金花茶茶花的指纹图谱。结果:建立了金花茶茶花HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了34个共有峰,10批次金花茶茶花指纹图谱经国家药典委员会规定的相似度计算软件(2004A)计算,共有峰保留时间的相对偏差较小,相似度良好。结论:建立金花茶茶花高液相指纹图谱,建立共有模式,可作为科学评价金花茶茶花质量的检测方法。

金花茶叶水提物的降脂功能试验研究

用高脂饲料喂养Wistar大鼠15d,造成大鼠高血脂症模型,然后分别灌胃(ig)给予金花茶叶水提物每天0.8,0.4,0.2g/kg,以临床降血脂药物洛伐他汀(0.01g/kg)为阳性对照.灌胃实验第43天后取血清测定总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C).结果金花茶叶水提物高、中剂量组均能降低高血脂症模型大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量,效果与阳性对照药洛伐他汀相当,与高脂对照组比较,经t检验,差异均有显著性意义;高剂量组和洛伐他汀还能升高高血脂症模型大鼠血清中HDL-C含量.表明金花茶叶水提物具有明显的降血脂作用.

金花茶种子对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响

目的观察金花茶种子95%乙醇提取物及95%乙醇提取物的乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水溶部分3个极性部位对体外培养不同肿瘤细胞增殖作用的影响。方法用RPMI1640培养基,常规传代培养人肺癌A549细胞、乳腺癌MCF-7细胞。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测A549细胞和MCF-7细胞活性。结果金花茶种子醇提取物部分、正丁醇部分和水溶部分对A549细胞和MCF-7细胞增殖均有抑制作用,其IC50分别为95.2,99.06,107.72μg/ml;215.7,200.35,203.24μg/ml,且均具有剂量依赖性的抑制作用。结论金花茶种子95%乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分为其抗癌活性的有效部位,并且对A549细胞增值的活性更强。

金花茶叶中叶绿素的提取工艺及稳定性研究

[目的]研究金花茶叶中叶绿素的提取方法及温度、pH、光照等对叶绿素稳定性的影响。[方法]采用单因素试验和正交试验分别考察了提取溶剂种类、提取温度、提取时间、料液比对金花茶叶叶绿素提取的影响。此外,从光照时间、温度和pH三个方面来研究叶绿素稳定性。[结果]金花茶叶叶绿素提取的最佳工艺条件为:提取剂为95%乙醇和丙酮的混合液(V/,V 1∶1),提取温度为50℃,料液比为1∶50,提取时间为3.0 h。影响金花茶叶叶绿素提取效率的主次因素顺序是,提取温度>提取时间>料液比,而以超声波辅助提取更有优势。叶绿素在高温、强酸、强碱和光照下很不稳定。[结论]该方法简便、准确、高效,可用于金花茶中叶绿素的提取。

金花茶对衰老大鼠脂代谢及肝细胞凋亡的影响

目的探讨金花茶调节衰老大鼠脂代谢及抗肝凋亡的作用。方法健康雄性SD大鼠40只随机分为4组。1组为空白对照组,2～4组予D-半乳糖腹腔注射法建立大鼠亚急性衰老模型后,其中2组作为衰老模型组,3、4组再分别以高、低浓度金花茶灌胃干预40天。测大鼠尾静脉血总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量,测肝脏组织总胆固醇、甘油三酯含量和Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果与衰老模型组相比,高、低浓度金花茶干预组大鼠血清高密度脂蛋白浓度和Bcl-2 mRNA显著升高(P<0.05);血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白浓度和肝组织总胆固醇、甘油三酯含量、Bax mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。高、低浓度金花茶组间比较,上述指标有统计学差异(P<0.05)。结论金花茶可调节衰老大鼠的血脂,减少肝脏脂肪堆积,降低肝细胞凋亡水平,以降低动脉粥样硬化发病风险。

金花茶种子对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响

目的观察金花茶种子乙醇提取物及乙醇提取物的乙酸乙酯部分、正丁醇部分、水溶部分3个极性部位对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响。方法用RPMI1640培养基体外培养人单核细胞白血病细胞株U937细胞,采用噻唑蓝比色法(MTT),检测金花茶种子乙醇提取物及不同极性部位对细胞增殖的抑制作用。结果金花茶种子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分对U937细胞增殖均有抑制作用,其IC50分别为89.74、65.19、63.74μg/ml,且抑制作用与样品浓度呈量效关系。结论金花茶种子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分为其抗癌活性的有效部位。

金花茶速溶茶的研制

以金花茶鲜叶为原料,经过浸提、浓缩得浓缩液,配以适量辅料调配后经喷雾干燥生产金花茶速溶茶。采用正交试验确定金花茶速溶茶的最佳配方为:金花茶浓缩液添加量为10%,β-环状糊精添加量为0.4%,麦芽糖醇添加量为4.5%,海藻糖添加量为3.0%(均为质量体积比)。所得的产品呈浅黄棕色,颗粒细腻均匀,溶解速度快,具有金花茶独特的香气和滋味。

金花茶抑制人食管鳞癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的初步探讨金花茶花朵中的天然成分对人食管鳞癌细胞的生长抑制作用及其诱导细胞凋亡的情况。方法用不同浓度的金花茶花朵的水提取物作用于人食管鳞癌Eca109细胞。采用台盼蓝染色法检测金花茶花朵的水提取物对Eca109细胞活力的影响,应用透射电镜观察金花茶花朵的水提取物对癌细胞亚结构变化的作用。结果金花茶花朵的水提取物可抑制人食管鳞癌Eca109细胞的生长,其作用呈浓度和时间依赖性关系,并且能诱导细胞凋亡。结论金花茶花朵的水提取物能抑制人食管鳞癌细胞的增殖,并可诱导其凋亡,从而为金花茶作为食管癌的化学预防制剂提供实验依据。

关于金花茶学名的订正

通过检查Camellia nitidissima Chi和Camellia chrysantha(Hu)Tuyama的命名模式,发现它们是完全一致的。按照国际植物命名法规,Camellia chrysantha(Hu)Tuyama是不合法的异名,小果金花茶也就自然地被转移到Camellia nitidissima var.microcarpa Chang et Ye(C.chrysantha var.microcarpa Mo et Huang;C.microcarpa Mo et Huang)。

基于RP-HPLC法的金花茶叶中槲皮素含量测定

[目的]建立金花茶叶中槲皮素含量的测定方法。[方法]采用RP-HPLC法测定药材中槲皮素含量。[结果]在3.0～16.7μg/ml的浓度范围内线性关系良好(r=0.9994),平均回收率为98.27%,RSD=1.18%。[结论]所用方法简便、准确,可用于金花茶药材的质量控制。

金花茶多糖的凝集反应特性初探

采用比色法分析比较了金花茶多糖与蓖麻凝集素、伴刀豆凝集素等凝集素的凝集反应特性。结果显示,不同凝集素均能与金花茶多糖发生凝集反应,但凝集反应程度有明显差异。特异结合糖残基为半乳糖的蓖麻凝集素与金花茶多糖的凝集反应效果最显著,而特异结合糖残基同样为半乳糖或其衍生物的海红豆凝集素、欧卫矛凝集素、怀槐凝集素和花生凝集素的凝集反应程度则比较弱。当金花茶多糖浓度上升至6.59 mg/mL时,蓖麻凝集素的凝集反应是其他凝集素的6～10倍。另一方面,特异结合糖残基为甘露糖的伴刀豆凝集素与金花茶多糖虽然有类似的凝集反应特征,但是其凝集反应程度明显弱于蓖麻凝集素。从以上结果推测,凝集素的分子形态对金花茶多糖的凝集反应有显著影响。

响应面微波辅助提取金花茶花多糖工艺研究

为优化金花茶花中水溶性多糖微波提取工艺,在单因素试验的基础上,利用响应面分析法建立了金花茶花多糖(CCFP)微波提取的二次响应曲面方程.试验的三因素(温度、时间和液料比)对CCFP提取有不同的影响.结果表明,在试验范围内,通过方差分析得出,微波提取温度对CCFP影响最大,其次为提取时间,液料比对CCFP提取率影响最小.试验因素的最佳条件为:提取温度77℃,时间10 min,液料比为26 m L∶1 g.在此条件下,CCFP提取率可达3.40%,与模型预测值3.56%很接近.