新疆两色金鸡菊总黄酮含量测定显色反应体系

目的:为准确测定新疆两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)中总黄酮的含量,选择合适的显色反应体系.方法:通过比较Na NO2-Al(NO3)3/Al Cl3-Na OH和Al(NO3)3/Al Cl3+KAc两种反应显色体系条件下两色金鸡菊提取物和对照品芦丁、槲皮素和槲皮苷的连续波长扫描图谱,考察两种反应体系光谱吸收曲线和最大吸收峰值!max,进而选择适合测定两色金鸡菊中总黄酮的反应体系.结果:样品与槲皮素或槲皮苷对照品在Al(NO3)3/Al Cl3+KAc显色反应体系下产生的光谱吸收曲线相似,最大吸收峰峰位值更接近.因此,可以用该显色反应体系快速测定样品中总黄酮的含量.结论:该测定方法简单易行,能准确测定新疆两色金鸡菊中总黄酮的含量.

新疆两色金鸡菊提取物抗脂质过氧化及对糖尿病小鼠的保护作用

目的比较新疆两色金鸡菊乙酸乙酯和正丁醇提取物体外抗脂质过氧化的能力,并考察正丁醇提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病小鼠体重、体内生化指标和主要脏器的影响。方法响应面优化提取两色金鸡菊总黄酮部位,提取液经石油醚萃取后,剩余水相分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,获得乙酸乙酯(EAE)和正丁醇提取物(BE)。采用硫代巴比妥酸法测定提取物抗脂质过氧化能力;STZ诱导的糖尿病小鼠灌胃给予正丁醇提取物(0.2、0.4、0.8 g·kg^(-1))连续4周,监测小鼠体重变化、血浆生化指标以及肝脏、胰腺、肾脏的脏器系数和组织病理切片考察对机体的作用。结果在亚油酸反应体系下,测得EAE和BE抗脂质过氧化能力(SC50)分别为:(443.96±11.24)mg·L^(-1)和(840.29±16.38)mg·L^(-1);采用大鼠肝匀浆体系测得结果为:(23.59±3.67)mg·L^(-1)和(60.37±4.27)mg·L^(-1)。正丁醇提取物能明显改善糖尿病小鼠体重下降的趋势,增加脏器系数;同时能明显改善体内多项生化指标;经HE染色病理切片检查,正丁醇提取物各剂量组均对受损的肝脏、胰腺和肾脏具有一定的修复和改善作用。结论新疆两色金鸡菊乙酸乙酯和正丁醇提取物具有一定的抗脂质过氧化的能力,正丁醇提取物对糖尿病小鼠受损器官有一定的保护作用。

两色金鸡菊总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

为探讨两色金鸡菊总黄酮(Coreopsis tinctoria Nutt flavonoids,CTF)对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。采用Langendorff逆行恒压灌流方法建立离体大鼠心脏I/R模型。观察I/R期间CTF对左心室舒张压、左心室收缩压、室内压最大上升速率、室内压最大下降速率和心率的影响。测定心肌组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量;采用TTC染色法评价心肌梗死程度。结果显示,与模型组比,CTF预处理组的左心室发展压(LVDP)及±dp/dtmax的绝对值均显著升高;CTF预处理组可使心肌组织中的SOD和GSH-Px的含量显著增加;MDA的含量显著降低,心肌梗死程度也明显降低。由此可知,CTF对大鼠缺血再灌注心脏具有一定的保护作用,其机制可能与CTF可以提高氧自由基清除能力,抑制氧自由基产生,降低脂质过氧化损伤有关。

昆仑雪菊结合型黄酮类化合物的分离与鉴定

昆仑雪菊结合型黄酮类化合物因与细胞壁以共价键结合,难以直接用溶剂萃取出来。本研究采用碱降解法使结合型化合物释放出来并优化降解条件,在此基础上,利用不同溶剂对降解产物进行提取筛选出最佳的溶剂得到粗提物,利用常压硅胶柱层析和SepdexLH-20凝胶柱层析对粗提物中的黄酮类化合物进行分离纯化得到单体化合物,采用Fe3+还原/抗氧化能力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)法、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)法及2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2’-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)法对单体化合物进行抗氧化活性评价。结果表明:最佳的碱降解时间2h、温度50℃、NaOH浓度2mol/L,最佳提取溶剂为正丁醇;从粗提物中分离得到2个单体化合物,采用核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)和电喷雾质谱(electrospray ionization mass spectra,ESIMS)鉴定其化学结构分别为金鸡菊查尔酮-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖(化合物1)、3’,4’,7,8-四羟基二氢黄酮(化合物2);活性测定结果表明两个化合物的总抗氧化能力均强于阳性对照VE,化合物1与化合物2对DPPH自由基的半数抑制率IC50分别为(17.29±0.17)μmol/L和(70.09±0.09)μmol/L、对ABTS+·半数抑制率IC50分别为(22.86±0.21)μmol/L和(33.4±0.18)μmol/L,远低于阳性对照VE的IC50值(分别为(78.08±1.63)μmol/L和(38.54±0.42)μmol/L),说明两个化合物均有很强的抗氧化活性。

响应面分析法优化新疆两色金鸡菊中总黄酮提取条件

目的采用响应面分析法(RSM)优化超声波提取新疆两色金鸡菊中总黄酮的提取条件。方法采用BoxBehnken中心组合设计及RSM分析影响新疆两色金鸡菊中总黄酮的超声波提取条件。结果经RSM数据处理,获得最佳提取条件为:超声提取30 min,液料比21∶1,乙醇浓度60%。在该条件下,新疆两色金鸡菊中总黄酮平均提取率(4.65±0.036)%(n=3)。结论在最佳提取条件下,可从新疆两色金鸡菊中获得质量稳定、含量较高的总黄酮提取物。

新疆两色金鸡菊中总黄酮含量测定方法的研究

建立测定新疆两色金鸡菊提取物中总黄酮含量的分光光度法,为测定样品中总黄酮的含量提供依据。通过比较Al(NO3)3或Al Cl3+KAc两种反应显色体系条件下两色金鸡菊提取物和对照品槲皮苷的连续波长扫描图谱,考察两种反应体系连续波长扫描光谱吸收曲线和最大吸收峰峰位值,建立测定两色金鸡菊提取物中总黄酮的分光光度法。结果显示新疆两色金鸡菊提取物和槲皮苷对照品在Al Cl3+KAc显色反应体系下产生的光谱吸收曲线相似,最大吸收峰峰位值更接近。因此,可以使用Al Cl3+KAc显色反应来测定新疆两色金鸡菊中总黄酮的含量。

和田昆仑雪菊降压活性部位初步筛选

目的昆仑雪菊降压活性有效部位的初步筛选。方法取30只健康家兔随机分为正常对照组、卡托普利组、雪菊石油醚萃取部位组、乙酸乙酯萃取部位组、正丁醇萃取部位组和水部位组,耳缘静脉注射给药,应用BL-420F生物机能实验系统记录仪观察各组家兔动脉血压的变化情况。结果与正常对照组相比,雪菊乙酸乙酯萃取部位组、正丁醇萃取部位组以及水部位组家兔动脉收缩压均显著下降(P<0.05);雪菊乙酸乙酯萃取部位组家兔动脉舒张压下降极其明显(P<0.01),水部位组家兔动脉舒张压有显著性差异(P<0.05)。结论昆仑雪菊乙酸乙酯、正丁醇和水萃取部位均可使家兔的血压明显下降。

两色金鸡菊HPLC特征图谱的建立及多指标成分含量测定

目的:采用中药特征图谱技术对新疆地区11个不同产地两色金鸡菊进行分析并建立同时测定绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、黄酮奥卡宁5种化学成分含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法,Inertsil WondaSil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B),梯度洗脱;柱温:30℃;检测波长:280 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:20μL。结果:建立了两色金鸡菊乙醇提取物HPLC特征图谱,方法学考察结果符合相关要求,标定了13个共有峰;11批样品中有2批样品相似度<0.90,分别来自喀什乌恰县和昌吉州玛纳斯县,其余9批样品均>0.92;经对比确定5个化学成分(绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、黄酮奥卡宁),并确定其含量。结论:建立的两色金鸡菊特征图谱及其中5种化学成分含量测定方法稳定、可靠,精密度高,重复性好,可为其质量控制研究提供依据。

昆仑雪菊中5个黄酮类化合物抗氧化活性的DFT研究

采用量子化学密度泛函理论(DFT)的B3LYP/6-311G++(2d,2p)//B3LYP/6-31G方法,对昆仑雪菊中已分离得到的5个黄酮类化合物(马里苷、金鸡菊噢、黄杉素、紫铆因和奥卡宁)进行了优化及单点能计算。从黄酮分子的几何构型、氢键数目、不同位置酚羟基的解离焓(BDE)、HOMO和LUMO前线分子轨道图及其能级差分析所得,昆仑雪菊黄酮类化合物的羟基数目和形成的分子内氢键数目越多,抗氧化活性越强;羟基的活性因其位置不同而有所差异,且5个化合物B环4'位羟基的解离焓都最小,是抗氧化作用的主要活性位点;C环3位羟基的存在并没有提高黄杉素的抗氧化活性。

新疆昆仑雪菊总黄酮紫外分光光度法含量测定的适应性研究

目的利用三种显色法测定雪菊总黄酮含量,优选最佳显色法。方法分别采用NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH显色法、AlCl_3-KAc显色法、三乙胺显色法测定雪菊总黄酮的含量。结果雪菊总黄酮含量分别为19.67%、3.17%、4.11%。结论 NaNO2-Al(NO_3)_3-NaOH显色法测定总黄酮含量时受其他含有邻二酚羟基的酚酸类、木脂素类成分的影响,AlCl_3-KAc显色法、三乙胺显色法可避免这种影响;AlCl_3-KAc显色法的稳定性差,三乙胺显色法方法学结果良好,可用于测定雪菊总黄酮含量。

随机质心映射优化法对新疆雪菊中黄酮和多酚提取工艺的研究

采用随机质心优化设计研究了新疆雪菊中黄酮和多酚类化合物的亚临界水提取工艺。实验结果表明，亚临界水可有效地提取雪菊中的黄酮和多酚类物质，通过对提取温度、料液比和提取时间三个因素的优化和验证，获得了亚临界水的最佳提取工艺条件为：提取温度160～170℃、料液比0．04、提取时间47min。在该条件下，雪菊黄酮和多酚总含量达到了25．85％以上，其中，总黄酮的含量大于15．81％，总多酚的含量大于10．04％。随机质心优化法可以不进行单因素实验直接优化实验参数，具有优化过程简单，实验次数少、广泛的适应性等特点，而亚临界水同时提取多酚和黄酮的工艺完全避免有机溶剂和酸的使用，是高效、无毒、环保的绿色提取技术。

新疆两色金鸡菊中绿原酸与总黄酮含量测定

目的:建立HPLC法和UV法分别测定新疆两色金鸡菊中绿原酸和总黄酮的含量。方法:采用HPLC法测定绿原酸含量,Agilent Eclipse Plus C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以流动相0.1%磷酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长348 nm,柱温30℃。采用UV法测定总黄酮含量,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH方法显色,以芦丁为对照,在波长522 nm处检测。结果:方法在考察的浓度范围内线性关系良好,精密度、准确度和稳定性RSD均小于5%。不同产地新疆两色金鸡菊绿原酸含量为1.39%~5.76%,总黄酮含量为19.10%~28.40%。结论:本试验建立了含量测定的方法,简便可靠,重现性好,适用于两色金鸡菊中绿原酸和总黄酮的含量测定。

两色金鸡菊黄酮提取物对高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤维化的影响及相关机制研究

目的:探讨两色金鸡菊黄酮取物对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜纤维化的影响及其作用机制。方法:通过高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外糖尿病肾病细胞模型,使用不同浓度的两色金鸡菊黄酮提取物进行干预,采用CCK-8细胞增殖实验结合细胞形态学观察确定黄酮提取物的使用浓度后将细胞共分为5组,分别为正常对照组、模型组及两色金鸡菊黄酮提取物25、50、100μg/mL组,采用Western blot法检测纤维化因子纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并通过检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、信号分子Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4、NADPH氧化酶4(Nox4)蛋白研究两色金鸡菊黄酮提取物的抗纤维化机制。结果:两色金鸡菊黄酮提取物能显著抑制高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞中纤维化因子的表达。结论:两色金鸡菊黄酮提取物能抑制高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜的纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β_1/Smads/Nox4信号通路有关。

Box-Behnken响应面法优化昆仑雪菊总黄酮提取工艺及抗氧化研究

目的 优化新疆昆仑雪菊总黄酮的提取工艺,并对其抗氧化活性进行研究。方法 以单因素试验结果为依据,以雪菊总黄酮含量与浸膏得率为综合指标,采用响应面法,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度的影响。通过测定总黄酮清除DPPH自由基能力、还原力及抑制自发性脂质过氧化的作用研究其抗氧化作用。结果 雪菊总黄酮最佳提取工艺为:乙醇体积分数为60%,料液比为1∶67,提取温度为80℃,提取时间为21min。雪菊总黄酮清除DPPH自由基的IC50为7.16μg/ml,雪菊总黄酮浓度为100μg/ml时吸光度为1.75,雪菊总黄酮浓度为200μg/ml时脂质过氧化抑制率为25.13%。结论 优选的提取工艺稳定可行,可以用于雪菊总黄酮的提取,体外抗氧化试验证明雪菊总黄酮具有较好的抗氧化性。

昆仑雪菊茶总黄酮提取及抗氧化活性研究

以昆仑雪菊为原料,在单因素试验基础上,结合BoxBehnken响应面法,研究昆仑雪菊茶总黄酮的浸提工艺优化及抗氧化活性。结果表明:昆仑雪菊茶总黄酮的最佳浸提工艺条件为浸提时间13 min、浸提温度98℃、料液比178(g/mL),总黄酮得率为(20.39±0.07)%。最优条件下浸提物的DPPH·清除能力、铁还原力的IC_(50)分别为(82.40±1.98),(137.98±1.56)μg/mL,氧自由基吸收能力(ORAC值)为1 427.89μmol TE/g·DW,证明昆仑雪菊茶总黄酮具有很好的抗氧化活性。

新疆两色金鸡菊提取物体外清除自由基活性研究

以乙醇为溶剂,采用超声波辅助提取新疆两色金鸡菊.提取物经不同极性溶剂进行萃取,获得不同极性溶剂提取物.同时考察这些提取物在体外清除DPPH、ABTS+、羟自由基(*OH)和超氧自由基(*O2-)的能力.结果显示,新疆两色金鸡菊氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物清除DPPH的能力(SC50)依次是(7.6×10~3±4.02)μg/mL、(1.75×10~2±3.64)μg/mL、(1.34×10~2±2.75)μg/mL和(2.28×10~2±4.64)μg/mL;清除ABTS+自由基的能力(SC50)依次是(4.53×10~3±6.37)μg/mL、(1.26×10~2±2.97)μg/mL、(90.72±3.16)μg/mL和(1.28×10~2±5.78)μg/mL;清除*OH自由基的能力(SC50)依次是(3.86×10~3±5.79)μg/mL、(14.49±0.576)μg/mL、(13.80±0.672)μg/mL和(22.41±1.13)μg/mL.在不同自由基清除体系中,与阳性对照维生素C和叔丁基对羟基茴香醚相比,新疆两色金鸡菊不同极性溶剂提取物表现出强弱不同的自由基清除能力.

昆仑雪菊中黄酮类化合物的提取分离及抗氧化活性评价

通过正交试验优化提取条件,利用大孔树脂、反相硅胶等柱层析手段对昆仑雪菊的粗提液进行分离,并采用DPPH法对各分离部位进行抗氧化活性评价。结果表明:正交优化分析得到最优提取条件是料液比为1∶20(g∶m L),用体积分数70%的乙醇浸泡、提取昆仑雪菊2次,温度为80℃,时间为1 h,得到最佳昆仑雪菊总黄酮提取率为9.92%;从粗提物中分离得到1个单体化合物,采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定其化学结构为金鸡查尔酮;DPPH活性测定结果表明此化合物的抗氧化活性强于阳性对照芦丁,其IC50为10.21μg/m L。

两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导的细胞模型能量代谢紊乱的影响

目的观察两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1能量代谢紊乱的影响,探讨其保护作用机制。方法采用高糖高脂诱导HBZY-1细胞建立体外糖尿病肾病代谢紊乱细胞模型,将HBZY-1细胞分为正常组、模型组和两色金鸡菊黄酮成分不同剂量组。采用MTS实验检测模型细胞增殖水平,倒置显微镜观察模型细胞形态变化,细胞划痕实验观察模型细胞细胞外基质分泌,Westernblot检测细胞能量代谢调控因子5’腺苷-磷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)、乙酰辅酶a羧化酶1(ACC1)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)及氧化应激因子一氧化氮合酶(e NOS)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的蛋白表达。结果两色金鸡菊黄酮成分能抑制高糖高脂诱导的HBZY-1细胞增殖,细胞间隙增大、密度显著降低;两色金鸡菊黄酮成分促进模型细胞p-AMPKα、p-ACC1、e NOS的蛋白表达,抑制模型细胞SREBP1、NOX4、ACC1的蛋白表达;划痕实验结果显示,两色金鸡菊黄酮成分对模型细胞细胞外基质分泌有显著抑制作用,同时α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达显著降低。结论两色金鸡菊黄酮成分可能通过调控AMPK/SREBP1/ACC1能量代谢通路,抑制模型细胞增殖、氧化应激,进而改善肾脏纤维化病变。

昆仑雪菊中黄酮类化合物提取与纯化

用超声法提取昆仑雪菊中黄酮类化合物,通过大孔树脂对提取液进行纯化,纯化物经聚酰胺层析柱梯度洗脱得到初步分离物,通过颜色反应和紫外光谱扫描进行定性分析。设计正交实验得到超声法提取的最佳工艺条件是65%乙醇、料液比为1∶40、超声时间60 min,此条件下提取3次,总黄酮得率可达132.6 mg/g。通过聚酰胺柱层析法分离出五个组分,初步判断它们属于不同的黄酮类物质。超声法提取总黄酮,提取率较高,聚酰胺树脂对黄酮类化合物的分离效果较好。

昆仑雪菊总黄酮的提取及含量测定

采用紫外分光光度法测定不同提取物中总黄酮的含量．结果表明，解析热提法效率较高，提取所用时间较短．昆仑雪菊总黄酮在浓度为0．008-0．080mg·mL-1的范围内具有良好的线性关系，操作简便，重现性好，回归方程为A=15．508C-0．0044，R2=0．9995．水煮提液中的总黄酮含量最高，平均为16．62％；而乙醇回流提取液中总黄酮含量较低，为9．04％．稳定性实验结果表明，昆仑雪菊总黄酮在一个小时之内稳定性良好．昆仑雪菊中水溶性总黄酮含量高，有较好的应用前景．