制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。

制备两种P53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

目的P53作为转录因子在细胞应激时呈活化型，调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长，通常，通过各种机制P53呈非活化状态，其中包括P53C-末端负调控序列的作用。该研究目的是制备携带垒长和缺失这些负调控序列P53两种重组腺病毒和用流式细胞仪散点图（Flow cytometry scatter plot，FCM）检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）表达。材料和方法利用pAdEasy-Track载体系统，构建两种P53重组质粒并在细菌中产生重组体，转染L293细胞产生三种重组腺病毒。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞，FCM分析GFP表达。结果测序证明重组腺病毒：Ad—P53（del）缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区，Ad—P53（wtp）没有P53碱基缺失。Ad（empty carrier）无P53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端P53和全长p53两种重组腺病毒，Ad—p53（del），Ad-p53（wtp）及空载体Ad-（empty）。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠，可定量外源GFP表达，为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。

加味柴黄汤治疗湿热下注型高危人乳头瘤状病毒感染临床研究

目的:探讨加味柴黄汤治疗高危人乳头瘤状病毒感染湿热下注型的临床效果。方法:选取高危人乳头瘤状病毒感染湿热下注型患者200例。随机分为治疗组与对照组。对照组给予保妇康栓进行治疗。治疗组应用加味柴黄汤治疗。结果:治疗组治疗有效率为90.00%。对照组治疗有效率为66.00%。治疗组治疗有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组中医证候积分为(8.34±2.42)分。对照组中医证候积分为(11.64±3.12)分。治疗组改善明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组TNF-α为(7.24±0.39)pg/ml。对照组TNF-α(7.61±0.42)pg/ml。治疗组TNF-α改善明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组HPV转阴率为81.25%。对照组HPV转阴率为53.75%。治疗组HPV转阴率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组轻度腹泻,发生率为5.00%。对照组轻度腹泻,发生率为2.50%。停药后消失。两组不良反应差异无统计学意义(P>0.05)。结论:加味柴黄汤治疗高危人乳头瘤状病毒感染湿热下注型的临床效果显著,HPV转阴率高。