急性髓系白血病细胞Flt-3表达及Flt-3/ITD突变分析

本研究探讨急性白血病(acuteleukemia,AL)细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株(ALL),5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明:77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性,阳性表达率为62%,其中20例AML细胞株中有12例阳性,阳性表达率为60%;57例ALL细胞株中有33例阳性,阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性,阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达(阳性率为8.3%),测序显示存在有29bp的两个编码重复序列,其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL(P<0.05)。结论:Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达,在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断。

恶性血液病Flt_3基因内部串联重复突变分析

目的 :研究 Flt3- ITD在恶性血液病中的突变及分布情况。方法 :采用 PCR法检测 10 3例恶性血液病患者基因组 DNA Flt3- ITD突变。结果 :4 4例初治急性髓细胞白血病 (AML )患者中 8例发生 Flt3- ITD突变 ,突变率为 18. 2 % ,以 M1型最高 ;急性淋巴细胞白血病 (AL L )、骨髓增生异常综合征 (MDS)、多发性骨髓瘤(MM)、非何杰淋巴瘤 (NHL )及慢性髓细胞白血病 (CML )均未检出 Flt3- ITD突变。结论 :Flt3- ITD可作为 AML重要分子标志。

FLT3基因内部串联重复突变在急性早幼粒细胞白血病中的临床意义

目的 研究FLT3基因内部串联重复（ITD）突变在急性早幼粒细胞白血病（APL）中的临床意义.方法 采用PCR方法检测30例初发APL患者FLT3基因外显子14、15中ITD突变,并比较分析ITD突变型和野生型患者的临床特征及疗效.结果 30例初发APL患者中,8例（26.7％）FLT3-ITD突变阳性.与野生型患者相比,FLT3-ITD突变患者白细胞计数（WBC）高[20.48×10^9/L（0.74×10^9 ～74.3×10^9/L）比1.75×10^9/L（0.78×10^9 ～ 35.3×10^9/L）]、乳酸脱氢酶水平（LDH）高[447.5 U/L（191～1 533U/L）比205.0U/L（118～743U/L）]、血小板计数（Plt）低[14×10^9/L（6×10^9 ～59×10^9/L）比30×10^9/L（9×10^9～ 124×10^9/L）],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.而在性别、年龄、血红蛋白、纤维蛋白原含量、骨髓原始细胞＋早幼粒细胞比例及危险度分层等方面,二者差异均无统计学意义（均P＞0.05）.FLT3-ITD突变患者的完全缓解（CR）率、达CR的时间、维甲酸综合征（RAS）和弥散性血管内凝血（DIC）发生率与野生型患者相比,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.中位随访时间为17个月,FLT3-ITD突变患者与野生型患者总生存率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 FLT3-ITD是APL患者常见的基因突变类型,其发生与患者初诊时高WBC、高LDH及低Plt相关,而对近期疗效无影响.

自杀基因TK联合细胞因子FL真核表达载体的构建及其相关特性的研究

目的 探讨自杀基因TK(thymidinekinase ,胸苷激酶 )与细胞因子FL(Flt 3ligand ,Flt 3配体 )在同一细胞克隆中表达的特性 ,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。方法 构建以IRES(内部核糖体进入位点 )相连的TK与FL的真核表达质粒 ,脂质体法转入人乳腺癌细胞株MCF 7中。MTT法检测GCV(Ganciclovir,更昔洛韦 )对MCF 7/TK FL细胞的杀伤活性 ,电镜、光镜及FACS法检测凋亡情况。ELISA法及Westernblot对该细胞克隆分泌的FL进行定量、定性分析并检测其对CD34+细胞的促增殖活性。结果 构建的pIRES TK FL真核表达质粒以脂质体法可成功转入MCF 7细胞中 ,MCF 7/TK FL细胞可被GCV有效杀伤并存在凋亡情况 ,IC50 值为 0 5 μg/ml。该细胞分泌的FL有蛋白水平的表达 ,ELISA法测定FL分泌量为每 4天 10 5个细胞中 15 7ng/ml,它具有刺激CD34+细胞增殖的活性。结论MCF 7/TK FL细胞可同时表达TK与FL基因 ,在自杀基因瘤苗的基础上 ,其分泌的细胞因子FL具有生物活性 。