小鼠Flt-3L基因的分子克隆及其真核表达载体的构建

本试验通过RT-PCR的方法,从小鼠脾脏细胞总RNA中扩增出目的基因Flt-3L,并通过酶切-连接的方法将其连接到真核生物表达载体pcD-NA3.1A上,构建了重组的质粒表达载体。为了证明重组质粒上含有目的基因,用KpnⅠ和ApaⅠ酶切重组后的质粒,结果显示酶切后的片段大小与目的基因片段大小一致。经测序分析,所扩增的目的基因片段与GenBank中的基因序列完全一致,表明本试验成功地扩增了此目的基因并构建了该基因的真核表达载体。

Flt-3L、SCF在食管癌患者外周血细胞的诱导及树突细胞的培养

目的探讨从食管癌患者外周血分离、诱导与扩增树突细胞(DC)的有效方法。方法采用密度梯度离心法从食管癌患者外周血分离单个核细胞,分别加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)(作为对照组);GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)(作为实验1组);加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)+SCF(100 ng/ml)(作为实验2组)。于37℃、5%CO2环境下进行培养,动态观察细胞生长情况,流式细胞仪检测培养第6天时DC表面分子CD1a、CD83、CD80、CD86的表达水平。结果上述不同刺激物均能从外周血单个核细胞成功诱导出DC,与对照组相比,实验组诱导出更多数量的DC,其中以实验2组最多;培养至第6天时,两实验组DC细胞表型CD1a表达率与对照组无明显差别(P>0.05),CD83、CD80、CD86表达水平明显高于对照组(P<0.01),其中以实验2组表达水平最高(P<0.01)。结论联合应用GM-CSF、IL-4、flt-3L和SCF能有效地从食管癌患者外周血诱导培养出大量具有活性的DC,为进一步的临床研究奠定基础。

^(60)Coγ射线全身照射后大鼠血浆中GDF-15、Flt-3L和SAA表达的剂量相关性研究

目的:探讨钴60(^(60)Co)γ射线照射对SD大鼠血浆中Fms样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和生长分化因子-15(GDF-15)蛋白表达情况的影响。方法:将72只SD大鼠按照不同照射剂量分为0 Gy组、1 Gy组、3 Gy组和5 Gy组,每组18只,采用^(60)Coγ射线照射大鼠,剂量率为1 Gy/min。照射后1 d、3 d和5 d采集4组大鼠外周血,通过酶链免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中的Flt-3L、SAA和GDF-15蛋白表达水平。结果:SD大鼠血浆中的Flt-3L和GDF-15蛋白在照射后表达升高,升高的水平与辐射剂量相关。3 Gy组和5 Gy组血浆中的GDF-15蛋白在照射后1 d、3 d和5 d与0 Gy组相比表达均增高,差异有统计学意义(t=3.09,t=6.32,t=8.91,t=10.71,t=2.73,t=6.64;P<0.05);5 Gy组血浆中的Flt-3L蛋白在照后1 d、3 d和5 d与0Gy组相比表达均增高,差异有统计学意义(t=4.22,t=8.48,t=5.51;P<0.05);3 Gy组Flt-3L蛋白只在照后1 d和5 d表达增高,差异有统计学意义(t=5.79,t=3.69;P<0.05);GDF-15蛋白水平在照射后1 d的剂量-效应关系(R^2=0.936,P<0.05)优于照射后3 d和5 d(R^2=0.913,R^2=0.887;P<0.05);Flt-3L蛋白正相反,其在照射后5 d的剂量-效应关系最好(R^2=0.965,P<0.05);SAA只有在照射后1 d有随剂量升高表达增加的趋势。结论:血浆中的Flt-3L和GDF-15蛋白在全身照射的大鼠血浆中特定时间点呈现出比较良好的剂量-效应关系。