Determination of Amino Acids in an Individual Erythrocyteby Capillary Electrophoresis with Intracellular FITC-derivatization and Laser-induced Fluorescence Detection

A novel approach for analysis of amino acids in individual erythrocytes was established. In this method, the derivatization reagent was introduced into the living cells by electroporation. After derivatization, the amino acids in a single cell were determined by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection.

Cy-5标记脱氧核糖核酸荧光毛细分析法的研究

在荧光毛细分析法（FCA）的基础上开发了一种用于DNA快速检测的DNA-FCA法。在毛细管内表面将DNA探针固定化，制成荧光毛细生物反应器（DNA-CBR）。测定时，用DNA-CBR吸入含Cy-5标记的靶DNA样品液进行杂交反应，然后在646nm激发波长、664nm发射波长下进行荧光测定；Cy-5标记的靶DNA浓度在0．1～1．0μmol／L之间线性良好（y=139．73x＋39．613，r=0．9985）；RSD〈5．5％；检出限为0．17pmol，样品用量10μL；DNA-CBR能够重复使用6次。本方法可用于靶DNA的定性和定最检测。

基于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒DNA提取

基于毛细管液滴技术,建立了提取血液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的方法。方法的基本原理是向聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时,由于表面张力作用,可以形成稳定的油包水型液滴。依次引入含有不同试样的液滴,在毛细管中完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程。实验表明,采用蛋白酶K裂解和提高洗脱温度有利于提高DNA回收率。优化后的血清HBV DNA提取操作在25 min内完成,回收率大于60%。本方法的DNA提取量与常规方法相当,而相对标准偏差较大(23.3%vs 12.9%)。本方法具有简单、快速和低成本的优势,有望成为一种微全核酸分析系统样品前处理的有效解决方案。

脱氧核糖核酸-蛋白质相互作用产物的检测及其在胃癌组织中的应用

建立了无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光(Non-gel sieving capillary electrophoresis with laser inducedfluorescence,NGS-CE-LIF)检测脱氧核糖核酸(DNA)-蛋白质相互作用产物的方法。考察了筛分介质聚环氧乙烷(Poly(ethylene oxide),PEO)浓度、分离温度、分离电压及缓冲液三羟甲基氨基甲烷硼酸(Tris-Borate-ED-TA,TBE)pH值等条件对pUC19 DNA/MspⅠ(HpaⅡ)DNA Marker和Protein Molecular Weight Marker(Broad)D532S相互作用产物的影响。结果表明,当PEO浓度为0.1%,TBE的pH为9.0,分离电压为15 kV,分离柱温15℃时,DNA-蛋白质相互作用产物得到有效分离。本方法应用于人胃癌组织p53基因扩增后的PCR产物和从相应组织中提取的蛋白质二者相互作用产物时,检测效率高,分离效果好。

毛细管电泳噪声特性分析

为优化毛细管电泳荧光信号检测系统,提高检测灵敏度,以100~1 000碱基对的脱氧核糖核酸作为分离对象,羟乙基纤维素为筛分介质,研究了直流电场下毛细管电泳荧光信号检测系统中的噪声特性.对不同分离电场强度、羟乙基纤维素溶液浓度和分子量、毛细管有效长度以及毛细管内径形状等情况下的噪声特性进行分析.分析得到该检测系统中信噪比最佳的优化参量,即分离电场强度为500~600V/cm、羟乙基纤维素浓度为0.6%~0.7%、羟乙基纤维素分子量为250、圆形内径为50μm以及毛细管有效长度为8cm.

新型乳酸固定化酶荧光毛细生物传感器

对长45 mm、内径0.9 mm的医用毛细管进行γ-氨丙基三乙氧基硅烷氨基化和戊二醛醛基化后,再将乳酸脱氢酶(LDH)的氨基与戊二醛的醛基结合,使其固定在毛细管内壁,构成一种新型固定化酶乳酸荧光毛细生物传感器(IE-LFCBS),实现了对乳酸的微量、快速测定。IE-LFCBS吸入辅酶Ⅰ与乳酸的混合液,在固定化酶催化下使乳酸与辅酶Ⅰ反应,生成荧光物质还原型辅酶Ⅰ;激发波长353 nm、发射波长466 nm。适用于IE-LFCBS的优化条件为:辅酶Ⅰ浓度4 mmol/L、用于固定化的LDH浓度60 kU/L、反应时间15 min、反应温度38℃、测定范围为1.0～5.0 mmol/L、回收率95%～98%,IE-LFCBS的相对标准偏差为RSD<1.5%(n=11),检出限为0.45 mmol/L。IE-LFCBS的试液用量极少(18μL),并能重复使用,可望用于发酵食品、药品、血液标本等各类样品中乳酸的快速检测。

裂解加热-荧光毛细管法快速测定血液红细胞内丙酮酸

在常规红细胞处理方法中,用生理盐水对红/白细胞清洗分离会导致细胞内丙酮酸外渗,造成丙酮酸测定值不能反映细胞内丙酮酸的真实浓度。本研究设计了"氯化铵裂解液特异性裂解红细胞-离心分离白细胞/血小板-加热去除蛋白-丙酮酸酶荧光毛细管分析"方法。最优化的血样预处理条件是:以16000 r/min离心血液1 min,获得红细胞;裂解液裂解红细胞后在100℃下加热5 min。对比实验发现,本方法优于其它红细胞处理法。本研究中丙酮酸测定方法的线性范围为10～120 mmol/L;检出限为0.98 mmol/L;灵敏度为5.64 F L/mmol,高于文献方法60倍以上;测定红细胞内丙酮酸值的相对标准偏差小于2.8%(n=11),回收率在98.3%～104.1%之间。

乳酸的液态酶荧光毛细分析法研究

基于乳酸脱氢酶(LDH)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化还原体系,提出了乳酸的液态酶荧光毛细分析方法(LE-FCA)。在激发波长350 nm、发射波长460 nm条件下,用LE-FCA法对乳酸进行了测定;其线性范围为0.2～1.0 mmol/L,r>0.9932,检出限为0.022 mmol/L,RSD<4.2%。LE-FCA能节省贵重的酶试剂,样品用量仅为18μL;可用于医药、卫生、工业、食品等含乳酸样品的测定。

酶荧光毛细分析法测定血清中微量丙酮酸

提出了一种用于血清微量丙酮酸(PA)测定的酶荧光毛细分析法(P-LE-FCA)。优选的测定条件为:乳酸脱氢酶和还原型辅酶Ⅰ的浓度分别为100U/L和60μmol/L,反应时间5min。测定PA的线性范围4—80μmol/L,检出限0.73μmol/L,RSD<1.3%。血清共存物质对PA测定无明显干扰。使用该方法对血清PA进行测定,其回收率在93.0%—106.5%之间;结果与常规紫外分光光度法一致。本方法的样品预处理过程简单、省时,省试剂,灵敏度高,重现性好。