荧光PCR熔解曲线法检测幽门螺杆菌克拉霉素、喹诺酮耐药基因的性能验证

目的探讨采用荧光PCR熔解曲线法检测粪便样本中的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)克拉霉素(23S rRNA)及喹诺酮(gyrA)耐药相关基因突变在临床诊断中的应用价值。方法纳入胃镜检查Hp快速尿素酶阳性且未经治疗的1176例患者,收集患者胃黏膜组织及粪便样本用于对比研究,针对同一阳性病例,采用E-test法分析胃黏膜组织中Hp克拉霉素、喹诺酮耐药表型,荧光PCR熔解曲线法检测粪便样本中Hp克拉霉素、喹诺酮耐药基因型,Kappa检验分析两种方法检测结果的一致性;对于阳性病例的粪便样本提取2份核酸,分别采用荧光PCR熔解曲线法及一代测序法检测Hp 23S rRNA、gyrA耐药突变基因,并比较两种方法检测结果的一致性。结果在克拉霉素耐药研究中,最终获得有效样本934例,其中耐药阳性表型453例,耐药阳性基因型481例,阳性符合率为93.38%(95%CI:90.70%~95.32%);在喹诺酮耐药研究中,最终获得有效样本909例,其中表型耐药阳性426例,基因型耐药阳性413例,阳性符合率为86.85%(95%CI:83.31%~89.74%)。在对比研究中,23S rRNA基因检测有效样本986例,其中荧光PCR熔解曲线法检测耐药阳性514例,测序检测耐药阳性509例,阳性符合率为96.27%(95%CI:94.24%~97.60%),gyrA基因检测有效样本895例,其中荧光PCR熔解曲线法检测耐药阳性422例,测序检测耐药阳性405例,阳性符合率为95.80%(95%CI:93.38%~97.36%)。结论基于粪便样本的荧光PCR熔解曲线法检测Hp 23S rRNA、gyrA对预测Hp的耐药性具有一定的临床应用价值。

实时荧光定量PCR检测不同结核标本及其联合玻璃珠磨菌法检测的价值

目的研究实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与玻璃珠磨菌法联合用于不同结核标本检测中的价值。方法以回顾性分析为法,收集并分析2021年1月至2022年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院住院与门诊诊治的疑似结核病患者1200份不同临床标本的qRT-PCR测定结果,其中血液样本469份,胸腔积液标本322份,心包积液标本16份,尿液标本25份,气管(支气管)肺泡灌洗液标本8份,腹腔积液标本34份,脑脊液标本143份,脓液标本31份,痰液标本152份;同时,对41份痰液标本予以玻璃珠振荡磨菌前后qRT-PCR定量检测效果分析。结果1200份不同结核标本的总检测阳性率为15.83%(190/1200),其中检出率最高的为气管(支气管)肺泡灌洗液标本,占比为37.50%(3/8),且门诊患者阳性率最高,占比为40.00%(2/5);脓液标本检出率第二,占比为35.48%(11/31),且住院患者阳性率最高,占比为38.46%(10/26);痰液标本检出率第三,占比为30.26%(46/152)。41份痰液标本经玻璃珠磨菌处理5 min之后,qRT-PCR检测核酸浓度明显高于处理前,差异有统计学意义(P<0.05);其中,14份痰液标本提升了菌株数量级,且11份含菌量为10^(2)拷贝/mL痰液标本于振荡研磨处理之后,7份痰液标本提升至了10^(3)拷贝/mL菌量数量级,磨菌处理后阳性检出率明显高于磨菌处理前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论气管(支气管)肺泡灌洗液标本、脓液标本、痰液标本检测中qRT-PCR的检出率较高,而qRT-PCR在其他结核标本检测中的检出率较低,qRT-PCR联合玻璃珠磨菌法检测可有效提升临床结核标本阳性检出率。

基于探针熔解曲线分析的多重PCR同步鉴定6种腹泻病原菌

目的基于多重聚合酶链反应(PCR)和探针熔解曲线分析技术,建立可同时鉴定6种常见急性感染性腹泻病原菌的高灵敏度诊断方法,并验证其检测性能。方法采用熔解曲线分析6种常见急性感染性腹泻病原菌熔解温度(Tm)值,建立基于探针熔解曲线分析的多重PCR检测方法,并评价其灵敏度、特异性和重复性。采用该方法检测175例疑似感染性腹泻患者粪便样本,比较该方法鉴定结果与细菌培养法和荧光PCR法鉴定结果的差异,不一致结果通过测序进行确认。结果建立的多重PCR检测方法可实现单次PCR同步检测6种肠道病原菌,检测限为1×10^(3)~1×10^(4)拷贝·mL^(-1),不同病原菌间无交叉反应,特异性高。175例腹泻患者粪便样本中共检出91例(52%)阳性样本。6种病原菌的检测内变异系数(CV)均<0.1%。与细菌培养法相比,该方法检测沙门菌、志贺菌的符合率分别为94.85%(kappa=0.894)、100.00%(kappa=1.000);与荧光PCR相比,该方法检测艰难梭菌的符合率为98.28%(kappa=0.900)。结论建立的基于探针熔解曲线分析的多重PCR方法同时鉴定6种腹泻病原菌具有较高的灵敏度和特异性,可为急性感染性腹泻的临床诊断及时提供实验室依据。

五重实时荧光聚合酶链式法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分

目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异性和绝对灵敏度,最后通过样品掺假模拟实验验证方法 的检出限。结果 该方法 的特异性强,仅能检出豌豆源性、绿豆源性、木薯源性、玉米源性成分;灵敏度较高,对绿豆源性和木薯源性的检测灵敏度可达到1×10^(–1) ng/μL水平,豌豆源性和玉米源性的检测灵敏度可达到1×10^(–2) ng/μL水平。结论 本研究建立的五重实时荧光PCR方法 可用来区分市场上淀粉及其制品中的豌豆源性、绿豆源性、玉米源性和木薯源性成分,具有较好的应用价值。

探讨荧光定量PCR法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值

目的本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象,所有患者均先后接受荧光定量PCR法与免疫胶体金法检测,以细菌培养结果作为金标准,比较两种方法的检出率,评估两种检查方法的诊断效能。结果荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.67%、89.19%、98.60%、94.29%、97.24%,免疫胶体金法分别为82.78%、43.24%、93.01%、61.54%、86.36%,荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验,差异有统计学意义(χ^(2)=18.827、17.458、5.567、10.124、11.533,P均<0.05)。结论荧光定量PCR法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有良好的诊断效能。在骨科住院患者感染监控中予以微生物检验干预,有助于基于检验结果进行及早诊断和治疗,进而降低感染发生率和传播风险。

实时荧光定量PCR定量方法研究进展

实时荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点而成为了分子生物学研究中的重要工具,综述了实时荧光定量PCR技术及其定量方法的研究进展,并展望了其应用前景。

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物，以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品，应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品及待测样本进行分析，建立绝对定量的标准曲线，同时计算出待测样本双歧杆菌浓度；根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度；分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性；重复检测梯度稀释的标准品，用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp，测序结果正确，成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品；生成的标准曲线R2＝0.999，最低检测限度为每个反应1.48＆#215;102个拷贝；实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测，各组间每微升1.48×10^3～1.48×10^7个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94％、3.39％、3.54％、3.08％和3.34％。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数·-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强，且重复性好，适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。

“荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立

目的建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果正常人外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCRβ链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论"荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。

红参中精氨酸双糖苷对小鼠的抗疲劳作用

目的:观察小鼠强迫性游泳诱发的疲劳现象,探讨红参中非皂苷类物质——精氨酸双糖苷(AFG)对小鼠的抗疲劳作用及其初步机制。方法:从红参中分离出AFG提取物,将80只ICR小鼠分为空白对照组,低、中和高剂量(100、200和400mg·kg^(-1))AFG组,每组20只,连续灌胃给药28d后对小鼠进行强迫性游泳实验,检测各组小鼠体质量,脏器指数,强迫性游泳时间,乳酸(LD)、尿素氮(BUN)、肝糖原(Gly)水平及腓肠肌中PGC-1α基因表达水平。结果:与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠的体质量和脏器指数差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠强迫性游泳时间、Gly水平和PGC-1αmRNA基因表达水平均明显增加(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性;与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠血清中的LD和BUN水平明显降低(P<0.01)。结论:AFG对小鼠有抗疲劳作用,其机制可能与能量代谢有关。

采用荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCR alpha链CDR3谱系漂移技术的初步探讨

目的:初步探讨荧光定量PCR溶解曲线分析技术监测人外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法:提取4例正常人、2例淋巴瘤型白血病患者PBMC中的总RNA,逆转录成cDNA,以32个人TCRalpha链胚系可变区基因家族(TRAV)设计上游引物,共同的TCRalpha胚系链恒定区基因家族(TRAC)设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果:正常人外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的溶解曲线谱型图(melting curve spectratyping)呈现熔点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布,2例淋巴瘤型白血病患者外周血T细胞TCRalpha链32个家族CDR3表达频率不一致,部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论:荧光定量PCR溶解曲线分析TCRalpha链CDR3谱系漂移技术方法稳定简便,能较好地监测正常人和临床样本外周血T细胞TCRalpha链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。

荧光定量PCR溶解曲线监测HIV感染者TCRα、β链CDR3谱系漂移技术的建立

目的建立荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线分析技术监测人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血T细胞受体(TCR)α、β链CDR3谱系漂移。方法提取HIV感染者外周血单个核细胞中的总RNA,逆转录成cDNA,设计人32个TCRAV、26个TCRBV基因家族上、下游引物,FQ-PCR扩增HIV感染者TCRAV和TCRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的寡克隆增生,并与传统的CDR3检测技术基因扫描检测结果比较分析。结果 FQ-PCR溶解曲线分析技术与基因扫描检测结果一致,HIV感染者TCRα链和β链家族CDR3表达频率不一致,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但出现数量不等的寡克隆增生家族。结论 FQ-PCR溶解曲线法监测HIV感染者TCRα、β链CDR3谱系漂移技术操作简单,检测成本低,可以用来监测HIV感染者外周血T细胞TCRα、β链CDR3谱系漂移。

登革热病毒快速检测NS1抗原和IgG/IgM抗体的临床应用评价

目的采用胶体金免疫层析法(GICA)检测登革热病毒(DENV)NS1抗原和/或IgG/IgM抗体,初步评价其临床应用效果。方法将2633例经聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法检测DENV核酸的血清样本分为3组:Ⅰ组为948例样本,用GICA检测NS1抗原;Ⅱ组为1156例样本,用GICA检测IgG/IgM抗体;Ⅲ组为529例样本,用GICA同时检测NS1抗原和IgG/IgM抗体。另5例流行性出血热抗体阳性样本、4例风疹/麻疹抗体阳性样本和50名健康人群样本为Ⅳ组,用GICA检测NS1抗原和IgG/IgM抗体。结果Ⅰ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为89.09%、92.41%、89.87%(P<0.01);Ⅱ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为64.68%、66.41%、64.88%(P<0.01);Ⅲ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为93.56%、61.82%、86.96%(P>0.05),Ⅲ组中有419例样本经PCR检测结果为阳性,NS1抗原阳性率为85.20%,IgG/IgM抗体阳性率为63.25%,NS1抗原和/或IgG/IgM抗体阳性符合率为93.57%;Ⅳ组结果均为阴性,特异性为100%。结论GICA对NS1抗原和IgG/IgM抗体的联合检测结果与PCR检测结果较接近,且特异性良好,可用于DENV感染的早期辅助诊断和筛查。

建立PCR熔解曲线法检测HBV基因型

目的建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法临床应用的可靠性。方法依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法。用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果进行比较。结果 186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例(71.5%),C型37例(19.9%),B/C混合型16例(占8.6%)。选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100%,C型符合率100%,B/C混合型符合率81.25%,总符合率94.1%(Kappa=0.909,P<0.05)。结论建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测。

定量检测食品中榛果过敏原成分

定量检测食品中过敏原榛果过敏蛋白,构建目的基因的标准品及标准曲线。以榛果的DNA为模板,针对油体蛋白基因设计引物进行PCR扩增,构建质粒,经鉴定测序,用荧光定量PCR制作标准曲线。成功克隆油体蛋白目的基因片段,并以此为标准制作出荧光定量PCR标准曲线,线性关系良好,灵敏度高,检测限低于10个拷贝,特异性强,准确可靠。成功建立荧光PCR方法定量检测食品中过敏原榛果成分,构建油体蛋白基因的标准品及标准曲线。

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测大鼠外伤性视神经损伤后P53、bax和caspase 3基因表达

目的应用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测外伤性视神经损伤后P53、bax和caspase 3基因mRNA表达的变化。方法应用液压颅脑损伤仪建立大鼠外伤性视神经损伤动物模型,伤后1、3、5、7、9、14、28d处死,以Trizol法提取新鲜视网膜组织的总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录合成cDNA并进行扩增,以T/A克隆法将纯化的目的片断与T/A克隆载体(pTZ57R/T)连接成重组质粒并转化入E.coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白斑筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果由pTZ57R/T与目的基因所构建的标准曲线的线性关系良好、灵敏度高、特异性强、准确可靠。P53和bax均在视神经损伤后3d mRNA表达明显增加,5d时达到高峰,7d后开始下降;伤后5d caspase 3 mRNA表达明显增加,9d时达到高峰,14d后开始下降。三者表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡基因P53、bax和caspase3在视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡发生中起到重要作用。

实时荧光多重聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线分析鉴别6种致腹泻性大肠埃希菌的研究

目的建立一种鉴别6种致腹泻性大肠埃希菌的实时荧光多重聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线分析方法。方法根据6种致腹泻大肠埃希菌的8种特异性毒力基因设计8对引物,采用实时荧光多重聚合酶链反应后溶解曲线分析,根据曲线的峰值、高度、宽度、面积不同鉴别不同的致病菌。结果成功设计出8对引物,扩增出针对6种致腹泻大肠埃希菌的8种不同毒力基因,获得了特异性的溶解曲线。优化反应体系后在同一反应管中成功获得针对8种特异基因的溶解曲线,除肠侵袭性大肠杆菌、细胞致死膨胀性大肠杆菌具有相同的两种基因不能鉴别外,其中5种致腹泻性大肠埃希菌均可以明确鉴别。结论多重聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线分析鉴别致腹泻性大肠埃希菌是一种简单、特异、高效的方法,在腹泻病与食源性疾病的暴发调查和日常监测中具有广泛的应用价值。

qPCR-HRM曲线分析技术与普通PCR加直接测序法检测胶质瘤EGFR突变比较

目的:比较实时聚合酶链反应-高分辨率融解(qPCR-HRM)曲线分析技术和普通PCR法加直接测序法检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,探讨适用于临床的EGFR基因突变检测方法,为胶质瘤患者术后放射、化学治疗及预后判断研究提供可靠的依据。方法:用普通PCR加测序法与qPCR-HRM曲线分析技术检测胶质瘤患者EGFR基因突变类型,检测结果比较采用卡方检验。结果:两种方法检测EGFR外显子19基因突变结果比较差异无统计学意义,且qPCR-HRM曲线分析技术比直接测序法更快捷、灵敏。结论:与直接测序法相比,qPCR-HRM曲线分析技术可能更适用于临床检测胶质瘤患者标本EGFR突变性质。

乙型肝炎病毒标志物及其DNA相关性及联合检测临床价值

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清免疫标志物(HBV M)和HBV DNA含量的相关性及两种指标联合检测的临床应用。方法酶联免疫吸附试验检测HBV M;荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA含量。结果乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性的标本HBV DNA阳性率高,分别为:Ⅰ组[HBsAg、HBeAg和乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)阳性],HBV DNA阳性率98.9%(181/183);Ⅳ组(HBsAg和HBeAg阳性),HBV DNA阳性率96.3%(26/27);Ⅶ组[HBsAg、HBeAg、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)和抗-HBc阳性],HBV DNA阳性率100.0%(2/2);HBsAg阳性、HBeAg阴性,HBV DNA阳性率也较高,为Ⅱ组(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性)60.4%(58/96);Ⅲ组(HBsAg、抗-HBc阳性)50%(10/20);HBeAg、HBsAg阴性有一定的HBVDNA阳性率,但阳性率低,分别为:Ⅴ组(抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性)13.3%(2/15);Ⅵ组(抗-HBs、抗-HBc阳性)8.3%(1/12);Ⅷ组(抗-HBs阳性)0(0/26);Ⅸ组(HBV M全阴性)6.7%(1/15)。结论血清HBV DNA水平与HBV M表现模式有关,与HBsAg,HBeAg有良好的相关性,而HBV M阴性的患者也可能有HBV DNA阳性,因此HBV M和HBV DNA联合检测,可有效提高乙型肝炎的检出率,为临床提供HBV感染、复制及传染性判断以及指导治疗的实验室依据。

泌尿生殖道解脲支原体感染的检测方法与诊断

目的评价解脲支原体(Uu)液体培养法的诊断价值。方法采集130例患者的泌尿生殖道分泌物﹑前列腺液,同时进行液体培养法和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测Uu,并对Uu阳性和判为污染的液体培养基进行细菌培养。然后,比较结果﹑分析原因。结果130份标本中,液体培养法Uu阳性71份﹑判为污染的13份﹑阴性46份。FQ-PCR法Uu阳性66份,其中63份与液体培养法一致,另3份中,2份为液体培养法判为污染的标本﹑1份为液体培养法阴性标本。细菌培养结果,8份液体培养阳性而FQ-PCR法阴性的标本及13份判为污染的标本,均培养出细菌和/或真菌,菌株做脲酶和精氨酸分解试验,至少一项为阳性。结论用液体培养法检测Uu时,阴性标本可能受分解尿素﹑精氨酸的细菌的影响,而误判为阳性,阳性标本可能受混浊生长的细菌影响,而误判为阴性,从而导致诊断上的错误。

沙眼衣原体急性感染与恢复期携带的鉴别实验研究

目的 研究沙眼衣原体急性感染期与恢复期的实验鉴别方法,并探讨是否存在治疗后转为正常携带者现象。方法 采用荧光定量PCR法、Clearview查抗原法及高倍镜下白细胞计数法检测4 5份沙眼衣原体急性感染患者样本(A组) ,6 5份治疗后患者样本(B组) ,治疗未愈2 6例经再次治疗后第2次复查患者样本。结果(1)急性感染期,Clearview法检测衣原体阳性率均为10 0 % (45 /4 5 ) ,PCR荧光定量≥10 6拷贝者占86 .6 7% (39/4 5 ) ,白细胞计数10～30个或以上者占88.89% (40 /4 5 )。(2 )经治疗后,荧光定量PCR法和Clearview法检测衣原体均为阴性占6 0 % (39/6 5 ) ,Clearview抗原检测阳性率下降为7.6 9% (5 /6 5 ) ,PCR荧光定量>10 6拷贝者下降为6 .15 % (4/6 5 ) ,治疗前后比较,P <0 .0 1;白细胞计数在10～30个以上者下降为3.0 8% (2 /6 5 ) ,治疗前后比较,P <0 .0 1。(3)未愈者再经治疗后,Clearview抗原检测均10 0 %呈阴性(2 6 /2 6 ) ,PCR荧光定量<10 6拷贝(>10 2 拷贝)阳性率5 7.6 9% (15 /2 6 )。结论 PCR荧光定量是否>10 6拷贝、Clearview和白细胞计数法都是临床检测衣原体感染和随访疗效的良好方法。沙眼衣原体感染者经治疗后延长治疗期仍可长期携带衣原体,实验显示为荧光定量PCR法检测携带者在<10 6拷贝时。