基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的 建立并评价基于非洲绿猴肾细胞(Vero E6)的水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗膜抗原荧光抗体(FAMA)试验方法。方法 在VZV-Oka减毒活疫苗株在Vero E6细胞中的适应培养毒株VZV-Oka-E6的基础上,首先使用3个不同感染剂量(10、10和10TCID)的VZV-Oka-E6病毒株感染Vero E6细胞,于显微镜下观察病变情况确定最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量;然后对比使用不同固定液固定感染细胞后制备的固定抗原片可检测到的灵敏度确定最优的固定液,从而建立基于Vero E6细胞的中和抗-VZV检测FAMA试验方法;采用建立的FAMA法,检测不同效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,确定该方法的敏感性;检测人单纯疱疹病毒(HSV)1、2型特异性抗体,评价该方法的特异性;分别使用同一批次制备和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品的中和抗-VZV,确定该方法的批内和批间重复性;检测已知的3种效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,评价该方法的相对准确性。分别应用新建立FAMA法和ELISA法检测20(人)份单采血浆样品的抗-VZV效价,对2种试验检测结果做Spearman相关性分析。结果 通过优化确定了FAMA试验中最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量为10TCID,-20℃预冷的丙酮作为固定液。FAMA试验检测中和抗-VZV效价的灵敏度为31.25 mIU/mL;检测HSV 1、2型特异性抗体时结果为阴性;使用同一批次和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%;对3种效价VZV免疫球蛋白国际标准品的检测(值)与其理论值一致;FAMA法和ELISA法对20份单采血浆样品检测抗-VZV结果的相关系数为0.268。结论 所建立的FAMA试验检测中和抗-VZV效价具有良好的敏感性、特异性、重复性和相对准确性,可用于单采血浆和水痘-带状疱疹免疫球蛋白(VZIG)产品的中和抗-VZV效价检测。

水痘-带状疱疹病毒Oka-7S株的免疫原性分析

目的比较水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka-7S与Oka株免疫原性。方法用高、中、低(1000、250、62.5 PFU/剂)剂量VZV Oka-7S及Oka株皮下分别免疫雌性BALB/c小鼠,每组12只,共免疫2次,每次间隔14 d。基于膜抗原荧光抗体试验(fluorescent antibody to membrane antigen assay,FAMA)进行VZV特异性体液免疫评价,酶联免疫斑点(ELISPOT)试验进行VZV特异性细胞免疫评价。结果VZV Oka-7S和VZV Oka株均可引起特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,且具有相当的免疫效果;随免疫次数增加和免疫剂量升高,Oka-7S-2.2组小鼠血清中抗VZV特异性IgG抗体水平均明显升高。结论VZV Oka-7S株免疫原性与VZV Oka株相当。

2021—2022年长春市水痘-带状疱疹病毒流行株基因序列的特征分析

目的对2021—2022年长春市水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)流行株进行基因型鉴定及分子特征分析。方法选择59例2021—2022年吉林大学中日联谊医院收治的长春市水痘或带状疱疹患者为研究对象,采用膜抗原荧光抗体(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)法对患者血清中VZV特异性抗体进行鉴定。提取确诊患者疱疹液中的病毒DNA,PCR扩增VZV的多个开放阅读框(open reading frame,ORF),包括ORF1、ORF12、ORF16、ORF17、ORF21、ORF22、ORF37和ORF54,根据ORF的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行基因分型。通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术对多个ORF(ORF38、ORF54和ORF62)进行酶切鉴定,区分VZV临床株及疫苗株。结果59份患者血清样本均为阳性,均确诊为VZV感染。59份疱疹液样本中,4份与Clade 2基因型完全匹配;4份存在2个SNPs,分别为ORF1(SNP790)C→A突变和ORF12(SNP18082)T→C突变;51份发生ORF12(SNP18082)T→C突变。59株VZV临床株均为PstⅠ^(+)BglⅠ^(+)SmaⅠ^(-),不同于疫苗株PstⅠ^(-)BglⅠ^(+)SmaⅠ^(+)。结论2021—2022年长春市VZV流行株均为Clade2基因型,未发现疫苗株致病情况。

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法（fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA）与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）血清抗体的效果。方法以FAMA法为＂金标准＂,同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本（水痘疫苗免前92份、免后92份）的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度（GMT）为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率（灵敏度）为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高（z=-6.03,P〈0.001）。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义（P〈0.05）,其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义（P〉0.05）。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P〈0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8-1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。