抗肾小球基底膜病患者血清自身抗体的异质性及其临床病例的相关性分析

目的:研究抗肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)病患者血清自身抗体的异质性及其临床病理的相关性。方法:选取北京大学第一医院肾内科1991年1月至2009年5月收治的有完整临床及肾活检资料的108例抗GBM病患者为研究对象。收集就诊时的血清或血浆置换液用于孵育正常人肾组织冰冻切片行间接免疫荧光检查。隐匿性抗原表位的暴露采用6 mol/L尿素对组织切片进行预处理,天然抗原表位的检测则以未经处理的组织切片作为底物。抗体滴度的检测由1∶2至1∶512。根据间接免疫荧光的结果决定抗体是否识别不同抗原表位,并进一步分析识别不同抗原表位与临床表现的相关性。结果:108例患者血清或血浆置换液均识别隐匿性抗原表位(尿素处理后肾组织),间接荧光显示抗体沿GBM呈线条样沉积,其中56/108例(A组)也识别天然暴露的抗原表位(非处理肾组织),其余52/108例(B组)则不识别天然暴露的抗原表位。虽然A组血清可识别天然暴露的抗原表位,但是该组血清识别隐匿性表位的平均滴度明显高于B组(P<0.01);A组患者合并抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)的比例则明显低于B组(P<0.01)。两组患者就诊时的其他临床指标(包括血肌酐水平)和肾病理指标差异则无统计学意义。结论:所有患者血清抗GBM抗体识别GBM上隐匿的抗原表位,但近一半患者的抗体同时识别天然暴露的抗原表位。识别天然暴露抗原表位者其血清识别隐匿性抗原的滴度更高,血清ANCA阳性的几率显著减少。

并殖吸虫McAb识别靶抗原的IFAT固相抗原定位研究

本文报告应用16 种单克隆抗体(McAb)以间接荧光抗体试验(IFAT),对卫氏并殖吸虫(P.w)、斯氏狸殖吸虫(P.s)及三平正并殖吸虫(E.c)成虫及其子宫部位虫卵的冰冻切片作靶抗原的定位研究证明:以P.w成虫抗原制备的杂交瘤分泌的8种McAb中,4种具有高度特异性,只识别P.w的有关抗原,另4种与P.s或E.C出现交叉反应;以P.w囊蚴抗原所制备的杂瘤分泌的8种McAb中,2种具有高度特异性,只识别P.w的有关抗原,1种只识别E.c抗原,1种与E.c出现交叉反应,另4种不识别固相抗原片上的抗原.这些McAb识别抗原的部位主要为肠上皮、皮层、食管、排泄囊及卵壳.识别P.w 抗原显示的荧光均较P.s、E.c者为强.

建立膜抗原荧光抗体试验评价北京株冻干水痘疫苗免疫效果

为了建立用于水痘疫苗接种后血清中特异性抗体检测的膜抗原荧光抗体(FAMA)法,并对接种水痘疫苗后儿童血清中水痘特异性抗体进行检测,评价北京株水痘疫苗的免疫效果。以水痘带状疱疹病毒(VZV)感染细胞作为抗原制备成固定抗原玻片,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗建立FAMA法,并对该法的敏感性、特异性进行验证。运用此法对不同剂量北京株水痘疫苗接种后儿童血清中特异性抗体进行检测,分析儿童血清中水痘特异性抗体水平以及免后抗体阳转率,并与Oka株水痘疫苗进行比较。结果显示,FAMA法敏感性可达0.0196IU/ml,特异性好。应用此法检测300名观察者免前免后双份血清样本中抗VZVIgG,易感者中北京株水痘疫苗原苗(39810PFU/0.5ml)、2000PFU/0.5ml、500PFU/0.5ml接种组儿童血清免后抗体阳转率分别为100%、98.77%、85.42%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为36.4、34.3、18.6,原苗与2000PFU间的抗体阳转率和GMT均无显著性差异(P>0.05),但原苗与500PFU、2000PFU与500PFU间的抗体阳转率和GMT均有显著性差异(P<0.05)。对照国产、进口Oka株水痘疫苗接种后抗体阳转率分别为95.35%、96.97%,抗体GMT分别为13.3、16.0,不同剂量北京株疫苗抗体阳转率与国产、进口Oka株疫苗相比,差别无显著性(P>0.05),但北京株疫苗原?

广州管圆线虫的抗原定位研究

目的 为广州管圆线虫抗原的分离、纯化及广州管圆线虫病的免疫诊断等提供实验依据。 方法 运用间接荧光抗体试验 (IFAT)和免疫金银染色试验 (IGSS)对广州管圆线虫的抗原定位进行研究。 结果 在 IFAT中 ,广州管圆线虫的肠管壁、子宫内虫卵的卵细胞、卵巢和皮层具有特异性荧光 ,提示这些器官具有抗原性。而在 IGSS中 ,广州管圆线虫的抗原定位器官只有肠管壁、子宫内虫卵的卵细胞和卵巢 ,而不包括皮层。 结论 虫体的肠管壁是主要的抗原定位器官 ,虫体子宫内虫卵和卵巢亦显示有抗原性 ,这些器官中的抗原与感染宿主的免疫密切相关。

斑点-ELISA和独特型/抗独特型抑制试验检测日本血吸虫病患者循环表膜抗原

将血吸虫成虫表膜机原的单克隆抗体8SE4联接辣根过氧化物酶制成结合物,用于直接法斑点-ELISA检测循环抗原。结果48例血吸虫病患者的阳性率为81.3％(39例),24例正常人未出现假阳性反应。检测华支睾吸虫及并殖吸虫病患者各18例,均无交叉反应。本结果证实日本血吸虫病患者血清中有循环表膜抗原存在。直接法斑点-ELISA方法简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断日本血吸虫病的补充方法。本文还报告了独特型/抗独特型(8SE_4/抗8SE_4)抑制试验检测循环表膜抗原的初步结果。

SPA-ELISA和Map-IFAT诊断肺螨病的研究

目的 探讨葡萄球菌A蛋白 -酶联免疫吸附试验 (SPA -ELISA)和螨成虫抗原片间接荧光抗体试验 (Map-IFAT)对肺螨病的诊断价值。方法 应用SPA -ELISA和Map-IFAT分别对肺螨病组 (35例 )、疮疮组 (35例 )、蠕形螨组 (38例 )、对照组 (30例 )进行血清抗体检测并对比分析。结果 SPA -ELISA检测血清螨特异性IgG阳性率和Map -IFAT血清抗螨抗体的阳性率 :肺螨组分别为94.3 %和 88.6 % ;疥疮组分别为 5 .7%和 0 ;蠕形螨组均为 0 ;对照组分别为 3 .3 %和 6 .7%。两种方无显著性差异 (P >0 .0 5)。两组方法联合使用其阳性率为 97.1 4 %。结论 SPA -ELISA和Map -IFAT对肺螨病的诊断均有较高的特异性敏感性 ,而SPA -ELISA法在肺螨病的大规模的流行病学调查中具有很大的优点 ,两者联合应用可提高诊断肺性螨病的准确性。

间接荧光抗体试验诊断阿米巴病的意义与影响因素

本文应用间接荧光抗体试验方法检测3例阿米巴肝脓肿,结果均阳性,28例肠阿米巴病阳性15例(53.4%)。其中检出大滋养体者100%阳性,而检出小滋养体和包囊携带者均阴性.

旋毛虫肌幼虫冰冻切片保存不同时间后抗原性的观察

目的观察旋毛虫肌幼虫冰冻切片保存不同时间后的抗原性方法对-20℃保存5年、8 年及12年的旋毛虫肌幼虫冰冻切片抗原应用间接荧光抗体试验(IFAT)对旋毛虫病(37例)、囊虫病(12例)、包虫病(10例)、肺吸虫病(16例)患者及健康人(15例)血清进行检测。结果用保存不同时间的抗原片37例旋毛虫病患者血清全部呈阳性反应,各批抗原片的荧光亮度亦无明显区别;囊虫病、包虫病及健康人血清均为阴性反应;16例肺吸虫病患者血清中有2例出现假阳性反应。结论旋毛虫肌幼虫冰冻切片在-20℃可保存12年而不丧失其抗原性。

三种免疫标记方法诊断日本血吸虫病效果的比较

应用酶标记抗原对流免疫电泳(ELACIE)、间接荧光抗体试验(IFAT)和免疫酶染色试验(IEST)以单盲法对比检测不同对象共596例。三种方法的敏感性和特异性:急性血吸虫病人的阳性率和抗体滴度倒数几何均值(GMRT)分别为80.0%、80.0%、86.7%和2.52、18.88、61.27;慢性血吸虫病人的阳性率和GMRT 分别为81.9%、89.1%、88.8%和2.16、22.63、37.82;晚期血吸虫病人的阳性率和GMRT 分别为53.6%、60.7%、60.7%和2.19、15.03、25.54;健康人除ELACIE 出现6.7%假阳性率外,余均为阴性反应;肺吸虫病疫区正常人均为阴性;已治疗病人三法的转阴率和GMRT 分别为95.7%、91.4%、94.3.%和2.00、10.00、10.00;其它寄生虫病患者中,除IFAT 和IEST 检测华支睾吸虫病人均出现2.6%的交叉反应率外,余均未出现交叉反应。

更昔洛韦联合匹多莫德治疗水痘患者的疗效分析

目的了解膜抗原荧光抗体试验法在检测血清水痘-带状疱疹病毒抗体（人抗VZV—IgG）中的作用，观察更昔洛韦联合匹多莫德治疗水痘的临床疗效。方法127例水痘患者随机分为观察纽72例和对照组55例，观察组采用更昔洛韦联合匹多莫德治疗，对照组仅采用更昔洛韦治疗：另随机选取387例健康人群为健康组。采用膜抗原荧光抗体试验法检测人抗VZV—IgG；治疗期间观察两组的退热时间、皮疹干涸时间和皮疹结痴时间，并在治疗1个疗程之后评价疗效。结果观察组和对照组人抗VZV-IgG测定结果均为阳性。健康组中不同年龄人群的A-＆vzv—IgG阳性率差异有统计学意义（x2=104．815，P〈0．05）；而不同年龄人群的阳性率性别差异无统计学意义（P〉0．05）。观察组退热时间、皮疹干涸时间和皮疹结痂时间均低于对照组（t=3．122、3．387、7．892，P〈0．05）。观察组显效率55．56％，总有效率95．83％，总有效率与对照组比较差异有统计学意义（x2=4．246，P〈0．05）。观察组药物不良反应发生率5．56％，对照组药物不良反应发生率7．27％，两组比较差异无统计学意义（x2=0．156，P〉0．05）。结论在水痘临床治疗中，更昔洛韦联合匹多莫德具有更好的疗效，药物不良反应发生率较低，具有良好的临床应用价值。

基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的 建立并评价基于非洲绿猴肾细胞(Vero E6)的水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗膜抗原荧光抗体(FAMA)试验方法。方法 在VZV-Oka减毒活疫苗株在Vero E6细胞中的适应培养毒株VZV-Oka-E6的基础上,首先使用3个不同感染剂量(10、10和10TCID)的VZV-Oka-E6病毒株感染Vero E6细胞,于显微镜下观察病变情况确定最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量;然后对比使用不同固定液固定感染细胞后制备的固定抗原片可检测到的灵敏度确定最优的固定液,从而建立基于Vero E6细胞的中和抗-VZV检测FAMA试验方法;采用建立的FAMA法,检测不同效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,确定该方法的敏感性;检测人单纯疱疹病毒(HSV)1、2型特异性抗体,评价该方法的特异性;分别使用同一批次制备和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品的中和抗-VZV,确定该方法的批内和批间重复性;检测已知的3种效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,评价该方法的相对准确性。分别应用新建立FAMA法和ELISA法检测20(人)份单采血浆样品的抗-VZV效价,对2种试验检测结果做Spearman相关性分析。结果 通过优化确定了FAMA试验中最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量为10TCID,-20℃预冷的丙酮作为固定液。FAMA试验检测中和抗-VZV效价的灵敏度为31.25 mIU/mL;检测HSV 1、2型特异性抗体时结果为阴性;使用同一批次和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%;对3种效价VZV免疫球蛋白国际标准品的检测(值)与其理论值一致;FAMA法和ELISA法对20份单采血浆样品检测抗-VZV结果的相关系数为0.268。结论 所建立的FAMA试验检测中和抗-VZV效价具有良好的敏感性、特异性、重复性和相对准确性,可用于单采血浆和水痘-带状疱疹免疫球蛋白(VZIG)产品的中和抗-VZV效价检测。

2021—2022年长春市水痘-带状疱疹病毒流行株基因序列的特征分析

目的对2021—2022年长春市水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)流行株进行基因型鉴定及分子特征分析。方法选择59例2021—2022年吉林大学中日联谊医院收治的长春市水痘或带状疱疹患者为研究对象,采用膜抗原荧光抗体(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)法对患者血清中VZV特异性抗体进行鉴定。提取确诊患者疱疹液中的病毒DNA,PCR扩增VZV的多个开放阅读框(open reading frame,ORF),包括ORF1、ORF12、ORF16、ORF17、ORF21、ORF22、ORF37和ORF54,根据ORF的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)进行基因分型。通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术对多个ORF(ORF38、ORF54和ORF62)进行酶切鉴定,区分VZV临床株及疫苗株。结果59份患者血清样本均为阳性,均确诊为VZV感染。59份疱疹液样本中,4份与Clade 2基因型完全匹配;4份存在2个SNPs,分别为ORF1(SNP790)C→A突变和ORF12(SNP18082)T→C突变;51份发生ORF12(SNP18082)T→C突变。59株VZV临床株均为PstⅠ^(+)BglⅠ^(+)SmaⅠ^(-),不同于疫苗株PstⅠ^(-)BglⅠ^(+)SmaⅠ^(+)。结论2021—2022年长春市VZV流行株均为Clade2基因型,未发现疫苗株致病情况。

应用膜抗原荧光抗体试验检测人群水痘-带状疱疹病毒血清抗体阳性率

目的应用膜抗原荧光抗体试验（FAMA）方法调查广州地区正常人群水痘-带状疱疹病毒（VZV）的流行现状。方法采用以VZV感染细胞作为抗原、异硫氰酸荧光素（FITC）标记的羊抗人IgG作为二抗的FAMA试验，对随机抽取的592份正常人血清标本进行特异性VZV抗体检测。结果FAMA试验检测VZV抗体与其他的疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应。应用此法检测592份血清标本中，VZV抗体总体阳性率为76．52％；1～、4～、7～、14～、20～、30～、40～及≥50岁年龄组血清抗体阳性率分别是14．67％、51．56％、73．91％、91．26％、92．78％、95．65％、98．11％和100％。1～3岁年龄组血清抗体阳性率最低，血清抗体阳性率随年龄的增大而升高；不同性别间阳性率差异无统计学意义（P〉0．005），不同年龄组间阳性率差异有统计学意义（P〈0．001）。结论采用FAMA法检测人群中VZV抗体与其他疱疹类病毒的相应抗体不产生交叉反应，是VZV抗体检测的可靠方法。应以1～3岁儿童为VZV疫苗免疫的首选对象.

两种疟原虫抗原片不同保存温度及时间稳定性比较

目的观察比较食蟹猴疟原虫（Plasmodium cynomolgi,P.c）抗原片和人工培养恶性疟原虫（Plasmodium falciparum,P.f）抗原片在不同保存温度与时间下检测疟疾抗体滴度的效果。方法显微镜下计数2种抗原片原虫密度,计算每个视野的平均原虫数。以间日疟和恶性疟病人的混合血清作为已知疟疾抗体血清,稀释浓度为1∶5~1∶1 280。将2种抗原片置于4～6、25～27、33～35℃3组温度下,于放置第3、5、7、10天各取出2张,用间接荧光抗体试验（IFAT）法检测抗体终点滴度,并比较-20℃下贮藏1年和2年的2种抗原片,在3个温度组保存3 d时抗体滴度的变化。结果2种抗原片红细胞疟原虫密度分别为2.00×105/μl和1.89×105/μl,每个视野平均疟原虫数分别为157±13和142±9。3个温度组P.c和P.f抗原其抗体终点滴度均在5 d后呈下降趋势。2种抗原片在4～6℃组及以上组的平均抗体滴度分别为1∶440和1∶80,差异有统计学意义（t=1.940,P〈0.05）。在4～6℃放置3 d,-20℃贮藏1年的P.c和P.f抗原片检测疟疾抗体的终点滴度均为1∶640;贮藏2年的2种抗原片终点滴度分别为1∶320与1∶160,差异均有统计学意义（tP.c=11.362,PP.c〈0.01;tP.f=38.845,PP.f〈0.001）。结论 P.c和P.f抗原片检测疟疾抗体终点滴度随存放温度的上升和时间的延长逐渐下降。

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法（fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA）与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）血清抗体的效果。方法以FAMA法为＂金标准＂,同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本（水痘疫苗免前92份、免后92份）的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度（GMT）为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率（灵敏度）为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高（z=-6.03,P〈0.001）。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义（P〈0.05）,其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义（P〉0.05）。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P〈0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8-1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。