实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α mRNA基因表达

目的建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription po lym erase cha in reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达。方法用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光T aqm an方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-αmRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较。结果实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势。结论所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-αmRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确。

荧光定量RT-PCR检测肺癌外周血CK19、CK20 mRNA表达

目的应用荧光定量RT-PCR(Fluorogenic quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肺癌外周血中微转移情况。方法用荧光定量RT-PGR方法检测103例肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA表达。结果103例肺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性35例,阳性率33.98%;CK20mRNA检测阳性17例,阳性率16.50%,其中6例患者CK19、CK20mRNA均阳性。统计结果显示外周血CK19、CK20mRNA的表达与临床分期、分化程度和淋巴结转移相关,与性别、年龄、病理类别无关。结论用荧光定量RT-PCR法检测肺癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA具有较高的灵敏度和特异性,有助于早期筛选亚临床转移。

荧光定量RT-PCR检测食管癌外周血CK19mRNA和CK20mRNA表达

目的应用荧光定量RT-PCR(Fluorogenic quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测食管癌外周血中微转移情况。方法用荧光定量RT-PCR方法检测38例食管癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA表达。结果38例食管癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性14例,阳性率36.84%;CK20mRNA检测阳性6例,阳性率15.79%;两者任一阳性18例,阳性率47.37%。结果显示外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达与临床分期、分化程度和淋巴结转移相关,与性别、年龄、病理类别无关。结论用荧光定量RT-PCR法联合检测食管癌患者外周血CK19mRNA和CK20mRNA有助于筛选亚临床转移和指导临床治疗方案的制定。

尿激酶型纤溶酶原激活剂mRNA在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)mRNA在卵巢癌组织中的表达及其意义。方法应用荧光定量RT-PCR方法,分别检测23例卵巢癌组织中uPA mRNA的表达,与卵巢良性肿瘤相比较。同时,分析uPA mRNA的表达与卵巢癌的临床分期之间的关系。结果23例卵巢癌组织中uPA mRNA的表达阳性率为60.9%,卵巢良性肿瘤uPA mRNA表达阳性率为30.0%,且uPA mRNA表达卵巢癌的临床分期呈正相关。结论uPA mRNA表达可作为判断卵巢癌恶性程度及预后的指标之一。

肺癌外周血CK19mRNA表达的临床意义

目的:应用荧光定量RT-PCR(Fluorogenic quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法检测67例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:66例肺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性35例,阳性率53.0%,统计结果显示外周血CK19mRNA的表达与性别、年龄、病理类别、临床分期无关,在不同分化程度、淋巴结转移状态间有显著差异。结论:CK19mRNA可作为RT-PCR法检测肺癌患者外周血微转移的分子标志物,有助于早期诊断肺癌血行转移,指导临床治疗。

乳腺癌外周血细胞角蛋白19 mRNA的检测及临床价值

目的应用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌外周血中的表达情况,并评价其表达的临床意义。方法用荧光定量RT-PCR方法检测49例乳腺癌患者外周血CK19mRNA表达。结果49例乳腺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性28例,阳性率57.1%,统计结果显示乳腺癌患者外周血CK19mRNA的表达阳性率在患者不同年龄、病理类别、临床分期、ER、PR状态的各组差异无显著性(P>0.05),在淋巴结转移状态间有显著差异。结论CK19mRNA可作为RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血微转移的分子标志物,有助于早期预测乳腺癌发生血道微转移,指导临床治疗。

乙型肝炎病毒与载脂蛋白B关系及其意义的实验研究

目的通过检测不同乙型肝炎病毒(HBV)载量受试者血脂水平的差异及其与HBV的关系及其意义。方法选择2017年6月至2018年1月住院的100例HBV携带者及同期入院体检的100例健康人作为研究对象,对其健康状态进行复检,确定受试者无其他疾病影响的条件下,将受试者根据HBV载量分为三组:病毒载量≤500拷贝/ml(正常组,n=100),500拷贝/ml <病毒载量<1×105拷贝/ml(HBV携带组,n=37),病毒载量≥1×105拷贝/ml(乙肝患者组,n=63)。检测血清血脂指标[甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白(Apo) A1]水平和血浆Apo B水平;对转染与未转染p HBV1. 3质粒的两种Hep G2细胞中Aop B mRNA的表达进行测定;对转染与未转染Apo B的两种Hep G3细胞中HBs Ag、HBe Ag含量及HBV-DNA含量进行测定。结果 HBV数量随着患者病情加重而增多,正常者体内不含HBV。血清学检测显示,随受试者体内病毒载量(正常组→HBV携带组→乙肝患者组)的递增,其血清TC、HDL、LDL、Aop A1和血浆Apo B水平均呈递降(P均<0. 05);其中,LDL含量下降最为明显。进一步对作为HDL主要载脂蛋白的Apo B进行的RT-PCR检测显示,转染p HBV1. 3质粒的Hep G2细胞其Apo B mRNA表达水平低于未转染细胞。HBV指标检测显示,未转染Apo B的Hep G3细胞其HBs Ag、HBe Ag和HBV-DNA含量均明显高于转染细胞(P均<0. 01)。结论 HBV感染可减少患者血脂水平,并以LDL及其主要载脂蛋白Apo B的下降最明显,HBV感染可降低Apo B对HBV复制的抑制作用,促进HBV的复制。该作用是否通过微粒体TC转移蛋白(MTP)途径而产生,有待进一步研究。