水曲柳miR156a克隆及功能的初步分析

【目的】水曲柳是木犀科白蜡树属落叶大乔木,为我国东北地区三大珍贵硬阔之一,国家储备林计划重要造林树种。MicroRNAs(miRNAs)是一种单链内源性非编码RNA,水曲柳miR156的克隆及功能的初步分析,为水曲柳miRNAs的系统研究奠定基础。【方法】对水曲柳miR156家族进行分析,克隆水曲柳miR156的初级转录本,构建了pROKⅡ-FmmiR156-GFP过表达载体,并对水曲柳下胚轴进行了遗传转化。【结果】生物信息学分析表明,水曲柳miR156前体序列与拟南芥和杨树亲缘性较远。在水曲柳中有4条miR156前体序列,并且均构成一条成熟序列。克隆水曲柳miR156初级转录本序列,构建过表达载体,以水曲柳下胚轴为外植体进行遗传转化,与FmSPL2-OE相比FmmiR156-OE出芽较多。预测水曲柳miR156靶向14条FmSPLs基因,转录表达分析结果证实了FmSPL2、FmSPL9和FmSPL13是miR156的下游靶基因,并被miR156下调表达。检测出芽相关基因(WUS)表达量,明确FmmiR156可以上调WUS基因的表达。【结论】首次克隆得到了水曲柳miR156的初级转录本序列,明确miR156可以靶向并负调控FmSPLs基因,还可以促进水曲柳下胚芽的再生,该结果的获得对水曲柳miRNA功能的进一步研究具有一定的参考价值。