Fmoc(9-芴甲氧羰基)法固相合成胸腺五肽

采用对碱敏感的Fmoc法α-氨基保护策略固相合成了胸腺五肽,并讨论了胸腺五肽不同固相载体、不同活化试剂对胸腺五肽固相合成的影响。试验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在90%以上,同时对产品进行色谱分析,纯度达到83%。

胸腺素α1的Fmoc固相合成法

本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果表明各步的缩合率均在 96 2 %以上 ,多数达 99%以上。同时还对合成工艺条件进行了研究。合成粗品的纯度 (胸腺素α1的含量 )为 46 52 % (质量分数 ) ,胸腺素收率为 37 81 %

Fmoc固相合成法

介绍蛋白质固相合成中Ｆｍｏｃ合成法的现状及进展

Fmoc固相合成生长激素释放肽-2

生长激素释放肽（GHRP）于20世纪70年代末、80年代初依据蛋氨酸-亮氨酸脑啡肽的结构首次合成[1],之后又合成了数种类型的GHRP[2]。研究发现,结构改造后的GHRP-2（又名KP-102,药品名为Pralmorelin,氨基酸序列为D-Ala-（D-β-naphthyl）-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2）具有更强的刺激生长激素释放和改善儿童生长激素缺乏症的作用.

Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性

【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。

脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测

目的:用固相法合成脊髓肽 MP-2并验证其生物活性。方法:采用 Fmoc 固相法对脊髓肽 MP-2进行仪器自动合成,通过正交实验对反应条件进行了优化,肽-树脂复合物酸裂解后获得小肽粗品。用高效液相色谱法对所得粗品纯化制备,并利用 LC-MS 色谱仪确定目标产物,最后对纯品的生物活性进行检测。结果:通过正交实验优化 PSSM-8多肽合成仪合成MP-2的反应条件,粗品得率达到82%,HPLC 峰归一化法检测纯度为62.9%,中压柱制备后纯品纯度达到96.7%。纯品对S180肿瘤细胞进行抑瘤试验,证明 MP-2 0.25 mg·kg^(-1)对 S180有明显抑制作用,抑瘤率50.4%,且毒性低,不影响动物的发育生长。结论:合成实验证明,Fmoc 固相合成法合成脊髓肽 MP-2,操作条件温和且粗品得率较高,质谱检定主峰为目标峰后中压柱进行制备,分离操作简单,可以进行小批量生产;活性试验证明 MP-2具有抑制肿瘤S180生长的效果,为进一步进行药效学验证提供了初探基础。

人脑利钠肽的Fmoc固相合成

探讨生物活性肽人脑利钠肽(BNP)的固相合成工艺,并为工业化合成提供理论依据。本文以二氯三甲基树脂(以下简称为二氯树脂)为载体,采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸,以1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)/1-羟基苯并三氮唑(HOBT)/二异丙基乙胺(DIEA)缩合,以碘作为环化试剂,用切割试剂将BNP粗品从树脂上切割下来。通过MALDI-MS质谱仪检测,所合成环肽的分子量与理论分子量一致,使用RP-HPLC液相色谱仪对合成的环肽进行纯化,得到的BNP纯度达到97%以上。本合成工艺具有快捷、简便、高效的特点,适合于大批量的生产目的肽。

Fmoc多肽固相合成中氨基酸的保护

本文主要介绍Fmoc多肽固相合成中保护氨基酸的选择。

八聚精氨酸的Fmoc固相合成及其提高载体穿透细胞膜能力的研究

采用Fmoc固相合成法制备八聚精氨酸,并将其用于提高载药体系穿透细胞膜的能力。研究考察了王树脂取代度、搅拌方式以及树脂粒度对于酯化效率的影响,并进一步考察八聚精氨酸修饰对体系穿透细胞膜能力的影响。结果表明,氨基酸与王树脂的酯化效率随王树脂取代度的减小而增加;在其他条件相同的情况下,机械搅拌的酯化效率较恒温振荡方式更高;王树脂粒度越小,树脂表面裸露羟基相对越多,反应物扩散路径越短,越有利于酯化反应进行,酯化效率越高。经飞行质谱分析,证实反应产物中含有八聚精氨酸。红外分析进一步对产物结构进行了确证。细胞摄取实验证明,经八聚精氨酸修饰后,体系穿透细胞膜的能力显著提高。

多肽固相合成的研究进展

多肽固相化学合成法是蛋白质研究领域非常重要的研究方法之一,主要可以分为Boc方法和Fmoc方法,在生物药物、蛋白质工程、免疫学等研究中得到了广泛的应用。该文论述了多肽固相合成法的原理,比较了两种典型合成方法的优缺点,介绍了适用于该方法的多肽种类,提出了多肽合成过程中存在的问题与解决策略,最后展望了多肽合成法的应用前景,以供相关领域的研究人员参考。

人胸腺肽α_1的固相合成及体外活性研究

目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究 ,并对合成产物进行活性评价。方法采用对碱敏感的Nα 芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α 氨基的保护基 ,以Fmoc Asn(Trt) WangResin为起点 ,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1。与Nα Fmoc 基团配套的保护策略还有 :叔丁氧羰基 (Boc)保护Lys的侧链氨基 ,叔丁酯基 (OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基 ,叔丁氧基 (tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基 ,三苯甲基 (Trt)保护Asn的侧链酰胺基。采用DCC HOBt缩合剂法进行接肽反应 ,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程 ,肽段最后用TFA DCM(V∶V=1∶1 )定量地从树脂上切除。结果胸腺肽α1总产率为 3 3 2 %。纯化后的产物 ,经SDS PAGE和RP HPLC鉴定 ,纯度为98 8%以上 ,活性与日达仙对照品相当。结论Nα 芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少 ,产品纯度高、收率高。

自组装多功能反应器固相合成依非巴特

采用集反应、搅拌、鼓泡、N2气保护和过滤五重功能的自组装反应器,研究了树脂种类、溶剂、缩合试剂和反应时间对环肽依非巴特产率的影响。结果表明,以Rink Amide AM树脂为固相载体,HBTU/HOBt/DIEA为肽键缩合剂,DMF为溶剂,反应2 h,粗肽得率高达86.6%,经液相色谱纯化后纯度达98%以上。

多肽BRC4的固相法合成及其与RAD51(231-260)的相互作用

采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护的氨基酸为原料,HOBT/HBTU/DIEA为缩合剂,经RP-HPLC分离纯化合成了3条多肽(BRC4,BRC4-1和BRC4-2),纯度>90%,其结构经MS(ESI)确证。采用圆二色光谱研究了BRC4,BRC4-1和BRC4-2与蛋白RAD51关键肽段RAD51(231-260)的相互作用。结果表明:3条多肽与RAD51(231-260)的相互作用强度为BRC4-1>BRC4-2>BRC4。

正交设计法优化胸腺五肽固相合成工艺

【目的】寻找固相合成胸腺五肽的较优工艺条件。【方法】采用Fmoc保护策略固相合成胸腺五肽,应用正交设计试验法,选取7种因素,每个因素选取2个水平,用高效液相色谱法确定生成物中胸腺五肽的产率,考察产率这一指标。【结果】胸腺五肽较优的合成条件为:氨基酸的用量比为1:3、哌啶的浓度为20%、脱保护基时间为30 min、缩合剂DCC与HOBt的用量比为2:1、缩合时间为6 h、裂解剂TFA的浓度为95%、裂解时间为30 min。哌啶的浓度、缩合剂DCC与HOBt的用量比、氨基酸的用量比为影响反应的主要因素。合成产率可达到38.4%。【结论】该合成工艺操作简便、周期短、产率较高、经济可行。

甲状旁腺素1-34肽的固相合成

以Wang树脂为固相载体,改进Fmoc(芴甲氧羰基)/tBu法,采用HPLC二次纯化,合成了甲状旁腺素1-34肽,产率23.3%,纯度大于99%(HPLC)。

多肽亲和配基的固相合成及其亲和作用

为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用,利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段(HWWWPAS)进行了合成．在合成中发现,肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果．去除脯氨酸后,目标产物的收率从0％提高到11．6％;同时,七肽序列中丙氨酸的存在也会影响合成效果．若将丙氨酸除去,合成收率会明显提高(达到76％),特别是将丙氨酸更换为谷氨酸产物的收率和纯度均可达到70％以上．利用固定化六肽片段(HWWWES)进行亲和吸附实验的结果表明,改造后的六肽配基与原先的七肽配基具有相似的亲和吸附效果．

固相有机合成

综述了近年来固相有机合成中采用的连接分子和连接策略及固相合成在有机合成中的应用。

糖肽的固相合成

综述了固相法合成糖肽的最新进展，论述了合成策略和所用聚合物载体，这是一种很有前途的合成糖肽的方法。参考文献４２篇。

多肽固相合成法中的3个关键点

多肽固相合成(SPPS)已成为多肽研究的一种常用手段,近年来多肽固相合成发展迅速,利用SPPS法几乎能够高收率地制备多肽。综述了固相合成中3个关键点:合成中常用的树脂载体、保护策略和缩合剂。

Eptifibatide的固相合成及分离纯化

Eptifibatide是一种血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂,临床研究结果显示其医用上的产业前景良好.采用Rink-Am-Resin树脂作为固相载体,Fmoc为保护策略固相合成了Eptifibatide.以DMF为反应溶剂,Piperidine-DMF脱去Fmoc保护基团,以TBTU/HOBt/DIEA作为肽键缩合试剂进行接肽反应,用TFA/EDT/TIS/H2O定量地从树脂上切除,制备型高效液相色谱分离纯化粗肽.同时对产品进行色谱分析和质谱鉴定.实验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在95%以上,多数在99%以上.粗肽纯度为86.8%,产率为55%.分离纯化后的产物纯度达到98.5%,MOLDI-TOF质谱测得的m/z与理论值相符.为化学合成Eptifibatide及其分离纯化提供了一条切实可行的路线.