Fmoc(9-芴甲氧羰基)法固相合成胸腺五肽

采用对碱敏感的Fmoc法α-氨基保护策略固相合成了胸腺五肽,并讨论了胸腺五肽不同固相载体、不同活化试剂对胸腺五肽固相合成的影响。试验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在90%以上,同时对产品进行色谱分析,纯度达到83%。

降糖多肽药物固相合成有关物质研究综述

近年来糖尿病患病人数日益增多,鉴于此,糖尿病类药物发展很快,尤其以多肽类药物发展最快,但大多数多肽药物在体内半衰期短,生物利用度低,因此寻找长效的降糖药物势在必行。目前多肽药物主要通过动植物中提取、化学合成和基因重组三种方式来制备,多肽药物化学合成方法是主要制备工艺之一,但化学合成过程中产生的有关物质会对产品质量有一定的影响。目前多肽药物主要采用固相多肽合成技术,该方法反应容器单一,容易实现自动化,但是该过程容易产生有关物质,并且多肽药物在合成、储存过程中,容易形成相关结构杂质,例如氨基酸丢失、氨基酸插入、保护基残留、氧化/还原等。本文主要介绍多肽药物有关物质,重点从固相合成工艺杂质方面展开综述,调研了国内外目前的研究现状,以期能探索出多肽药物其他的开发关键点,为这类药物的产业开发奠定基础。

Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性

【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。

Fmoc固相合成生长激素释放肽-2

生长激素释放肽（GHRP）于20世纪70年代末、80年代初依据蛋氨酸-亮氨酸脑啡肽的结构首次合成[1],之后又合成了数种类型的GHRP[2]。研究发现,结构改造后的GHRP-2（又名KP-102,药品名为Pralmorelin,氨基酸序列为D-Ala-（D-β-naphthyl）-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2）具有更强的刺激生长激素释放和改善儿童生长激素缺乏症的作用.

Fmoc法固相合成胸腺五肽工艺

采用Fmoc法固相合成胸腺五肽(TP-5)。利用RP-HPLC和质谱对其进行鉴定,绘制胸腺五肽纯品的标准曲线,作为胸腺五肽的准确定量方法。考察不同的反应溶剂、缩合剂和切割条件对合成胸腺五肽纯度的影响,并由此确定最佳合成工艺条件:以DMF为反应溶剂,HATU为缩合剂,TFA、p-甲基苯酚、EDT和H2O体积比为97.00∶0.25∶0.25∶2.50溶液为切割条件。在此条件下,胸腺五肽的纯度达到80.34%。

脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测

目的:用固相法合成脊髓肽 MP-2并验证其生物活性。方法:采用 Fmoc 固相法对脊髓肽 MP-2进行仪器自动合成,通过正交实验对反应条件进行了优化,肽-树脂复合物酸裂解后获得小肽粗品。用高效液相色谱法对所得粗品纯化制备,并利用 LC-MS 色谱仪确定目标产物,最后对纯品的生物活性进行检测。结果:通过正交实验优化 PSSM-8多肽合成仪合成MP-2的反应条件,粗品得率达到82%,HPLC 峰归一化法检测纯度为62.9%,中压柱制备后纯品纯度达到96.7%。纯品对S180肿瘤细胞进行抑瘤试验,证明 MP-2 0.25 mg·kg^(-1)对 S180有明显抑制作用,抑瘤率50.4%,且毒性低,不影响动物的发育生长。结论:合成实验证明,Fmoc 固相合成法合成脊髓肽 MP-2,操作条件温和且粗品得率较高,质谱检定主峰为目标峰后中压柱进行制备,分离操作简单,可以进行小批量生产;活性试验证明 MP-2具有抑制肿瘤S180生长的效果,为进一步进行药效学验证提供了初探基础。

人脑利钠肽的Fmoc固相合成

探讨生物活性肽人脑利钠肽(BNP)的固相合成工艺,并为工业化合成提供理论依据。本文以二氯三甲基树脂(以下简称为二氯树脂)为载体,采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸,以1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)/1-羟基苯并三氮唑(HOBT)/二异丙基乙胺(DIEA)缩合,以碘作为环化试剂,用切割试剂将BNP粗品从树脂上切割下来。通过MALDI-MS质谱仪检测,所合成环肽的分子量与理论分子量一致,使用RP-HPLC液相色谱仪对合成的环肽进行纯化,得到的BNP纯度达到97%以上。本合成工艺具有快捷、简便、高效的特点,适合于大批量的生产目的肽。

Fmoc多肽固相合成中氨基酸的保护

本文主要介绍Fmoc多肽固相合成中保护氨基酸的选择。

基于基金项目的药学创新实验设计——以“Fmoc固相合成多肽”为例

在基金科研成果的基础上,利用固相合成技术,设计了以9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成S1肽序的创新实验项目.实验采用简单易得和安全性更高的试剂,并使用高效液相色谱和质谱对合成的粗品进行纯度检测和结构确证,形成了对活性多肽合成和表征的一套完整的科研训练过程,对于激发学生的科研热情、加强综合实验技能、培养科研素养和创新精神具有较好的效果.

胸腺五肽固相合成及免疫增强作用的研究

目的 合成有生物活性的胸腺五肽并研究其免疫增强作用。方法 用Fmoc固相肽合成法合成胸腺五肽 ,用E玫瑰花实验检测生物活性。合成的胸腺五肽经小鼠腹腔注射后进行淋巴细胞转化实验、溶血空斑实验及IL 2活性实验 ,研究其免疫增强作用。结果 合成 2批胸腺五肽 ,精肽产量分别为 2 7mg和 3 4mg ,具有生物活性 ,实验组动物脾淋巴细胞的转化率、空斑形成细胞及IL 2活性皆明显高于空白对照组。结论 用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的胸腺五肽 ,且具有免疫增强作用。

固相合成胸腺五肽的研究进展

叙述了胸腺五肽TP5的药理、药代及毒副作用、市场状况和前景 ,分析了胸腺五肽各氨基酸的α -氨基保护基和侧链保护基的特点 ,并从固相载体、第一个氨基酸的连接、肽链延长等 3个方面介绍了Merrifield法、Boc法、Fmoc法 。

胸腺素α1的Fmoc固相合成法

本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果表明各步的缩合率均在 96 2 %以上 ,多数达 99%以上。同时还对合成工艺条件进行了研究。合成粗品的纯度 (胸腺素α1的含量 )为 46 52 % (质量分数 ) ,胸腺素收率为 37 81 %

多肽固相合成的研究进展

多肽固相化学合成法是蛋白质研究领域非常重要的研究方法之一,主要可以分为Boc方法和Fmoc方法,在生物药物、蛋白质工程、免疫学等研究中得到了广泛的应用。该文论述了多肽固相合成法的原理,比较了两种典型合成方法的优缺点,介绍了适用于该方法的多肽种类,提出了多肽合成过程中存在的问题与解决策略,最后展望了多肽合成法的应用前景,以供相关领域的研究人员参考。

抗菌肽的固相合成、分离纯化与构效关系的研究

应用手工固相ＤＣＣ／ＨＯＢｔ法合成ＣｅｃｒｏｐｉｎＢ、Ｓｈｉｖａｌ１、ＡＢＰ３、ＷＨＤ４种抗菌肽。各抗菌肽的Ｃ端均为酰胺化。最终用ＨＰＬＣ分离纯化。这４种肽对大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１、野生型大肠杆菌、产气杆菌及４种植物病原菌青枯菌、临床致病型大肠杆菌、伤寒杆菌、硝酸盐杆菌均有明显的杀伤或抑制作用，对白血病细胞Ｋ５６０、肺癌细胞Ａ５４９也有杀伤作用。其中尤以ＷＨＤ杀伤作用最为明显，并用对其它３种肽不能作用的枯草杆菌、绿脓杆菌也略有抑制。而Ｓｈｉｖａ１对细菌的作用较其它３种肽弱。

微波促进催产素和赖氨加压素环肽的固相合成

以RinkAmide-MBHA树脂为载体,采用Fmoc/tBu正交保护固相合成策略,运用微波照射促进,先快速高效地合成得到载有催产素或赖氨加压素还原型多肽的树脂,再将连接在树脂上的各还原型多肽分别在微波促进条件下和常温条件下环合形成二硫键制得环肽,最后用ReagentK试剂将环肽从树脂上裂解下来得到目标多肽的粗品.利用HPLC法测定不同固相环合条件下得到的多肽粗品纯度,结果显示经微波促进固相环合得到的多肽粗品纯度明显高于常温条件下得到的多肽粗品纯度.粗品最后经过反相制备高效液相系统纯化并冻干得到目标多肽纯品,通过电喷雾质谱法测定了制得的还原型多肽及相应环肽的分子量,验证了它们的结构.

人胸腺肽α_1的固相合成及体外活性研究

目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究 ,并对合成产物进行活性评价。方法采用对碱敏感的Nα 芴甲氧羰基 (Fmoc)作为α 氨基的保护基 ,以Fmoc Asn(Trt) WangResin为起点 ,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1。与Nα Fmoc 基团配套的保护策略还有 :叔丁氧羰基 (Boc)保护Lys的侧链氨基 ,叔丁酯基 (OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基 ,叔丁氧基 (tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基 ,三苯甲基 (Trt)保护Asn的侧链酰胺基。采用DCC HOBt缩合剂法进行接肽反应 ,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程 ,肽段最后用TFA DCM(V∶V=1∶1 )定量地从树脂上切除。结果胸腺肽α1总产率为 3 3 2 %。纯化后的产物 ,经SDS PAGE和RP HPLC鉴定 ,纯度为98 8%以上 ,活性与日达仙对照品相当。结论Nα 芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少 ,产品纯度高、收率高。

醋酸奥曲肽的固相合成

目的设计并合成醋酸奥曲肽。方法采用固相多肽合成法 ,使用逐步缩合的战略合成奥曲肽。结果与结论合成了醋酸奥曲肽 ,纯品总收率为 3 0 % (以连到树脂上的第一个氨基酸计 )。关键中间体及最终产物的结构经质谱、红外光谱、核磁共振氢谱及碳谱得到确证。

固相合成胸腺五肽(TP5)

采用Fmoc固相多肽合成中的活化酯方法和2,6-二氯苯甲酰氯(DCB)混合酸酐法,对Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH与Wang树脂反应中的反应级数和表观活化能进行了研究,并采用常规方法和微波强化方法分别进行了胸腺五肽的合成.实验结果表明,活化酯方法的反应级数为1.855,表观活化能15.24kJ/mol,混合酸酐法的表观活化能为35.14kJ/mol.与传统方法相比,微波将缩合反应速率提高了30倍以上,氨基酸过量倍数也从传统的三倍降低到两倍.

奥曲肽固相合成及环化的研究

为了研究用固相肽合成法合成奥曲肽(octreotide),采用CTC树脂为载体,Fmoc-哌啶保护基系统,并使用了逐步增长肽合成战略及碘氧化法对线性奥曲肽进行环化,通过反向高效液相色谱纯化.合成纯度达70.26%.结果表明:用固相肽合成法合成奥曲肽具有操作简单、可行、收率较高等特点,适合于工业化生产.

微波强化固相合成伐普肽

以伐普肽为研究对象,用固相合成方法,并对偶合反应进行微波强化.利用正交实验研究了微波强化对偶合反应的促进作用.正交实验结果用多元非线性回归分析和响应面法优化,确定优化条件为:反应时间5 min,包括1 min升温、4 min维持,最高反应温度60 ℃.与常规偶合反应相比,提高反应效率12～36倍.常规接肽反应保护氨基酸用量与固相合成树脂摩尔数之比为3倍,在优化的微波强化反应条件下,保护氨基酸用量减少为过量1倍;保护氨基酸与树脂的偶合效率明显提高,伐普肽得率从常规合成的48%提高到76%.其结构经质谱、高分辨质谱、红外光谱、核磁共振氢谱证实,与目标化合物的结构一致.