Fmoc(9-芴甲氧羰基)法固相合成胸腺五肽

采用对碱敏感的Fmoc法α-氨基保护策略固相合成了胸腺五肽,并讨论了胸腺五肽不同固相载体、不同活化试剂对胸腺五肽固相合成的影响。试验结果表明Fmoc合成策略中各步的缩合率均在90%以上,同时对产品进行色谱分析,纯度达到83%。

Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性

【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。

Fmoc法固相合成胸腺五肽工艺

采用Fmoc法固相合成胸腺五肽(TP-5)。利用RP-HPLC和质谱对其进行鉴定,绘制胸腺五肽纯品的标准曲线,作为胸腺五肽的准确定量方法。考察不同的反应溶剂、缩合剂和切割条件对合成胸腺五肽纯度的影响,并由此确定最佳合成工艺条件:以DMF为反应溶剂,HATU为缩合剂,TFA、p-甲基苯酚、EDT和H2O体积比为97.00∶0.25∶0.25∶2.50溶液为切割条件。在此条件下,胸腺五肽的纯度达到80.34%。

脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测

目的:用固相法合成脊髓肽 MP-2并验证其生物活性。方法:采用 Fmoc 固相法对脊髓肽 MP-2进行仪器自动合成,通过正交实验对反应条件进行了优化,肽-树脂复合物酸裂解后获得小肽粗品。用高效液相色谱法对所得粗品纯化制备,并利用 LC-MS 色谱仪确定目标产物,最后对纯品的生物活性进行检测。结果:通过正交实验优化 PSSM-8多肽合成仪合成MP-2的反应条件,粗品得率达到82%,HPLC 峰归一化法检测纯度为62.9%,中压柱制备后纯品纯度达到96.7%。纯品对S180肿瘤细胞进行抑瘤试验,证明 MP-2 0.25 mg·kg^(-1)对 S180有明显抑制作用,抑瘤率50.4%,且毒性低,不影响动物的发育生长。结论:合成实验证明,Fmoc 固相合成法合成脊髓肽 MP-2,操作条件温和且粗品得率较高,质谱检定主峰为目标峰后中压柱进行制备,分离操作简单,可以进行小批量生产;活性试验证明 MP-2具有抑制肿瘤S180生长的效果,为进一步进行药效学验证提供了初探基础。

胸腺素α1的Fmoc固相合成法

本文用Fmoc固相方法合成了胸腺素α1。采用对碱敏感的Fmoc作为α -氨基的保护基 ,并确定与之配套的侧链保护策略。探索出了适宜的接肽方案 ,即前 9步接肽用对称酸酐法 ,后 1 8步用DCC -HOBt缩合法 ,从而保证了每步的高缩合率。试验结果表明各步的缩合率均在 96 2 %以上 ,多数达 99%以上。同时还对合成工艺条件进行了研究。合成粗品的纯度 (胸腺素α1的含量 )为 46 52 % (质量分数 ) ,胸腺素收率为 37 81 %

合成工艺对固相法制备高四方性纯钛酸钡粉体的影响

钛酸钡是一种重要的功能陶瓷材料,因具有优异的电学性能而被广泛应用于多层陶瓷电容器(MLCC)等电子元器件。本研究以碳酸钡和二氧化钛为原料,采用固相法制备形貌均匀且四方性高的BaTiO_(3)粉体,系统研究了合成工艺(合成温度、升温速率和保温时间)对BaTiO_(3)粉体的影响。通过TG/DTA、XRD和SEM等测试手段对BaTiO_(3)粉体进行表征,结果表明:合成温度主要影响BaTiO_(3)粉体的四方性,保温时间和升温速率主要影响BaTiO_(3)粉体的粒径和粒度分布;原材料经过90 r/min球磨24 h后,在合成温度1050℃、升温速率5℃/min和保温时间3 h的条件下,制备了平均粒径为400 nm、四方性(c/a)为1.0091的形貌均匀的BaTiO_(3)粉体。本工作为固相法制备高可靠性MLCC用纯BaTiO_(3)粉体提供了良好的研究思路。

固相法合成多肽AN-M的工艺研究

目的:探讨生物活性肽AN-M的固相合成工艺,并为工业化合成目的肽提供理论依据。方法采用固相法,以Fmoc-保护基保护的α-氨基酸和Wang树脂为原料,经1—氧—3—双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)、1—羟基苯并三氮唑(HoBt)、二异丙基乙胺(DIEA)缩合,20%哌啶的DMF溶液脱保护,用切割试剂将AN-M粗品从Wang树脂上切割下来。结果经反相高效液相色谱分析纯化,可得目的肽的得率大于67．00%,最终成品的纯度在98．78%以上,经质谱鉴定其分子量与理论值一致。结论该合成方法步骤简便、便于操作、产品得率高,可用于大规模合成目的肽。

响应面法优化微波固相合成鳕鱼皮胶原蛋白肽锌螯合物的工艺

以鳕鱼皮胶原蛋白肽和硫酸锌为原料,利用微波固相法合成肽锌螯合物。以微波时间、微波功率、胶原蛋白肽和硫酸锌质量比为自变量,肽锌螯合率为响应值,利用二次正交旋转组合试验和响应面分析法对合成条件进行优化。结果表明,最佳反应条件为:微波时间105 s,微波功率252 W,胶原蛋白肽和硫酸锌质量比3:1,在此条件下,合成的鳕鱼皮胶原蛋白肽锌螯合物的螯合率为29.34%,与模型的预测值29.33%接近。

多肽BRC4的固相法合成及其与RAD51(231-260)的相互作用

采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护的氨基酸为原料,HOBT/HBTU/DIEA为缩合剂,经RP-HPLC分离纯化合成了3条多肽(BRC4,BRC4-1和BRC4-2),纯度>90%,其结构经MS(ESI)确证。采用圆二色光谱研究了BRC4,BRC4-1和BRC4-2与蛋白RAD51关键肽段RAD51(231-260)的相互作用。结果表明:3条多肽与RAD51(231-260)的相互作用强度为BRC4-1>BRC4-2>BRC4。

降糖多肽药物固相合成有关物质研究综述

近年来糖尿病患病人数日益增多,鉴于此,糖尿病类药物发展很快,尤其以多肽类药物发展最快,但大多数多肽药物在体内半衰期短,生物利用度低,因此寻找长效的降糖药物势在必行。目前多肽药物主要通过动植物中提取、化学合成和基因重组三种方式来制备,多肽药物化学合成方法是主要制备工艺之一,但化学合成过程中产生的有关物质会对产品质量有一定的影响。目前多肽药物主要采用固相多肽合成技术,该方法反应容器单一,容易实现自动化,但是该过程容易产生有关物质,并且多肽药物在合成、储存过程中,容易形成相关结构杂质,例如氨基酸丢失、氨基酸插入、保护基残留、氧化/还原等。本文主要介绍多肽药物有关物质,重点从固相合成工艺杂质方面展开综述,调研了国内外目前的研究现状,以期能探索出多肽药物其他的开发关键点,为这类药物的产业开发奠定基础。

响应面法优化微波固相合成毛虾肽螯合钙工艺

采用响应面法优化微波固相合成毛虾肽螯合钙的工艺。结果表明,最佳的微波固相合成毛虾肽螯合钙工艺为:毛虾肽与乳酸钙的质量比为2.5∶1,微波功率420 W,螯合时间73 s,钙螯合率达到82.09%。

多肽的固相合成法研究进展

介绍了多肽的固相合成法,包括多肽合成原理、发展简史、固相多肽合成的分类、合成中常用的树脂、合成步骤、合成过程中可能出现的副反应以及较长肽链、某些蛋白质的合成策略。

多肽固相合成法在海洋肽类药物研究与开发中的应用

随着固相多肽合成技术的日趋成熟,海洋肽类药物研究的不断深入,两者结合在药物研究和应用领域前景非常好。现结合多肽固相合成法在芋螺毒素、海葵毒素等的研究与开发中的应用情况,综述多肽固相合成法的原理及其在海洋肽类药物中的应用现状及发展前景。

采用固-液相相结合法合成聚乙二醇化胸腺五肽

目的通过对胸腺五肽(TP5)进行聚乙二醇(PEG)修饰,合成PEG化TP5,以期延长TP5在体内的半衰期。方法采用液相合成和固相合成相结合技术合成PEG化TP5。采用透析、高效液相色谱进行分析和纯化;通过核磁、质谱和氨基酸测序进行产物结构鉴定。结果合成的PEG化TP5结构鉴定与理论值一致。结论采用一种简便的方法成功实现对TP5的PEG化修饰。

正交设计法优化胸腺五肽固相合成工艺

【目的】寻找固相合成胸腺五肽的较优工艺条件。【方法】采用Fmoc保护策略固相合成胸腺五肽,应用正交设计试验法,选取7种因素,每个因素选取2个水平,用高效液相色谱法确定生成物中胸腺五肽的产率,考察产率这一指标。【结果】胸腺五肽较优的合成条件为:氨基酸的用量比为1:3、哌啶的浓度为20%、脱保护基时间为30 min、缩合剂DCC与HOBt的用量比为2:1、缩合时间为6 h、裂解剂TFA的浓度为95%、裂解时间为30 min。哌啶的浓度、缩合剂DCC与HOBt的用量比、氨基酸的用量比为影响反应的主要因素。合成产率可达到38.4%。【结论】该合成工艺操作简便、周期短、产率较高、经济可行。

Fmoc固相合成法

介绍蛋白质固相合成中Ｆｍｏｃ合成法的现状及进展

固相法在多肽合成领域的应用

综述近年来固相多肽合成方法在聚合物载体、连接分子、保护基、缩合方法和切割条件等方面的应用进展。多肽的全合成不仅具有重要的理论意义 ,而且具有重要的应用价值。特别是固相多肽合成方法的创立和发展 ,是多肽合成领域的一个重大突破 ,对化学、生化、医药。

FMOC新型固相法合成胸腺素α_1及其反应途径

目的 :以固相合成法合成多肽胸腺素 α1 ,并探讨对称酸酐法失效问题的解决方案。方法 :采用 Nα芴甲氧羧基 (FMOC)作为α-氨基的保护基 ,以逐个延伸的固相合成法合成胸腺素α1 。结果 :以高效液相色谱法和电泳法鉴定本法制备的胸腺素 α1 的存在 ;同时发现对称酸酐法在某些肽的合成后期会失效 ,此问题未见前人报道。可通过改变反应途径 ,使 O-酰基脲成为主要酰化试剂或随着肽链的延长选用不同溶剂 ,使多肽树脂达到充分溶胀而得以解决。结论 :以本法制备胸腺素α1 ,条件温和 ,副反应少 ,产率高 ;经改变反应途径或更换溶剂等方法 。

技术方法LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法

目的 确认固相合成多肽P14分子是否存在异构体。方法 通过HP 110 0与ESI离子源PEAPI2 0 0 0液质联用 (LC/MS)分离P14肽 ,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计分子量前提下 ,应用PESCIEXAn alyst 1.0b3质谱分析软件分析子离子流色谱图。结果 从总离子流色谱图中精确提取P14肽Q1正离子双电荷质量数 ,形成P14肽质量数子离子流色谱图 ,其中有散在的不同保留时间的质量数存在。结论 P14肽有异构体存在 ,与结合理论上分析P14氨基酸组成发现 (P14组成中有 6个胱氨酸 ,其存在无疑增加了分子内二硫键形成的可能性 )

多肽固相合成缩合试剂──HBTU合成方法的改进

２－（１Ｈ－苯并三唑）－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－四甲基脲六氟磷酸盐（ＨＢＴＵ）是近年来发展起来的一种理想的缩合试剂已在多肽固相合成中得到了广泛应用。本文对ＨＢＴＵ的合成进行了改进，方法操作简单、安全，产品收率较高。