Fmr1基因敲除小鼠耳蜗GAD的表达

目的对4周龄Fmr1基因敲除小鼠的耳蜗的GAD表达进行观察,探讨耳蜗GAD的表达是否受FMRP的影响。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠各15只进行耳蜗的苏木精-伊红(HE)染色和GAD免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理。结果耳蜗HE染色结果:4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异。4周龄KO小鼠的耳蜗中GAD表达的平均阳性细胞数均高于WT小鼠,P<0.01,差异具有统计学意义。结论 GAD表达的改变可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关。

Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为的观察

目的对不同年龄Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为观察。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后对不同周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行听源性惊厥的观察,数据采用多因素方差分析处理。结果经PCR技术证实脆性X综合征小鼠模型是Fmr1基因敲除小鼠。Fmr1基因敲除小鼠在中央区的惊厥阈值较野生型小鼠显著短。Fmr1基因敲除小鼠鼠受声音刺激后表现为惊恐、奔跑明显的AGS前驱表现,最后发生跌倒、惊厥,呈角弓反张状,最后恢复活动能力或者反复发作,或者导致死亡。结论 Fmr1基因敲除小鼠的行为异常,其兴奋性较野生型小鼠增高。

氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用

目的探讨糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除(KO)小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用及机制。方法给90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续5d腹腔注射不同剂量的氯化锂,用药第6天进行高架十字迷宫行为学实验,通过录像机录像,然后用Smart软件分析录像,观察能否改善KO鼠的高架十字迷宫的表型;同时通过免疫印迹技术检测KO及野生型(WT)鼠的海马和皮层中GSK3β和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的变化。结果在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域的活动时间、次数以及路程均明显高于WT组。KO鼠用氯化锂后,在开放区域的活动时间、次数以及路程均减低,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹实验结果显示,KO鼠p-GSK3β表达比WT鼠少;用氯化锂后,KO鼠p-GSK3β表达增加。WT鼠用氯化锂后,开放区域活动时间、次数以及路程有较少改善,p-GSK3β表达也有增加。未使用氯化锂的KO鼠与WT鼠相比,总GSK3β表达无明显差异,KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总GSK3β无明显改变,P>0.05。结论 GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的高架十字迷宫表型,对KO鼠有治疗作用,其机制可能与氯化锂导致的p-GSK3β表达增加有关。

Fmr1基因敲除小鼠的ABR阈值观察

目的对不同周龄的KO与WT小鼠听阈进行检测并对比,了解KO小鼠的听阈变化。方法采用PCR法鉴定FMR1基因敲除型(KO)纯合子(-/-)及其野生型(WT)纯合子(+/+)FVB近交系小鼠,实验动物150只分两组:(1)KO组(3、4、6、8、10周龄,每周龄15只,共75只;②WT组(3、4、6、8、10周龄,每周龄15,共75只,用于听性脑干反应(ABR)测试。数据及图像的采集:以ABR图形中Ⅱ波的阈值为小鼠的ABR阈值。结果 ABR阈值:3周及4周年龄组小鼠各基因型间KO小鼠的ABR阈值显著高于WT小鼠,差异有统计学意义(P<0.01);6、8、10周各组中各基因型小鼠的KO小鼠和WT小鼠的ABR阈值的差异无统计学意义(P>0.05)。结论幼年期FMR-1 KO小鼠听阈提高,成熟期FMR-1 KO小鼠听阈无异常,KO小鼠ABR的结果与AGS发生的年龄依赖性相一致。

30日龄Fmr1基因敲除小鼠的自主活动观察

目的 对30日龄的Fmr1基因敲除小鼠的自主活动进行观察.方法 采用30日龄的KO鼠和WT鼠分别连续进行2天的自主活动实验,根据所获得的数据进行多因素方差分析处理.结果 通过第1天的学习与第2天的记忆再现,在自主活动实验中,与WT鼠相比,KO鼠在自主活动实验中的活动和站立次数均增多,具有统计学意义（P＜0.05）,粪便数相比无明显差异.结论 30日龄Fmr1基因敲除小鼠的自主活动异常,运动性和兴奋性较野生型小鼠增高.

电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠学习记忆能力的影响

目的观察电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠学习记忆能力的影响。方法用Morris水迷宫实验测试电针、手针长强穴对FMR1基因敲除小鼠的学习记忆功能。结果①空间航行实验,手针组比电针组差异具有统计学意义(P<0.05);②空间搜索实验,各象限无明显差异,FMR1基因敲除小鼠在电针干预后,在2、3象限停留的时间比其它2个象限长。结论手针长强穴能提高FMR1基因敲除小鼠的学习和记忆能力。

GSK3抑制剂氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠痛觉敏感性的影响

目的:探讨氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)痛觉敏感性的影响及机制。方法:8周龄KO鼠及野生型(WT鼠)小鼠第1天测定热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency,PWTL)值作为基础痛阈,第2～5天腹腔注射氯化锂后测定PWTL值,第6天给药后取脊髓腰骶膨大段组织,通过免疫组化及Western blot检测实验小鼠脊髓GSK3β和P-GSK3β水平的变化。结果:KO鼠的PWTL值比WT鼠明显升高。使用氯化锂后,KO鼠PWTL值恢复至WT鼠水平。KO鼠脊髓P-GSK3β表达较WT鼠明显减少。使用氯化锂后,KO鼠脊髓P-GSK3β表达增多。结论:KO鼠热痛觉敏感性降低。KO鼠脊髓P-GSK3β表达减少可能是KO鼠热痛觉敏感性降低的原因之一;氯化锂可能通过增加脊髓中P-GSK3β的表达而改善KO鼠热痛觉敏感性。

Fmr1基因敲除小鼠大脑的磁共振波谱研究

目的探讨氢质子磁共振波谱成像(~1H-MRS)测定Fmr1基因敲除小鼠(KO小鼠)脑内代谢物的变化及诊断价值。方法 23只4月龄KO小鼠(实验组)和16只野生型FVB小鼠(WT小鼠,对照组)采用3.0T高场强MRI行~1H-MRS,测量小鼠大脑皮质与海马区N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)和肌酐(Cr)的峰下面积,计算NAA/Cr和Cho/Cr比值并进行两样本均数t检验。结果与对照组比较,实验组小鼠NAA/Cr比值明显降低(t=-5.912,P<0.01),Cho/Cr比值明显升高(t=3.888,P<0.01)。结论~1H-MRS能定量测定KO小鼠脑内代谢物(细胞膜代谢)异常,可能为诊断及评价脆性X综合征疗效提供重要依据。

GSK3抑制剂氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠的痛觉敏感性的影响

目的探讨氯化锂对Fmr1基因敲除小鼠(KO鼠)的痛觉敏感性的影响及机制。方法 8周龄KO小鼠第1天测定热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)值,作为基础痛阈,第2、3、4、5天连续腹腔注射氯化锂,给药30 min后测定PWTL值,第6天给药30 min后取腰骶膨大段脊髓组织,通过免疫印迹技术检测KO及WT鼠脊髓水平的GSK3β和P-GSK3β的变化。结果8周龄KO鼠的痛阈均比同周龄WT鼠的痛阈高。使用氯化锂后,KO鼠痛阈下降,且与WT鼠相比差异无统计学意义。8周龄KO鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的P-GSK3β的表达较WT鼠明显减少。使用氯化锂后,KO鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的P-GSK3β的表达增多,而WT鼠的变化不明显。8周龄KO鼠及WT鼠脊髓腰骶膨大段后角边缘层及胶状质的GSK3β的表达在用药前后均无明显改变。结论 KO鼠热痛觉阈值增高,热痛觉敏感性降低。KO鼠腰骶膨大段脊髓后角的P-GSK3β表达减少可能是KO鼠热痛觉敏感性降低的原因之一;氯化锂可能通过增加脊髓后角中的P-GSK3β的表达而改善KO的鼠热痛觉敏感性。

C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠保种体系研究

目的:通过活体繁殖或胚胎冷冻方式建立FMR1基因敲除(C57BL/6 FMR1 KO)小鼠的保种技术体系。方法:繁殖保种方式选取发育成熟的C57BL/6 FMR1 KO种鼠,按照1∶1全同胞兄妹近亲繁殖,采用原始修饰平行线并进行谱系记录,结合PCR检测基因型验证。低温保种方式选取4~6周正常C57BL/6J雌鼠超排处理获取卵子,3~6月龄FMR1基因敲除雄鼠获取精子,基于体外受精和胚胎冷冻、复苏、移植等技术,通过PCR检测鉴定子代基因型,最终建立该C57BL/6 FMR1 KO小鼠品系胚胎冻存技术。结果:(1)C57BL/6 FMR1 KO小鼠活体繁殖保种记录3代,并基于交配对数、祖系亲缘关系和生殖能力系数绘制谱系图,结果显示小鼠品系繁殖状况良好,繁殖性能稳定。(2)胚胎冷冻保种方式总计冻存胚胎435枚,受精率71%,移植验证所产后代雄鼠均为野生型,雌鼠均为FMR1基因敲除杂合子。结论:通过活体繁殖或胚胎冷冻方式均可对C57BL/6FMR1 KO小鼠进行品系保种。而胚胎冷冻方式更为简便、快速、不受污染,并有效解决基因修饰的小鼠雌性不育和生殖能力低下等问题。

柴胡桂枝汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠脑组织超氧化物歧化酶和丙二醛及一氧化氮的影响

目的利用超临界二氧化碳(CO2)萃取法获取柴胡桂枝汤挥发油,并在Fmr1基因敲除小鼠(脆性基因敲除小鼠)模型上观察柴胡桂枝汤挥发油的抗癫痫作用,及其与超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的关系。方法将30只30日龄的Fmr1基因敲除小鼠(KO)和30只30日龄的野生型小鼠(WT)分别分成两组(KO空白组和KO用药组,WT空白组和WT用药组),按1.7ml/kg的剂量腹腔注射柴胡桂枝汤挥发油,观察柴胡桂枝汤挥发油对小鼠旷场行为的影响,并取不同部位的小鼠脑组织制成1∶10(重量体积比)的组织匀浆,测定SOD活性及MDA、NO的水平。结果与空白组比较,用药组小鼠在旷场实验中运动的平均速度、总路程、穿过各区的次数减少;脑组织中SOD活性增高,而MDA、NO水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡桂枝汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的探索性、兴奋性、运动性均有抑制作用;其抗癫痫作用与清除自由基、阻止过氧化物生成,减少NO的神经毒性相关。

加味甘麦大枣汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的旷场行为的影响

目的探讨加味甘麦大枣汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠的旷场行为的影响。方法选用4周龄KO和WT小鼠各45只。各分为3组:生理盐水对照组,加味甘麦大枣汤挥发油高浓度组和低浓度组。所有的小鼠腹腔注射打药加味甘麦大枣汤挥发油30 min后做场行为的实验。结果未用药的WT组和KO组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显高于WT组小鼠;KO鼠使用加味甘麦大枣汤挥发油用药2个剂量组与生理盐水(0 mg/kg)组比较,KO鼠进入各区的速度、时间、次数和路程均有明显减少(P<0.05),WT鼠用药后,与0剂量组比较,高剂量组减少差异有统计学意义(P<0.05);加味甘麦大枣汤挥发油治疗使KO鼠路程的活动时间和进入次数减少,接近WT鼠的探索行为方式。结论加味甘麦大枣汤挥发油能够有效地逆转脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为。

电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠皮质区CREB蛋白表达的影响

目的研究电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠的活动量及其皮质区CREB蛋白表达的影响。方法将24只23日龄FMR1基因敲除小鼠随机分为空白组、电针非穴组、电针长强穴组各8只。电针长强穴组于尾根与肛门之间的凹陷中进针,电针非穴组于肋弓最低点上1 cm进针,2组均进行电针刺激,持续时间20 min;空白组除模拟针刺过程中的抓取动作外,不进行其他操作。3组小鼠均连续干预14 d。分别于干预前2天及干预结束前2天进行自主行为学检测,干预结束后取皮质区组织进行CREB蛋白的检测。结果与空白组、电针非穴组比较,干预后电针长强穴组自主活动数明显提高(P<0.05),皮质区CREB蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论电针长强穴能增强FMR1基因敲除小鼠的自主活动能力,其机制可能与调控皮质区CREB蛋白表达有关。

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异。方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实验。结果:在定位航行实验的第四天,KO(基因敲除型)组小鼠的潜伏期明显高于WT(野生型)组(P<0.01);空间搜索实验中,KO组小鼠的超越原平台的次数和平均速度均小于WT组小鼠(P<0.05);在工作记忆实验第四天,KO组小鼠的潜伏期高于WT组小鼠(P<0.05);听源性惊厥实验中,WT组小鼠的惊厥阈值低于KO组小鼠(P<0.01);自主活动实验中,KO组小鼠的自主活动次数高于WT组小鼠(P<0.01);在悬尾实验中,WT组小鼠的静止时间高于KO组小鼠,但不存在显著性差异。结论:在行为学实验中,KO组小鼠受到FMR1基因敲除影响,使KO组小鼠的运动能力和记忆能力明显低于WT组小鼠,更容易在声音的诱导下触发癫痫。

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学及针刺长强穴治疗后的对比研究

目的:通过避暗实验、跳台实验和矿场实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异,并通过针刺长强穴治疗后进行行为学对比。方法:通过胚胎复苏得到3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实验。结果:在避暗实验的第3天,WT(野生型)组小鼠的潜伏期大于KO(基因敲除型)组,WT组小鼠的电击次数低于KO组,且均存在显著性差异(P<0.05);在跳台实验中,WT组小鼠的潜伏期和错误次数均低于KO组小鼠(P<0.05);在旷场实验中,WT组小鼠的平均速度明显高于KO组小鼠(P<0.01),WT组小鼠在中央区域停留的时间高于KO组小鼠(P<0.05)。通过针刺长强穴治疗后,在避暗实验中,长强穴组小鼠的潜伏期高于非经非穴组、电击次数低于非经非穴组,且都存在显著性差异(P<0.05);跳台实验中的潜伏期和旷场实验中的平均速度以及中央区域停留时间,长强穴组均高于非经非穴组(P<0.05)。结论:在行为学实验中,KO组小鼠主要受到FMR1基因敲除影响,使KO组小鼠趋避性增加,对环境的认知能力及探索性下降,焦虑程度增强,其学习记忆能力和运动能力明显低于WT组小鼠,在针刺长强穴治疗后,通过避暗实验、跳台实验和旷场实验等行为学实验的对比实验表明:C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠是理想的脑瘫、脑卒中后遗症等疾病康复的实验动物模型,并且针刺治疗对其有显著的改善效果。

高压氧对脆性X综合征小鼠异常行为影响的初步观察

目的探究高压氧(HBO)对脆性X综合征(FXS)模型小鼠异常行为的影响,为下一步HBO治疗FXS提供理论依据和实验支持。方法将20只Fmr1基因敲除小鼠采用数字表法随机分为HBO治疗组和对照模型组,每组10只。对HBO治疗组小鼠进行共20次HBO干预;对照模型组小鼠不作任何处理,正常饲养。21 d后对2组小鼠进行高架十字迷宫实验、旷场实验和三箱社交实验。结果HBO治疗组小鼠与对照模型组小鼠相比,在高架十字迷宫实验中,进入闭臂次数[(14.44±4.53)vs.(26.90±5.23)次]和进入闭臂次数百分比[(30.06±3.37)%vs.(57.73±7.97)%]显著减少(P<0.01),进入开臂次数[(35.00±5.25)vs.(19.45±3.61)次]和进入开臂次数百分比显著增加[(69.94±7.77)%vs.(42.27±7.97)%](P<0.01);在旷场实验中,旷场外周区活动路程[(12254.39±1860.08)vs.(7446.85±1292.22)cm]和活动总路程[(13014.37±1944.84)vs.(8051.60±1420.88)cm]显著增加(P<0.01);在三箱社交实验中,与熟悉小鼠接触次数[(37.55±19.13)次]与陌生小鼠接触次数[(18.64±10.60)次]相比显著增加[(46.45±15.65)vs.(18.57±17.83)次](P<0.01)。结论HBO能使FXS模型小鼠异常的焦虑与社交行为得到显著改善,提示HBO治疗有望成为治疗FXS的新手段。