新疆农牧区老年肌少症患者外周血PBMC中TWEAK、Fn14及NF-κB通路基因表达分析

目的观察新疆农牧区老年肌肉减少症(后简称肌少症)患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导物(TWEAK)、成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)及核因子κB(NF-κB)通路基因的表达变化,并探讨其意义。方法在新疆农牧区常住居民中选择80例研究对象,肌少症患者40例纳入肌少症组、健康人群40例纳入对照组。提取两组空腹外周血中的PBMC,采用qRT-PCR法检测TWEAK、Fn14、IκB激酶α(IKKα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65 mRNA。结果肌少症组外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA表达高于对照组(P均<0.05)。校正性别、年龄后,协方差分析结果仍显示,肌少症组外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA表达高于对照组(P均<0.05)。校正年龄、性别后,偏相关性分析显示,TWEAK mRNA与Fn14 mRNA表达呈正相关(r=0.424,P<0.01),Fn14 mRNA与IKKα、IKKβmRNA表达呈正相关(r分别为0.264、0.284,P均<0.05),IKKα、IKKβmRNA与NF-κB p65 mRNA表达呈正相关(r分别为0.724、0.660,P均<0.01)。结论新疆农牧区老年肌少症患者外周血PBMC中TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβmRNA高表达,TWEAK、Fn14 mRNA表达与IKKα、IKKβmRNA表达有相关性;TWEAK、Fn14可能通过调节IKK激活NF-κB炎症通路从而参与老年人肌少症的发生发展。

人Fn14基因真核重组质粒的构建及其表达

目的构建人成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fn14)基因真核重组质粒及其表达。方法从人肝细胞癌组织抽取总RNA,RT-PCR扩增出Fn14基因全长cDNA,经测序正确后,核酸内切酶EcoRⅠ、XbaⅠ酶切PCR产物,亚克隆入pcDNA 3.1-Myc载体,重组质粒pcDNA 3.1-Myc-Fn14经酶切及测序鉴定正确后转染COS-7细胞,通过免疫组织化学DAB法检测Myc-Fn14融合蛋白的表达。结果重组质粒pcDNA 3.1-Myc-Fn14经EcoRⅠ、XbaⅠ酶切及测序鉴定正确,重组质粒包含人Fn14基因完整编码区。免疫组织化学检测结果显示,重组质粒转染COS-7细胞后成功表达Myc-Fn14融合蛋白,转染空载体pcD-NA 3.1-Myc的COS-7细胞未见Myc-Fn14融合蛋白表达。结论构建了人Fn14基因真核表达载体,该重组质粒可表达含Myc-Fn14的融合蛋白,为研究Fn14功能奠定了基础。