声化学激活原卟啉Ⅸ杀伤艾氏腹水瘤细胞的分子机理

采用频率为2.2MHz、声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的损伤进行研究,并初步探讨其作用的生物学机制。分别用荧光分光光度法、激光共聚焦扫描显微镜分析原卟啉Ⅸ在肿瘤细胞内的积聚、定位情况;利用台盼蓝拒染法测定聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对细胞存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测细胞膜脂质过氧化水平的变化。通过研究发现,艾氏腹水瘤细胞对原卟啉Ⅸ有一定的选择性吸收和留作用,原卟啉Ⅸ主要定位于细胞的线粒体中;在超声结合原卟啉Ⅸ作用下,艾氏腹水瘤细胞的存活率明显下降;细胞的超微结构发生明显损伤;线粒体膜电位下降;ROS生成量显著增加;脂质过氧化水平显著增加。研究结果表明:超声激活原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞有着明显的协同杀伤效应,其间产生的活性氧自由基作用,降低线粒体膜电位,增加膜的脂质过氧化水平,可能是其损伤艾氏腹水瘤细胞的主要因素之一。

超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的杀伤作用

通过台盼蓝拒染法,以细胞存活率为指标用扫描电镜观察超声激活原卟啉Ⅸ(ProtoporphyrinⅨ,PPⅨ)对艾氏腹水肿瘤(Ehrlich ascites tumor,EAT)细胞的杀伤作用;采用硫代巴比妥酸法检测超声激活PPⅨ对EAT细胞膜脂质过氧化水平的影响,研究超声激活Ⅸ对EAT细胞的杀伤效应.结果显示,超声结合PPⅨ杀伤EAT细胞与超声强度、处理时间及PPⅨ药物浓度呈正相关,超声结合PPⅨ对EAT细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PPⅨ表现出无明显的细胞毒作用;超声激活PPⅨ后膜的脂质过氧化水平显著增加.实验表明超声激活PPⅨ对EAT细胞具有明显的协同杀伤效应,推测可能是超声激活PPⅨ增加了膜脂质过氧化量,从而使细胞受损,并且质膜可能是超声激活PPⅨ杀伤EAT细胞的主要靶点之一.