食品接触材料的抑菌性能测试中菌落显色方法的研制与应用

为摆脱食品接触材料的抑菌性能测试中传统方法操作步骤繁琐、检验周期长等问题,用棉质纤维和明胶制备采集试纸片、用2,3,5-三苯基四氮唑和平板计数琼脂制备显色培养基,将自制的采集试纸片和显色培养基引入食品接触材料的抑菌性能测试,进而构建菌落显色方法,比较分析菌落显色方法与传统方法菌落计数结果的差异。结果表明,对于食品接触材料的抑菌性能测试,本研究建立的菌落显色方法与传统方法抑菌性能测试的结果无统计学意义上的差别,二者具有相同的代表性和准确性,且菌落显色方法的操作步骤简单,没有繁琐的菌种洗脱过程,检验周期短,且可以批量化操作,因此,菌落比色法可以取代传统检测方法,在各个检测实验室对食品接触材料的抗菌性能进行监督和评价。

微量动态显色法定量检测胎牛血清中细菌内毒素含量

目的 探讨微量动态显色法定量检测胎牛血清中的细菌内毒素的可行性,并与凝胶法结果比较。方法 采用微量动态显色法鲎试剂,建立标准曲线,通过预干扰试验确定稀释倍数,测定供试品外加内毒素回收率进行干扰试验,对供试品进行定量检测,并与凝胶法试验结果进行比较。结果 标准曲线的线性范围为0.02~20 EU·mL^(-1),回归方程为lgT=2.9334-0.2883 lgC,相关系数| r |=0.9992,供试品在稀释200倍时无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%内,其中3批供试品的内毒素定量检测结果小于规定限值,1批高于限值,检测结果与凝胶法一致。结论 本品可采用微量动态显色法定量检测细菌内毒素含量,进行质量控制。

微量动态显色法细菌内毒素检查方法研究

目的通过研究确定微量动态显色法能否满足《中国药典》的要求,作为现有细菌内毒素检查法的补充。方法使用微量动态显色法鲎试剂,每孔样品和鲎试剂加样量各为25μL,检测波长405 nm,预设OD值0.05,使用半孔酶标板检测。依据《中华人民共和国药典》2020年版第四部“9101药品质量分析方法验证指导原则”的规定,按照其项下“杂质测定”中“定量”项目的具体要求,进行专属性、准确度、精密度、定量限、线性、范围、耐用度7项内容的方法学验证,并对48个药品品种共74批样品开展了品种适用性研究,对76个药品品种共143批样品(包括133批阴性样品和10批阳性样品)进行日常检验,并将结果与传统显色法检验结果进行了比对分析。结果经过方法学验证,表明微量动态显色法符合《中华人民共和国药典》对定量方法的要求;经过品种适用性与一致性比对研究,结果表明微量动态显色法与传统显色法相比,具有较好的等效性。结论微量动态显色法可以作为现有细菌内毒素的补充方法推广使用。

氟维司群注射液前处理及细菌内毒素检查方法研究

目的建立氟维司群注射液细菌内毒素的检查方法。方法取样品0.5 mL,加细菌内毒素检查用水(BET用水)5 mL,2000 r/min振荡5 min后,3000 r/min离心5 min,取水相,用BET用水稀释至所需倍数系列溶液。按2020年版《中国药典(四部)》通则1143细菌内毒素检查法,分别采用凝胶法、动态显色法、动态浊度法检测样品中的内毒素,考察水萃取液(水相溶液)的干扰及内毒素回收比。结果水相溶液稀释至2倍及以上时对鲎试剂均无干扰;外加20 EU/mL内毒素时回收比均在50%~200%范围内。结论氟维司群注射液经水萃取后,采用凝胶法、动态显色法、动态浊度法进行细菌内毒素检查均可行。

Study on Colorimetric Method and Content Determination of Total Phenol in Homemade Plum Wine

[Objectives] To study on colorimetric method and content determination of total phenol in homemade plum wine. [Methods]The optimal determination condition of total polyphenols content in plum wine( commercially available and homemade) by Folin-Ciocalteu method was inspected,and commercially available and homemade plum wine was evaluated by the method. [Results]The optimal determination conditions of total polyphenols content: sample dose of 1. 0 m L,Folin-Ciocalteu reagent of 1 m L,4% Na_2CO_3 solution of 4. 0 m L,reaction temperature of 50 ℃,reaction time of 1. 5 h,and determination wavelength of 756 nm. Absorbance showed good linear relationship with total polyphenols content within the range of 17. 73-59. 12 μg/m L( y = 14. 878 x + 0. 0739,R^2= 0. 9998). Recovery rate of adding standard sample was between 98. 8% and 103. 5%,and relative standard deviation was 2. 0%( n = 5). [Conclusions]The method had high precision degree and good stability,which was suitable for measuring total polyphenols content in plum wine( commercially available and homemade).

动态显色法检测能力验证样品中细菌内毒素的含量

目的:检测中国食品药品检定研究院下发的能力验证样品中细菌内毒素的含量。方法:选用光度测定法中的动态显色法,建立细菌内毒素检查的标准曲线,通过测定样品外加内毒素的回收率进行干扰试验,确定样品检测浓度线性范围,并测定样品中的细菌内毒素含量。结果:内毒素检测浓度线性范围为0.005~50 EU·mL^(-1)(|r|值均大于0.980);样品检测与标准曲线检测变异系数(CV)均小于10%;细菌内毒素回收率为50%~200%;两批能力验证检测结果分别为12.21 EU·mL^(-1)和93.24 EU·mL^(-1)。结论:动态显色法测定该能力验证样品的检测方法可靠、结果准确,可用于能力验证的盲样细菌内毒素含量测定。

葡萄糖酸钙注射液中细菌内毒素的定量检测

目的建立葡萄糖酸钙注射液中细菌内毒素的定量检测方法,以便准确实时评估注射液中内毒素的含量变化。方法采用微量动态显色法,选取2个不同厂家共6批样品,通过标准曲线可靠性试验、预干扰和干扰实验,确定样品不被干扰的稀释倍数,并将检测结果与凝胶法进行比较。结果标准曲线可靠性回归方程为lg T=2.8974-0.29133lg C,相关系数│r│=1.0000,本品稀释至50倍时无干扰,回收率值在60%~70%之间;微量动态显色法与凝胶法检查结果一致。结论微量动态显色法相较于凝胶法,操作更方便快捷,可实现定量检测,结果灵敏度更高。

盐酸利多卡因注射液中细菌内毒素定量检测法探究

目的建立盐酸利多卡因注射液中细菌内毒素定量检测方法,准确实时评估注射液中内毒素含量,并与凝胶法检测结果相比较,以确定微量动态显色法用于盐酸利多卡因注射液中细菌内毒素定量检测的可行性和准确性。方法采用微量动态显色法,选取2家不同厂家共6批样品进行实验,通过标准曲线可靠性试验、预干扰和干扰实验,确定本品不被干扰的稀释倍数,并将结果与凝胶法比较。结果标准曲线可靠性的回归方程为lgT=2.8974-0.29133lgC,相关系数|r|=1.0000,本品稀释至10倍时无干扰,回收率在60%~75%之间;微量动态显色法与凝胶法检查结果一致。结论微量动态显色法可用于定量检测盐酸利多卡因注射液中的细菌内毒素含量,相较于凝胶法,操作更方便快捷,可实现定量检测,结果灵敏度更高。

左乙拉西坦原料药细菌内毒素检查方法学研究

目的:研究左乙拉西坦原料药细菌内毒素检查方法,对凝胶法和动态显色法两种试验方法进行比较。方法:按照《中国药典》2020年版四部通则1143“细菌内毒素检查法”,用凝胶法和动态显色法两种试验方法,对3批样品进行干扰试验以及细菌内毒素检查。结果:将左乙拉西坦原料药细菌内毒素限值定为“每1mg左乙拉西坦中含内毒素的量应小于0.03 EU”,左乙拉西坦对凝胶法和动态显色法两种试验方法均无干扰作用,细菌内毒素检查结果符合规定。结论:凝胶法和动态显色法均可用于左乙拉西坦原料药细菌内毒素检测,可根据不同的需求,选择适合的检测方法。

微量动态显色法检测奥拉西坦注射液中细菌内毒素含量

目的:应用微量动态显色法对奥拉西坦注射液进行细菌内毒素定量检测,并与凝胶法结果比较。方法:采用微量动态显色法鲎试剂对奥拉西坦注射液进行干扰试验,采用凝胶法鲎试剂对奥拉西坦注射液进行细菌内毒素检查。结果:本品在终浓度为40 mg·mL-1及以下浓度时对微量动态显色法鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应无干扰作用,回收率在50%~200%之间,检测结果与凝胶法一致。结论:本品可采用微量动态显色法定量检测细菌内毒素含量,进行质量控制。

苯酚-硫酸法测定花椒叶多糖含量

建立了一种灵敏、特异、精确定量分析花椒叶多糖的苯酚-硫酸法，采用该方法测定了陕西大红袍花椒叶中多糖的含量。该方法选择半乳糖作为标准单糖，484nm为工作波长。通过单因素实验和正交试验优化得到了较佳显色反应条件是加样次序为苯酚-样品-浓硫酸，显色温度为25℃，质量分数为5％的苯酚添加量为0．3mL，浓硫酸添加量为3．5mL，显色时间为30min。系统适应性实验显示该方法的标准曲线方程为y=0．0127x-0．0076（R^2=0．997），线性范围为10．00—60．00μg／mL，LOD和LOQ分别为2．08μg／mL和6．30μg／mL，日内、日间精密度分别在0．49％～3．64％，5．17％～6．05％之间，平均回收率为101．19％。样品溶液在显色反应后的2h内稳定性较好。测定发现陕西大红袍花椒叶中ω（多糖）在8．11～8．89mg／g之间。该方法为花椒叶多糖的定量分析和花椒叶资源的开发利用提供了参考。

蒽酮-硫酸法测定海藻糖含量显色条件的改进

采用传统的蒽酮-硫酸法定糖时,海藻糖的最大吸收峰有误差。为了准确地测定海藻糖含量,对影响波长测定的因素进行了系统分析。结果表明,硫酸浓度、蒽酮试剂加入量以及显色时间都对海藻糖的最大吸收波长有影响,并发展了三种蒽酮比色方法。采用这三种方法,海藻糖溶液均在625nm处有最大吸收值,在10～100μg/mL范围内呈线性关系,且稳定性好,结果准确。

23种致癌芳香胺的显色法测定

为了减少禁用芳香胺检测过程对大型色谱仪的依赖,提高检测速度,降低检测成本,建立了23种致癌芳香胺的邻甲氧基苯酚显色测定方法。根据芳香胺的结构特征,引入重氮化偶合反应机制,有效考察优化了23种芳香胺重氮化反应和偶合反应过程中的各项条件,得到最佳的反应条件:在室温下,23种芳香胺和亚硝酸钠在pH值为2.56时反应生成重氮盐,加入氨基磺酸铵除去多余的亚硝酸钠后,加入邻甲氧基苯酚与重氮盐偶联显色,显色的最佳pH值范围为10～11,显色反应可以迅速完成,生成的偶氮化合物可稳定180 min以上。方法的线性范围为1～50 mg/L。该方法操作简单易行,可有效地应用于纺织品中23种致癌芳香胺的同时定性筛选检测。

微量动态显色法与动态显色法的等效性评价

目的评价微量动态显色法与动态显色法的等效性,为替代方法的使用提供数据支持。方法检测条件:采用微量动态显色法和动态显色法鲎试剂,每孔样品和鲎试剂加样量25μL(动态显色法100μL),检测波长405 nm,预设OD值0.03,使用半孔酶标板检测(动态显色法使用普通酶标板)。在国内的4个实验室协作研究,以等效性检验等多种统计方法,评价两种方法的等效性。结果单因素方差分析、配对t检验和等效性检验的结果较为一致,均显示出不同厂家的现有动态显色法之间存在一定差异,而每个厂家的试剂采用微量或常规的量之间并不存在显著性差异。结论微量动态显色法在准确度回收率方面是与现有试剂等效的。

分光光度法同时测定水中Cr(Ⅵ)、Cr(Ⅲ)和总铬的条件优化

实验中用过硫酸铵代替高锰酸钾将Cr(Ⅲ)氧化成Cr(Ⅵ),再与二苯碳酰二肼(DPCI)进行显色反应。利用Cr(Ⅵ)与DPCI的显色反应及可见光谱法建立了同时测定水样中痕量Cr(Ⅵ)和Cr(Ⅲ)的方法。用此方法对含有Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)的混合水样进行测定,分析效果良好。对影响各反应的条件及检测条件进行了优化研究,建立了快速、简便、可靠地测定水样中铬含量的方法。

沙冬青种子总黄酮测定方法及纯化工艺研究

旨在建立沙冬青种子总黄酮测定方法及沙冬青种子总黄酮纯化工艺。选用常用4种黄酮显色方法,通过紫外波长扫描分别确定槲皮素为对照品及沙冬青种子总黄酮的最佳吸收波长,建立标准曲线,并对各测定方法进行方法学验证,利用新建立的条件方法对沙冬青种子总黄酮进行含量测定;实验选择AB-8、D101、S-8型大孔树脂通过静态吸附及解析试验,筛选出AB-8型大孔树脂进行动态试验,建立大孔树脂纯化工艺条件,进一步通过乙酸乙酯进行萃取,提高其总黄酮纯度。结果显示,以槲皮素为对照品,采用Al Cl3-CH4O显色法,在检测波长为335 nm条件下可对沙冬青种子总黄酮含量进行有效测定;AB-8型大孔树脂在上样液浓度为6 mg/m L、上样液p H5.5、上样液体积5 BV、上样液流速3.5 BV/h条件下吸附,以70%乙醇、洗脱液流速1.5 BV/h、洗脱液体积6 BV条件下洗脱,沙冬青种子总黄酮含量由纯化前5.69%提高到41.07%;用AB-8树脂纯化后的总黄酮配置成一定浓度溶液后用乙酸乙酯萃取,总黄酮含量达到76.15%。

铬酵母中铬的含量测定

目的研究铬酵母中铬的含量测定方法。方法采用氧化－光度法。结果铬的平均回收率及相对标准偏差分别为１００．３％、２．７％（ｎ＝５）。结论本方法可用于测定铬酵母中铬的含量，方法简便，易行。

卫生微生物特异性显色培养基的研究与应用

利用传统的微生物培养及生化方法检测和鉴定卫生微生物是日常检测中的常用方法 ,但由于操作繁琐 ,需要时间较长 ,检测的敏感性和特异性比较局限 ,因此已经不能满足检测工作快和准的要求。显色培养基结合了酶与底物反应的特异性和菌落颜色的可视化信息 ,可以在自然环境中检测和鉴定不同的微生物个体 ,尤其是对混合生长的多种微生物进行检测。显色培养基被广泛应用于不同微生物群落结构检测和评价 ,是微生物快速检测方法中的研究热点。本文综述显色培养基在卫生微生物检测上的应用 ,存在的问题和发展前景。

一种凝血酶亲和色谱介质的制备方法

对凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质的制备方法进行了研究。首先使用凝血酶和溴化氰活化的琼脂糖制备凝血酶-琼脂糖亲和色谱介质,然后用生色底物法考察亲和色谱介质上凝血酶的活性,以凝血酶活性为指标对最佳偶联条件进行了优化。结果表明最佳条件为使用pH8.3的Na2CO3-NaHCO3溶液(含0.5 mol/L NaCl)为缓冲溶液,凝血酶用量为每1 g色谱介质加入凝血酶200 U,室温反应10 h。在最佳条件下所制备的色谱介质有较好的稳定性,在4℃条件下存放40天,亲和介质上的凝血酶活性仍有70.6%保留。该亲和色谱介质可广泛用于含凝血酶抑制剂的天然药物筛选和分离纯化。

微量生色底物法测定肝素钠抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性

目的英国药典中收载了半微量生色底物法测定低分子肝素抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性,在此基础上,我们考虑是否可以将实验方法进行改进,用微量生色底物法测定肝素类药物活性。方法调整样品与试剂浓度,降低总反应体积,在96孔酶标板中进行反应,用酶标仪测定样品吸光度。结果对6个肝素样品进行抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,实验结果误差小,重复性良好。结论微量生色底物法可以用于肝素类药物抗Ⅹa因子和抗Ⅱa因子活性测定,该法提高了实验效率,降低了检验成本,可以考虑用本法取代传统的凝血法测定肝素效价。