甜瓜抗枯萎病基因Fom-2分子标记及南通市枯萎病生理小种鉴定

利用抗枯萎病基因Fom-2的双侧连锁分子标记SSR430和STS296对甜瓜品种资源Fom-2基因的携带情况进行分子鉴定,并采用接种鉴定方法对南通地区甜瓜枯萎病病菌的生理小种进行研究。结果表明:①根据双侧标记基因型所预测的15个抗病基因型品种,有14个品种经鉴定表现为抗病,只有黄元帅1个品种表现为感病,预测准确率达到93.3%;而在预测的15个感病基因型的品种中,实际发病的有7个,表明这7个品种不带抗枯萎病主基因,另外8个表现抗病,表明不带抗病主基因Fom-2,但存在其他抗病基因。②接种鉴定结果表明,南通海门地区侵染甜瓜的枯萎病生理小种为Race 0。研究证明分子标记SSR430和STS296可用于甜瓜抗枯萎病的分子标记辅助育种。

薄皮甜瓜白啄瓜枯萎病抗性基因Fom-2的同源克隆与表达分析

枯萎病是甜瓜等瓜类作物的毁灭性病害,Fom-2基因介导了甜瓜抗枯萎病生理小种0和1,抗枯萎病育种是甜瓜等瓜类作物育种的重要目标之一。通过同源克隆方法从薄皮甜瓜白啄瓜中克隆到了枯萎病抗性基因Fom-2,推定编码1 099个氨基酸,所推定的蛋白质序列经Blast分析与数据库中NBS-LRR类R基因具有较高的同源性。进一步序列分析FOM-2蛋白具有典型的R基因的NB-ARC及SCOP 2个结构功能域。实时荧光定量PCR结果表明,白啄瓜Fom-2基因经枯萎病接种后表达明显上调。白啄瓜Fom-2基因为白啄瓜抗病育种奠定了基础。

新疆甜瓜Fom-2基因同源序列的克隆及分析

近年来甜瓜枯萎病蔓延迅速,危害严重,分离克隆甜瓜抗病基因,利用转基因技术改良甜瓜抗病品性是一种从根本上解决甜瓜枯萎病危害的新途径。根据已知Fom-2基因序列设计特异引物,采用RT-PCR技术从新疆甜瓜抗病性品种黄旦子中扩增出580bp的cDNA片段,序列分析表明它与已发表Fom-2基因具有高度同源性基因片段,命名为X-Fom-2。以X-Fom-2为探针对新疆甜瓜黄旦子、伽什瓜、红心脆、金丽-2号进行Southernblot和Northernblot,结果表明,X-Fom-2以多拷贝形式存在。X-Fom-2在抗病品种黄旦子、金丽2号有表达且在病原菌诱导后增强,而在感病品种伽什瓜、红心脆中没有表达。

3种外源诱导剂预处理对甜瓜抗病特征及其Fom-2和CHT基因表达的影响

该研究选用水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、Ca^(2+)、无菌水(对照)作为外源预处理诱导剂,以抗、感枯萎病甜瓜品种为材料,分别于诱导预处理2d后接种甜瓜枯萎菌,并于接种5、7、9d时观察发病情况,进行病情调查;在接种后1、3、5、7、9d取甜瓜叶片,分析抗病甜瓜(MR-1)和感病甜瓜(M1-15)叶片中甜瓜抗枯萎病基因(Fom-2)、几丁质酶基因(CHT)的表达变化,以探寻提高防治甜瓜枯萎病菌侵染的技术途径。结果显示:(1)外源MeJA和SA预处理接种后2品种的病情指数显著低于对照,但Ca^(2+)处理后的病情指数与对照无显著差异。(2)经外源诱导预处理接种后,MR-1和M1-15品种叶片的Fom-2和CHT基因均出现差异表达,但Ca^(2+)诱导其上调表达的效果微弱。(3)经SA、MeJA诱导预处理接种后,2品种叶片的Fom-2和CHT基因表达总体均显著高于对照;Fom-2基因的表达抗病甜瓜MR-1分别在接种后5d、7d时达到峰值,而感病甜瓜M1-15则均在接种9d时达到峰值;CHT基因的表达抗病甜瓜MR-1则均在接种后7d时达到峰值,而感病甜瓜M1-15分别在接种后7d、9d时达到峰值。(4)Ca^(2+)处理对抗、感甜瓜叶片的Fom-2和CHT基因的表达均无显著影响。(5)相关分析表明,经SA、MeJA诱导预处理接种后,甜瓜枯萎病病情指数与Fom-2和CHT基因表达量有显著的相关性;而Ca^(2+)处理效果不显著。研究表明:SA、MeJA通过诱导Fom-2、CHT基因上调表达,进而使甜瓜的抗病性提高,而Ca^(2+)处理对两基因表达和甜瓜抗病性均无显著影响。

UV/H_(2)O_(2)和UV/PDS体系对磷霉素降解效果的对比

紫外高级氧化技术降解有机污染物,由于操作简单、成本低、不易产生二次污染等优点被广泛应用。文章以磷霉素钠作为污染物,研究了UV/H_(2)O_(2)和UV/过硫酸盐(PDS)两种高级氧化技术对有机磷的降解特性,并对比了两种体系下有机磷的降解动力学和反应机理。试验结果表明,在UV/H_(2)O_(2)和UV/PDS体系中,UV激活氧化剂产生的活性基团可有效降解有机磷,有机磷降解率分别为97.3%和95.0%,初始pH、氧化剂投加量、反应温度均会对有机磷降解产生影响,相比于UV/H_(2)O_(2)体系,UV/PDS体系在降解有机磷时,具有pH适用范围较宽、反应温度低、氧化剂投加量小、反应速率快的优势。在最优条件下,两种体系都具有环境适应性。通过自由基捕获试验与电子顺磁共振技术(EPR)可知,UV/H_(2)O_(2)体系中存在·OH,UV/PDS体系中存在SO_(4)^(·-)和·OH。通过气-质联用(CG/MS)技术,测得两种体系降解磷霉素钠后均含有乙酸和丙酸。

巨噬细胞在泡沫细胞化过程中的Ca^(2＋)变化

我室曾用Ｃ＿（５７）ＢＬ／６Ｊ品系小鼠腹膜巨噬细胞与１０ｍｇ·Ｌ￣（－１）氧化低密度脂蛋白孵育４天，建立了出现在早期动脉粥样硬化损伤中的巨噬细胞源性泡沫细胞的病理细胞模型，本文报道应用Ｃａ￣（２＋）荧光指示剂技术及ＮＡＤＨ氧化偶联差光谱变化的分析方法，检测了前述培养的泡沫样细胞的胞浆Ｃａ￣（２＋）水平及膜上Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶活性。发现泡沫样细胞内的Ｃａ￣（２＋）水平为对照组细胞的２．７倍，膜上Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶活性为后者的２４％。实验结果提示，在巨噬细胞源性泡沫细胞的形成过程中，伴随着缓慢的Ｃａ￣（２＋）内流或释放，这可能与膜上Ｃａ￣（２＋）通道的持续开放及后期Ｃａ￣（２＋）依赖性ＡＴＰ酶的钝化有关。

甜瓜抗枯萎病基因同源序列克隆与序列分析

目的:克隆甜瓜抗枯萎病基因同源序列并对其序列分析。方法:根据已发表的甜瓜抗枯萎病基因Fom-2设计引物,从高抗枯萎病甜瓜品种‘日本安农二号’基因组中扩增Fom-2同源序列R-Fom-2。结果:该基因长3307bp,包含一个完整的开放阅读框,编码1073个氨基酸,推测蛋白质分子量123.57kDa,等电点7.06。属于nonTIR-NBS-LRR类抗病基因,在LRR区存在一个可能的CC结构域。但在nonTIR类抗病蛋白中,CC结构域一般位于kin-1a前。氨基酸同源性分析显示,R-Fom-2同Fom-2全长序列具有96%的同源性,对不同甜瓜品种Fom-2的LRR区分析比较,同源性在91%以上。且LRR区的差异主要集中在β-strand/β-turn区域。结论:序列分析揭示Fom-2家族是一个活跃的基因,LRR区可能对Fom-2家族的功能起着重要作用,为进一步研究R-Fom-2基因的结构与生物学功能奠定了基础。