维药阿里红多糖对运动疲劳小鼠Th1/Th2平衡及Foxp3 Scurfin蛋白表达调控研究

目的研究维药阿里红多糖对运动疲劳小鼠Th1/Th2平衡、Foxp3 mRNA及Foxp3 Scurfin蛋白表达调控作用。方法采用递增负荷运动制备小鼠运动疲劳模型,给予不同浓度阿里红多糖,观察阿里红多糖对各组小鼠Th1/Th2平衡及Foxp3 Scurfin蛋白表达的影响。结果阿里红多糖可有效调节运动疲劳小鼠血清Th1/Th2相关细胞因子水平,维持T淋巴细胞免疫平衡,显著提高运动疲劳小鼠脾脏Foxp 3 mRNA表达量及Foxp3 Scurfin蛋白表达水平。结论维药阿里红多糖多糖有显著的抗疲劳、增强免疫作用。

阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)的保护作用及其作用机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型,将60只SPF级SD大鼠按体质量随机分别为假手术组、模型组、地塞米松组(DEX组)、阿里红多糖低剂量组(ALH-L组)、中剂量组(ALH-M组)和高剂量组(ALH-H组)。各给药组于造模前预防给药1周,其中DEX组灌胃给予地塞米松0.8 mg/(kg·d),ALH-L、M、H组分别灌胃给予阿里红多糖10、20、40 mg/(kg·d),而假手术组和模型组灌胃给予等量生理盐水。造模24 h后取材,NBT染色法观察各组大鼠心肌梗死面积;化学比色法测定血浆TNF-α、IL-1β、MDA含量和CK、LDH、SOD活性;Western blotting法检测心肌组织Bcl-2和caspase-3的表达量。结果与假手术组比较,模型组的心电图ST段、心脏梗死率、血浆CK、LDH活性,TNF-α、IL-1β、MDA含量和心肌组织caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),血浆SOD活性和心肌组织Bcl-2表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ALH-L、M、H组均明显降低心电图ST段/心脏梗死率、血浆CK、LDH活性,TNF-α、IL-1β、MDA含量和心肌组织caspase-3的表达量(P<0.05),升高血浆SOD活性和心肌组织Bcl-2表达量(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与抗氧化、抗炎和抗凋亡作用有关。

阿里红多糖通过激活Nrf2/ARE通路改善阿尔茨海默病大鼠海马及脑皮层的氧化应激损伤

探讨阿里红多糖(Fomes officinalis Ames polysaccharides,FOPS)抗氧化应激的作用,并从Nrf2/ARE信号通路研究其作用机制。72只健康雄性SD大鼠称体质量并按随机原则分为空白组、模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)、阿里红多糖高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg),每组12只。采用大鼠双侧海马CA1区注射(5μL/侧)Aβ1-42建立AD大鼠模型,给药30天,Morris水迷宫检测行为学变化,荧光定量RT-qPCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠脑皮层和海马组织中结构蛋白Keap1、Nrf2及下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1 mRNA及蛋白含量。结果发现,干预30天后,与空白组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力显著下降(P<0.01),大鼠海马区及脑皮层Nrf2、NQO1、HO-1的mRNA含量及蛋白表达量显著下降(P<0.01),而Keap1 mRNA含量及蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐和阿里红多糖高、中剂量组大鼠的学习记忆能力显著升高(P<0.01),大鼠海马区及脑皮层Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA含量及蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),Keap1 mRNA含量及蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。研究表明阿里红多糖通过调节Keap1的表达,促进Nrf2激活,诱导NQO1、HO-1的表达,发挥提高机体抗氧化损伤作用,从而改善AD大鼠学习记忆能力。

靶向探针追踪Aβ25-35的亚细胞定位并基于Nrf2通路探讨阿里红多糖对线粒体损伤的保护机制

用靶向探针追踪淀粉样蛋白(Aβ25-35)的亚细胞定位情况,同时基于Nrf2信号通路探讨阿里红多糖组分(FOAPs-a)和(FOAPs-b)对Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体损伤通路的保护作用机制。采用40μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,将PC12细胞分为空白组、模型组(加40μmol/L Aβ25-35)、阳性组(加50μmol/L盐酸多奈哌齐)、不同浓度的FOAPs-a和FOAPs-b干预组(各50、100、200μg/mL)。以靶向探针追踪Aβ25-35在各组PC12细胞中的亚细胞定位情况;通过试剂盒检测PC12细胞中活性氧自由基ROS的变化情况;Western blotting法测定细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达量以及和Nrf2通路相关的Nrf2、APK1和磷酸化的APK1蛋白的表达情况。结果发现,Aβ25-35处理PC12细胞会影响线粒体的完整性;在200μg/mL FOAPs-a/b预处理PC12细胞后,能够显著缓解Aβ25-35对线粒体的损伤,同时使Aβ25-35的亚细胞共定位减弱;与空白组比较,模型组细胞中ROS含量增加,与模型组比较,FOAPs-a及FOAPs-b干预组均能降低ROS的沉积,差异有统计学意义;Western blotting结果显示:与模型组比较FOAPs-a及FOAPs-b均能减少APK1的磷酸化水平,上调Nrf2的蛋白表达水平。总之Aβ25-35可进入到PC12细胞的线粒体中引起其损伤,阿里红多糖组分能够通过激活Nrf2信号通路显著缓解Aβ25-35对PC12细胞线粒体的损伤。

Box-Behnken响应面法优化阿里红总多糖水提醇沉工艺

分别采用单因素实验和Box-Behnken响应面法对阿里红总多糖水提醇沉工艺条件进行优化。以苯酚-硫酸法测定阿里红总多糖含量,在单因素实验基础上,选择多糖提取率为评价指标,以浸泡时间、提取时间、加水倍量作为考察因素,采用Box-Behnken响应面法优化水提工艺条件;选择多糖含量为评价指标,以醇沉浓度、醇沉时间、浓缩倍数为考察因素,采用Box-Behnken响应面法优化醇沉工艺条件;采用Sevage法对阿里红粗多糖进行脱蛋白。得到最佳水提工艺条件为:加水10倍,浸泡时间1.5 h,提取1.0 h,提取1次;最佳醇沉工艺条件为:浓缩倍数10倍,醇沉浓度80%,醇沉时间12 h;Sevage法脱蛋白,蛋白脱除率为42.4%,多糖保留率为61.4%。建立的阿里红总多糖提取纯化工艺简单可靠。

新疆维药阿里红发酵液多糖提取工艺研究

采用单因素和正交试验,以多糖回收率为指标,对阿里红发酵液菌丝体胞内和发酵液胞外多糖提取工艺进行优化。结果表明,阿里红菌丝体胞内多糖提取的最佳工艺为超声波功率90W、超声时间15min、热水浸提温度90℃、干菌丝体与蒸馏水质量比为1:20、浸提时间3h,每克干菌丝体可提取胞内多糖66.4mg。发酵液胞外多糖的最佳提取工艺为乙醇体积分数60%、沉淀温度4℃、发酵液pH值中性、沉淀时间24h,最高得率可达92.1%。

阿里红均一多糖对慢性支气管炎小鼠的治疗作用研究

目的研究阿里红均一多糖(homogenouspolysaccharide of Fomes officinalis Ames,FOP)FOPS 1-a和FOPS2-a对慢性支气管炎小鼠的治疗作用。方法采用气管内注射脂多糖的方法建立慢性支气管炎小鼠模型,分别给予地塞米松、阿里红总多糖、阿里红均一多糖(FOPS1-a和FOPS2-a)进行干预后,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察肺组织的形态变化,ELISA法检测血清中白介素4(interleukin-4,IL-4)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平。结果阿里红各给药组能使小鼠支气管黏膜炎症细胞浸润程度减轻、支气管黏膜上皮细胞脱落明显减轻,可抑制支气管黏膜上皮细胞增生,且阿里红各给药组可剂量依赖性的降低小鼠血清中IFN-γ、TNF-α的水平(P<0.05),IL-4水平明显升高(P<0.05),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿里红均一多糖对慢性支气管炎小鼠有一定的治疗改善作用。

维药阿里红多糖的提取及免疫活性研究

目的对新疆维药阿里红中的多糖进行提取,并研究阿里红粗多糖体外免疫活性。方法建立热水提取、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白的方法提取阿里红多糖(FoP),红外及紫外吸收光谱检测其性质,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量;采用MTT法检测不同浓度FoP在体外对小鼠脾细胞及腹腔巨嗜细胞增殖率的影响。结果 FoP产率为0.85%,多糖含量为68.81%;IR谱中,3423,2929,1651,1456,1130,1091,617cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;UV谱中,260,280nm处均无吸收峰;体外活性试验中,FoP对小鼠脾细胞、腹腔巨嗜细胞的生长具有明显的促进作用。结论 FoP具有一定的免疫调节活性。

阿里红多糖的提取工艺研究及抗肿瘤作用初探

目的：对阿里红多糖提取、分离条件进行优化并观察其抗肿瘤作用。方法：依次采用热水回流提取法、酸提取法、碱提取法三种方法进行提取,除蛋白后得多糖混合物,苯酚-硫酸法[1-4]测定阿里红多糖含量。将其作用于S180荷瘤小鼠,测定其对小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用。结果：采用热水回流提取阿里红多糖,该多糖能显著增强S180荷瘤小鼠免疫功能,抑制S180肿瘤的增长。结论：采用热水回流提取得阿里红多糖具有抗肿瘤作用。

不同产地阿里红多糖的含量比较研究

目的:测定不同产地阿里红样品中的多糖含量,为维药阿里红的应用提供科学依据。方法:以多糖含量为指标,采用葡萄糖作标准品,应用苯酚-硫酸比色法测定各产地阿里红中的多糖含量。结果:不同产地的阿里红多糖含量有一定的差异,其中伊犁阿里红样品中多糖含量最高,乌什县样品中多糖含量最低。结论:各地区生长环境对阿里红多糖的积累可能有一定影响。苯酚-硫酸比色法可以用来测定阿里红中多糖的含量。

阿里红多糖对APP/PS1双转基因小鼠神经损伤的保护作用

目的:探讨阿里红多糖对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠的神经保护作用。方法:将SPF级40只3月龄APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分成5组,分别为模型组、盐酸多奈哌齐0.65 mg/kg组,阿里红多糖50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg组;8只C57小鼠作为正常对照组。连续灌胃给药90 d。采用Morris水迷宫法测定小鼠空间学习记忆能力,通过比色法测定小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、AchE活性和MDA含量的变化;采用HE染色观察小鼠脑神经元形态和脑组织病理学变化;刚果红染色法和免疫印迹法检测各组小鼠脑组织中与神经元损伤相关的APP、Aβ1-40,以及TrkA的含量变化。结果:在水迷宫实验中,相比正常组小鼠,模型组小鼠的学习记忆能力均有所下降,海马组织内SOD、GSH-Px、AchE酶活性明显下降,MDA含量明显升高;与模型组相比,阿里红多糖各组小鼠活动量均增加,学习记忆能力得到不同程度的恢复,SOD、GSH-Px、AchE活性升高, MDA含量降低。在免疫组化染色和免疫印迹实验中,相比正常对照组小鼠,模型组小鼠(0.5%CMC)的脑组织中明显可见坏死的神经元,APP、Aβ1-40蛋白沉积数量增多,TrkA含量下降;而阿里红多糖给药各组神经元数量不同程度增多,体积变大,坏死情况得以不同程度改善,APP、Aβ1-40含量降低,TrkA含量升高。结论:天然药物阿里红多糖能明显改善阿尔茨海默病AD小鼠的学习记忆能力,促进神经元生长,对AD小鼠具有神经保护作用。