近红外光谱结合化学计量学快速测定阿里红饮片中齿孔酸含量

传统的阿里红中齿孔酸含量测定采用高效液相色谱法(HPLC),但该方法前处理复杂,操作繁琐。为了实现对中药阿里红饮片中齿孔酸含量的快速无损监测,尝试建立基于近红外光谱(NIR)的偏最小二乘(PLS)回归模型。用来预测阿里红中齿孔酸的含量,采用传统的HPLC方法对阿里红中的齿孔酸含量进行测定,其结果作为指标值。采集近红外数据后使用五种光谱变换方法对光谱数据进行预处理,即多元散射校正(MSC)、标准正态变化(SNV)、Savitzky-Golay平滑(7点)、一阶导数变换(FD)和二阶导数变换(SD)。通过竞争自适应重加权法(CARS)进行波长选择并对PLS模型进行优化,大大减少了光谱变量的数量,并显著提高了PLS模型的性能,尤其是SNV-CARS-PLS模型,仅占总光谱波长的5.53%,预测集的R2值为0.9823,预测均方根误差(RMSEP)值为0.1037%,残差预测偏差(RPD)值为5.34。通过t检验表明:该最优模型与传统HPLC法在预测阿里红中齿孔酸含量上没有显著差异。研究结果表明:近红外光谱结合竞争性自适应重加权算法对波长筛选后建立偏最小二乘回归模型对阿里红饮片中齿孔酸含量的无损检测可行。

阿里红化学成分及药理作用研究进展

阿里红为多孔菌科药用层孔菌的干燥菌体,具有良好的医用价值。本文总结了阿里红化学成分和药理学性质的研究概况,为阿里红的研究与开发提供参考依据。

阿里红多糖对运动性免疫抑制大鼠肠道菌群及免疫功能的影响

目的:探讨不同剂量阿里红多糖(Fomes officinalis Ames polysaccharides,FOP)对运动性免疫抑制(Exercise-induced immunosuppression,EIS)大鼠肠道菌群及免疫功能的保护作用。方法:50只7~8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(NC组)、运动训练组(Ex组)、运动训练+低剂量FOP组(LFOP组,40 mg/(kg·d))、运动训练+中剂量FOP组(MFOP组,60 mg/(kg·d))和运动训练+高剂量FOP组(HFOP组,80 mg/(kg·d))。Ex组和各剂量FOP组采用6周跑台训练构建EIS模型,LFOP、MFOP、HFOP组每次训练后灌胃FOP。干预结束后,酶联免疫吸附试验检测血清免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、白介素10(Interleukin-10,IL-10)、干扰素γ(Interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)水平及肠道短链脂肪酸含量;细胞分析仪检测血清CD4+、CD8+的数量;16S rDNA检测大鼠肠道菌群结构变化;Western blot检测结肠组织紧密连接蛋白(Zonula occludens-1,ZO-1)、封闭蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白4(Claudin4)蛋白表达。结果:与Ex组比较,LFOP、MFOP、HFOP组大鼠血清IgG、IgM、INF-γ、TNF-α、CD4^(+)和CD8^(+)极显著上升(P<0.01),血清IL-6、IL-10和LPS水平极显著降低(P<0.01);肠道短链脂肪酸含量和拟杆菌门、疣微菌门及乳杆菌属、拟杆菌属、毛螺菌属(未分类)、艾克曼菌属相对丰度极显著上升(P<0.01);结肠组织ZO-1、Occludin、Claudin4蛋白表达极显著上调(P<0.01)。此外,MFOP、HFOP组大鼠脾脏指数、胸腺指数、肠道菌群α多样性较Ex组极显著上升(P<0.01)。结论:FOP可能通过减轻炎症改善肠道菌群结构及活性,提高机体免疫功能,进而抑制EIS的发生发展。

药用层孔菌发酵液控油及收缩毛孔机理及功效研究

将药用层孔菌和乳酸菌进行双向发酵得到药用层孔菌发酵液,检测药用层孔菌发酵液和药用层孔菌水提液的活性成分含量,从分子、细胞、动物和人体等方面研究药用层孔菌发酵液在控油和收缩毛孔等方面的功效作用,结果表明,药用层孔菌发酵液具有更高的活性成分含量、可以减少ABTS自由基的生成、抑制炎症因子TNF-α和IL-6的表达、调控5α还原酶活性、减少皮肤油脂分泌、促进Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的表达、抑制金属蛋白酶-1(MMP-1)表达、具有收缩毛孔的趋势,具备成为具有控油和收缩毛孔功效的化妆品原料的潜力。

阿里红黄酮减轻低氧力竭运动大鼠脑组织损伤的机制研究

目的探讨阿里红黄酮(Fomes Officinalis Ames Flavone,FOF)对长期低氧力竭运动大鼠认知能力、神经炎症、小胶质细胞活化的影响。方法60只雄性大鼠,随机分为NC组、HE组、HE+LFOF组、HE+MFOF组和HE+HFOF组。HE组、HE+LFOF组、HE+MFOF组和HE+HFOF组大鼠接受连续6周力竭跑台运动,HE+LFOF组、HE+MFOF组和HE+HFOF组每次运动后30 min分别灌胃100、200和400 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿里红黄酮。干预后评价大鼠自主活动和空间记忆能力;检测脑组织炎症、氧化应激反应及小胶质细胞活化情况。结果与HE组比较,HE+LFOF组、HE+MFOF组和HE+HFOF组运动总距离、跨越格栅数量、平均游泳速度、穿越平台次数和平台所在象限停留时间、脑组织SOD和GSH-px浓度均显著上升(p<0.05),中心区域活动时间、逃避潜伏期(1d~5d)、脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α浓度和脑组织含水量、MDA、IL-1β、COX-2、Iba-1、GFAP蛋白表达均显著降低(p<0.05)。结论100~400 mg·kg^(-1)FOF可以抑制长期低氧力竭运动大鼠脑组织损伤并改善大鼠自主活动和空间记忆能力。

响应面法优化阿里红总三萜酸提取工艺及抗氧化活性研究

以6个不同产地的阿里红为研究对象,采用单因素实验结合响应面法对超声辅助提取阿里红总三萜酸(FOATTA)工艺进行优化,通过测定其对DPPH自由基清除率及Fe^(3+)还原能力考察其抗氧化活性。确定最佳提取工艺为:料液比1∶33(g∶mL)、乙醇体积分数85%、提取时间40 min,在此条件下,FOATTA得率为14.510%;在实验浓度范围内,随着浓度的增加,不同产地FOATTA对DPPH自由基清除能力和Fe^(3+)还原能力均呈上升趋势,表明其具有一定的抗氧化能力。优化后的超声辅助提取工艺可行性强,操作简便,为进一步研究和开发阿里红资源提供了参考。

阿里红总三萜酸的制备及其抗哮喘作用研究

目的以总三萜酸和3个三萜酸单体作为指标优化阿里红总三萜酸的制备工艺,并对总三萜酸的抗哮喘作用进行研究。方法以总三萜酸含量和转移率为指标,采用Hunter和星点设计-响应面法优化阿里红总三萜酸的大孔树脂富集纯化工艺,确定关键工艺参数,并以3个三萜酸成分含量对制备工艺进行验证。最后采用氯化乙酰胆碱和磷酸组织胺致喘豚鼠的动物模型,评估阿里红总三萜酸对哮喘豚鼠引喘潜伏期和血清中血栓素B_(2)(TXB_(2))和白三烯B_(4)(LTB_(4))含量的影响。结果最优工艺为:乙醇除杂浓度30.0%(23.0%~35.7%),乙醇解析浓度83.0%(72.0%~97.2%)和乙醇解析用量7.5倍(5~10倍);3批总三萜酸中齿孔酸含量依次为7.91%、6.56%、8.91%,去氢齿孔酸含量依次为4.95%、4.56%、6.02%,去氢硫色多孔菌酸含量依次为11.2%、11.0%、12.8%;与模型组相比,阿里红总三萜酸低、中和高剂量组均能显著延长哮喘豚鼠引喘潜伏期,中和高剂量组均可显著降低哮喘豚鼠血清中TXB_(2)和LTB_(4)含量。结论所建立的HPLC分析方法可准确测定阿里红总三萜酸中3个三萜酸的含量,优化的D101型大孔树脂富集纯化阿里红总三萜酸的工艺稳定可行,所得总三萜酸具有较好的抗哮喘活性。

阿里红化学成分的研究(Ⅰ)

目的研究药用真菌阿里红Fomesofficinalis的化学成分,为阐明其有效成分提供依据。方法利用硅胶柱色谱进行分离,根据化合物的光谱数据(IR、UV、MS、1H-NMR、13C-NMR)鉴定其结构,并研究其对凝血酶(thrombin)的抑制作用。结果从其氯仿洗物中分离得到7个三萜酸类化合物,分别鉴定为:3-酮基-去氢硫色多孔菌酸(3-keto-dehydrosulfurenic,Ⅰ)、去氢齿孔酸(dehydroeburicoicacid,Ⅱ)、齿孔酸(eburicoicacid,Ⅲ)、硫色多孔菌酸(sulphurenicacid,Ⅳ)、去氢硫色多孔菌酸(dehydrosulphurenicacid,Ⅴ)、去氢齿孔酮酸(dehydroeburiconicacid,Ⅵ)、变孔孔菌酸D(versisponicacidD,Ⅶ)。化合物Ⅶ对thrombin的抑制率为45.36%,而其他化合物抑制作用不明显。结论化合物Ⅴ、Ⅶ为首次从该属真菌中分离得到。除化合物Ⅶ在较高浓度对thrombin有一定的抑制作用外,其他化合物的抑制作用不明显。

新疆药用层孔菌补益作用的研究

本研究采用抗应激实验的方法 ,观察新疆药用层孔菌对小鼠抗疲劳能力以及耐常压缺氧能力的影响 ,比较给药组与对照组小鼠存活的时间 ,对测试结果的方差分析及多重比较表明 ,药用层孔菌具有很好的补益作用 ,能增加小鼠的抗应激能力 。

新疆维药阿里红液体发酵工艺条件研究

【目的】确定新疆稀有药用拟层孔菌阿里红(Fomes officinalis Ames)液体发酵生产胞外多糖最佳实验室工艺条件。【方法】采用单因素及正交试验对光照、培养基初始pH、装液量、培养温度、转速、培养方式等条件进行了研究。【结果】通过研究得出最佳发酵条件为:采用YM发酵培养基,起始pH 6.0,培养温度20℃,装液量75 mL/500 mL三角瓶、摇床转速180 r/min,在避光条件下,采用间隔时间为4 h的静置震荡交替培养。【结论】采用最佳发酵工艺,经12 d发酵,发酵液中菌丝体干重和胞外粗多糖可分别达1.36和1.60 mg/mL。

阿里红药材HPLC特征图谱研究

目的:建立阿里红三萜化合物高效液相色谱的特征图谱分析方法。方法:采用 Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱[50%A→90%A(0～70 min),90%A→95%A(70～75 min),然后保持15 min],流速0.8 mL·min^(-1),检测波长:242 nm,柱温25 ℃,记录时间90 min。结果:运用梯度洗脱能很好地分离阿里红中6个三萜类成分去氢硫色多孔菌酸、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、变孔绚孔菌酸、去氢齿孔酸、去氢齿孔酮酸和阿里红酸 A,不同地区收集的10批样品具有基本相同的色谱峰,其中12个峰为各样品共有,并对主要色谱峰进行了初步归属。结论:阿里红药材特征图谱的构建,为其质量控制提供了依据。

基于星点设计法的阿里红总三萜酸提取研究

目的优化提取阿里红总三萜酸工艺参数。方法以提取时间、溶剂用量、溶剂体积分数为自变量,以阿里红总三萜酸得率为评价指标,对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合,采用SAS Deployment Manager 9.3数据处理系统对工艺参数进行预测分析和优化。结果最优提取工艺确定为:提取2次,加13倍量91%乙醇,每次提取145 min。结论星点设计法优化阿里红总三萜酸的提取工艺,方法简便,精密度高,可预测性较优。

阿里红水提物对家兔离体小肠平滑肌收缩性的影响

为研究不同质量浓度的阿里红水提物对家兔离体小肠平滑肌收缩活动的影响,制备家兔离体十二指肠、回肠肠段标本,灌流给药后分别记录低、中、高质量浓度组阿里红水提物作用下小肠平滑肌收缩频率与收缩幅度的变化。结果表明,阿里红水提物低、中、高质量浓度组均能抑制家兔小肠平滑肌的收缩活动,并呈浓度依赖效应,高质量浓度组有极显著的抑制作用(P<0.01),说明阿里红有抑制小肠平滑肌收缩的作用。

维药阿里红多糖对运动疲劳小鼠Th1/Th2平衡及Foxp3 Scurfin蛋白表达调控研究

目的研究维药阿里红多糖对运动疲劳小鼠Th1/Th2平衡、Foxp3 mRNA及Foxp3 Scurfin蛋白表达调控作用。方法采用递增负荷运动制备小鼠运动疲劳模型,给予不同浓度阿里红多糖,观察阿里红多糖对各组小鼠Th1/Th2平衡及Foxp3 Scurfin蛋白表达的影响。结果阿里红多糖可有效调节运动疲劳小鼠血清Th1/Th2相关细胞因子水平,维持T淋巴细胞免疫平衡,显著提高运动疲劳小鼠脾脏Foxp 3 mRNA表达量及Foxp3 Scurfin蛋白表达水平。结论维药阿里红多糖多糖有显著的抗疲劳、增强免疫作用。

维药阿里红多糖对运动性免疫抑制改善的作用机制研究

目的:探讨维药阿里红多糖(Fo P)的抗运动疲劳及运动免疫抑制作用,为维药阿里红作为天然抗氧化剂及免疫调节剂的开发利用提供实验依据。方法:通过递增负荷跑台运动建立长期运动疲劳及运动免疫抑制模型,不同剂量Fo P作用于实验动物,将实验动物随机分为阳性对照组、阴性对照组、低剂量Fo P(20 mg·kg-1)+运动组、中剂量Fo P(40 mg·kg-1)+运动组、高剂量Fo P(80 mg·kg-1)+运动组,每周灌胃6天,共8周,灌胃期间进行递增负荷跑台运动。8周后处死取材,试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、血红蛋白(HB)、肌酸激酶(CK)水平,RT-PCR检测IL-4m RNA、INF-γm RNA相对表达量。结果:与阳性对照组比较,Fo P可以显著提高小鼠HB水平,Fo P各剂量组血清CK水平出现显著下降;与阳性对照组比较,Fo P组可显著消除MDA,Fo P各剂量组间无显著差异;Fo P各剂量组及阴性对照组血清SOD含量显著高于阳性对照组;Fo P各剂量组IL-4 m RNA/INF-γm RNA比值基本处于平衡状态。结论:维药阿里红多糖可以有效促进机体疲劳恢复,加快自由基的清除,并显著改善机体的抗氧化能力及免疫状态。

新疆维药阿里红液体发酵培养基优化研究

阿里红多糖具有提高机体免疫能力、抗衰老等作用,广泛用于医药、保健品、食品添加剂等领域。研究利用新疆稀有药用拟层孔菌阿里红(Fomes officinalis Ames)野生菌株进行液体深层发酵生产胞外多糖,通过单因素及正交实验对种子和摇瓶发酵培养基的营养成分、配比浓度、生长因子及各因素的最佳组合等进行了筛选优化。根据菌丝体生长和胞外多糖产量情况,最终确定种子培养基:葡萄糖3%、蛋白胨1.5%、KH_2PO_40.3%、MgSO_4·7H_2O 0.1%、VB_1 0.1 mg/mL;发酵培养基:葡萄糖1%、麦芽浸粉0.3%、蛋白胨0.75%、酵母浸粉0.5%。经12 d发酵,每50 mL发酵液菌体干重和胞外粗多糖含量最高可达65.4和77.7 mg。

响应曲面法提取阿里红中总三萜酸成分

目的采用响应曲面法对阿里红中总三萜酸成分进行提取。方法在单因素试验基础上,利用响应曲面法中心组合设计,采用超声波辅助萃取法对阿里红中总三萜酸提取工艺参数进行优化分析,选择超声功率、超声时间和超声温度作为优化因素,研究不同因素水平对阿里红总三萜酸得率的影响。结果通过响应面分析得到总三萜酸提取的最优条件:超声功率245.2 W、提取时间34.3 min、提取温度50.0℃。结论总三萜酸类化合物提取的实测结果与响应曲面拟合所得方程的预测值符合良好。

阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)的保护作用及其作用机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型,将60只SPF级SD大鼠按体质量随机分别为假手术组、模型组、地塞米松组(DEX组)、阿里红多糖低剂量组(ALH-L组)、中剂量组(ALH-M组)和高剂量组(ALH-H组)。各给药组于造模前预防给药1周,其中DEX组灌胃给予地塞米松0.8 mg/(kg·d),ALH-L、M、H组分别灌胃给予阿里红多糖10、20、40 mg/(kg·d),而假手术组和模型组灌胃给予等量生理盐水。造模24 h后取材,NBT染色法观察各组大鼠心肌梗死面积;化学比色法测定血浆TNF-α、IL-1β、MDA含量和CK、LDH、SOD活性;Western blotting法检测心肌组织Bcl-2和caspase-3的表达量。结果与假手术组比较,模型组的心电图ST段、心脏梗死率、血浆CK、LDH活性,TNF-α、IL-1β、MDA含量和心肌组织caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),血浆SOD活性和心肌组织Bcl-2表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ALH-L、M、H组均明显降低心电图ST段/心脏梗死率、血浆CK、LDH活性,TNF-α、IL-1β、MDA含量和心肌组织caspase-3的表达量(P<0.05),升高血浆SOD活性和心肌组织Bcl-2表达量(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论阿里红多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与抗氧化、抗炎和抗凋亡作用有关。

阿里红多糖对大鼠脑缺血灌注损伤的保护及JAK/STAT信号通路的影响

目的:研究阿里红多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响及抗炎作用。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿里红多糖干预组,每组20只。除假手术组之外,其余各组均建立脑缺血再灌注损伤模型,术后阿里红多糖干预组给予40mg/(kg·d)阿里红多糖灌胃,而模型组与假手术组分别给予等量生理盐水灌胃,连续7d。对各组大鼠进行神经功能评分,ELISA检测血清IL-6、TNF-α与IL-10含量,Western blot检测脑组织JAK2和STAT3蛋白的表达,显微镜下观察各组大鼠脑组织神经元形态结构。结果:与模型组比较,阿里红多糖干预组大鼠在灌胃3d、7d后神经功能评分明显降低(P<0.05);与模型组比较,阿里红多糖干预组大鼠血清TNF-α、IL-6含量明显降低,IL-10含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,阿里红多糖干预组大鼠JAK2和STAT3蛋白表达水平明显降低(P<0.05);阿里红多糖干预组大鼠神经元病变程度得到明显改善。结论:阿里红多糖是通过抑制脑内JAK2/STAT3信号通路来减轻炎症反应,从而减弱脑缺血再灌注损伤。

阿里红多糖对氧自由基的清除作用

目的:研究阿里红多糖对氧自由基的清除作用。方法:采用现代生物化学发光技术,检测阿里红多糖对 O2、H2O2的清除作用及对多种活性氧的总和清除率。采用黄嘌呤氧化酶法及硫代巴比妥酸(TBA)法测定小鼠心、肝、肾、脾等组织中SOD的活性及MDA的含量。结果:在体外阿里红多糖可有效的清除O2,其IC50为3．866 ×10-6(g／ml);对H2O2的清除作用很弱,但能抑制人血嗜中性粒细胞“呼吸爆发”产生的多种自由基,IC50为1．668 ×10-3(g／ml);阿里多红糖(20、40、80 mg／kg)可明显增加小鼠心脏和肝脏中SOD的活性,其中剂量为40、80 mg／ kg的阿里红多糖可明显增加肝脏中SOD的活性,同时各给药组均可明显减少小鼠心脏、肝脏、肾脏和脾中MDA 的含量,与对照组相比较差异有统计学意义(P<0．05)。结论:阿里红多糖有一定的清除氧自由基作用。