由Fonsecaea monophora所致以假水疱为主要表现的着色芽生菌病1例

报告以假水疱为主要表现的着色芽生菌病1例。患者女性,77岁,左前臂红色斑块、结痂4年,其上见细小假水疱样皮损。组织病理见混合性炎细胞浸润及硬壳细胞。组织沙堡弱培养基28℃培养见棕黑色菌落,中央呈灰黑色,菌落生长慢。小培养见枝孢和喙枝孢型混合产孢。分子测序比对为F.monophora。给予口服伊曲康唑200 mg,1次/日,盐酸特比萘芬片250 mg,1次/日,4个月后改为口服伊曲康唑200 mg,1次/日,3个月,配合温热疗法,皮损基本痊愈,随访无复发。

Fonsecaea monophora黑素的提取及毒力分析

目的构建Fonsecaea monophora(F.monophora)小鼠足垫黑素接种模型,分析不同来源F.monophora黑素毒力差异,初步探讨F.monophora黑素毒力及毒力的影响因素。方法使用化学消化法及酸碱法提取F.monophora黑素,构建小鼠足垫黑素接种模型(分为PBS组、化学消化法组、酸碱法组、人工合成黑素组),测量小鼠足垫肿胀程度,HE染色观察炎症细胞浸润情况并进行半定量分析。结果化学消化法及酸碱法均成功提取F.monophora黑素,其中化学消化法保留了黑素在细胞壁的空间形态。化学消化法组小鼠足垫肿胀程度最强、持续时间最长、炎症反应最剧烈,注射后第1天有大量中性粒细胞及巨噬细胞聚集,注射后第7天见中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞浸润;酸碱法组可引起相似的炎症反应,但程度较化学消化法组轻;人工合成黑素组未引起明显足垫肿胀,见少量巨噬细胞,未见明显中性粒细胞及淋巴细胞浸润。结论化学消化法及酸碱法提取的F.monophora黑素可明显引起小鼠足垫的炎症反应,黑素复杂的空间结构与毒力相关。人工合成黑素无法模拟F.monophora的毒力作用;与酸碱法提取的黒素相比,化学消化法提取的黑素用于真菌黑素毒力研究具有优势。

Fonsecaea monophora致皮肤着色芽生菌病1例

报告重庆地区1例由Fonsecaea monophora感染引起的皮肤着色芽生菌病。患者,男,81岁,因左上臂内侧皮肤被铁片划伤后出现溃疡伴疼痛1年余到我院就诊。对患者皮损组织行组织病理学检查和真菌培养,将培养出的菌落做形态学和分子生物学鉴定。真菌培养获得菌落形态,小培养乳酸酚棉兰染色得到镜下特征形态,菌落形态:可见暗棕色和黑色菌落生长;镜下形态:可见枝孢型和喙枝孢型产孢;皮损处组织病理学检查结果:可见慢性肉芽肿样改变。ITS(internal transcribed spacer)区域测序鉴定结果为Fonsecaea monophora。根据实验室培养结果和临床资料分析确定该例为Fonsecaea monophora感染引起的着色芽生菌病。口服伊曲康唑200 mg,2次/日,联合药物涂抹和光动力学治疗有效。

Fonsecaea monophora色素毒力性研究

目的探讨黑色素是否为Fonsecaea monophora的一个重要毒力因子。方法从Fonsecaea monophora的分生孢子突变株(CBS122845)传代接种产生白色突变株(CBS 125149)。透射电子显微镜(TEM)下观察到黑色素是位于分生孢子细胞壁表面上的电子致密颗粒。通过碱-酸法提取来自两个不同菌株的细胞壁色素颗粒。建立不同菌株或色素颗粒与活化巨噬细胞(RAW264.7)共培养体系,通过实时荧光相对定量PCR检测i-NOS基因的表达,格里斯法检测一氧化氮(NO)的表达结果,ELISA检测IL-12、TNF-α、IL-10的表达结果。结果色素型分生孢子和其色素颗粒能够降低巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(I-NOS)基因的表达和抑制一氧化氮的合成(P<0.05)。提高Th2细胞因子表达,同时抑制Th1细胞因子表达(P<0.05)。结论黑色素可能是Fonsecaea monophora逃避巨噬细胞对其氧化应激的重要机制。同时黑色素下调Th1免疫应答,可能利于真菌的持续感染。

首次报道中国北方Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病1例及其相关实验研究

目的首次报道中国北方1例由Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病。方法患者男性,58岁,主因＂右腕部皮损伴瘙痒8-9a＂就诊。对皮损脓液直接镜检,皮损组织病理检查,真菌培养,并对培养获得菌株进行形态学,分子生物学鉴定等实验室研究。结果脓液直接镜检可见多个圆形、厚壁、棕色硬壳细胞,皮损组织病理表现为慢性肉芽肿样改变,并可见硬壳小体。真菌培养可见暗棕色,橄榄色至黑色菌落生长,生长速度较慢,镜下可见枝孢型和喙枝孢型产孢。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。依据临床及实验室检查确诊该例为Fonsecaea monophora所致的着色芽生菌病。口服伊曲康唑200mg,1次/d;特比萘芬250mg,1次/d。治疗3个月后,皮损消退痊愈。结论 Fonsecaea monophora感染也可见于我国北方地区的着色芽生菌病患者,而ITS区序列分析是该菌种鉴定的重要手段,伊曲康唑联合特比萘芬治疗本例患者显示较好疗效。

Fonsecaea monophora所致皮肤着色芽生菌病3例病原学鉴定及临床分析

目的对3例Fonsecaea monophora所致皮肤着色芽生菌病进行病原学鉴定及临床分析。方法分析3例患者的临床特点。取患者皮损脓液直接镜检，皮损组织病理学检查及真菌培养。提取病原菌DNA，利用引物ITS4和ITS5进行rDNAITS区序列的PCR扩增，扩增产物测序后在GenBank核酸数据库及CBS数据库中进行同源性比对。结果皮损组织病理表现为慢性肉芽肿样改变，并可见硬壳小体。真菌培养可见暗棕色、橄榄色至黑色菌落生长，生长速度较慢，镜下可见枝孢型和喙枝孢型产孢。温度实验37℃生长，38℃不生长。0．01％，0．05％和0．1％放线菌酮均能耐受。经序列分析与GenBank及CBS数据库中Fonsecaea monophora的ITS区进行同源性比对，其同源性高。结合3例患者组织病理、真菌学特征及rDNAITS区序列分析将病原菌鉴定为Fonsecaea monophora。确诊后经口服伊曲康唑200mg，2次／d，6～8周后以200mg，1次／d维持治疗，或特比萘芬250mg，1次／d。治疗3个月后，皮损逐渐消退。结论Fonsecaea monophora与裴氏着色霉相似，可引起皮肤着色性芽生菌病，可通过分子生物学方法鉴别，口服伊曲康唑或特比萘芬治疗有效。

Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病

报告1例云贵高原地区由Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病。患者男,38岁,农民。左小腿异物刺伤后皮肤出现丘疹、溃疡、增生伴疼痒8年。皮肤科检查:左小腿踝部至膝关节之间见大片界限清楚的红褐色斑块,边缘隆起,表面凹凸不平,呈肉芽肿样或疣状增生,并有溃疡、瘢痕形成或黄色厚痂覆盖,痂皮下有脓性或血性分泌物渗出,味腥臭。皮损组织病理:表皮假上皮瘤样增生,可见慢性肉芽肿样改变,真皮内大量中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞和组织细胞混合浸润,形成微脓肿,PAS染色其内可见成簇棕色厚壁孢子。取真菌培养菌落聚合酶链反应(PCR)扩增及r DNA ITS区测序鉴定为Fonsecaea monophora。诊断:Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病。

Fonsecaea monophora对巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和TNF-α表达的影响

目的探讨F.monophora对巨噬细胞模式识别受体TLR2、TLR4及Dectin-1的表达及介导炎症因子TNF-α分泌的影响。方法 F.monophora分生孢子突变株(色素株,CBS122845)及白化突变株(CBS125149)菌液分别与小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,RAW264.7巨噬细胞作为阴性对照。采用Real Time PCR检测各组TLR2、TLR4、Dectin-1和下游信号分子MyD88、NF-κB mRNA的表达情况,流式细胞术检测TLR2、TLR4、Dectin-1蛋白的表达水平,ELISA法检测培养上清中TNF-α因子的分泌情况。结果与对照组比较,CBS122845和CBS125149组中巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达量均升高;与CBS125149比较,CBS122845组中TLR2的mRNA和蛋白的表达量无明显变化,而TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白的表达量升高更明显;与对照组比较,CBS122845组培养上清TNF-α因子的分泌量明显减低,CBS125149组TNF-α因子的分泌量明显升高。结论 TLR2、TLR4、Dectin-1这三个模式识别受体可能共同参与巨噬细胞对F.monophora的识别过程,并可激活下游信号分子MyD88和NF-κB;且CBS122845可以通过抑制TNF-α分泌来抑制炎症反应,维持菌体在巨噬细胞中的长期生存和繁殖。

Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病1例及其相关实验研究

目的报道1例由Fonsecaea monophora所致的着色芽生菌病。方法患者女,60岁,主因左手背皮损1 a余就诊,取皮损痂屑进行真菌直接镜检和培养,取皮损组织进行组织病理学检查和真菌培养。对培养获得菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行药物敏感性检测。结果真菌直接镜检阳性,可见较多圆形、厚壁、棕色的硬壳细胞。组织病理学显示为慢性肉芽肿样改变;HE和PAS染色均可见到圆形、厚壁、棕色的硬壳细胞。真菌培养阳性,菌落生长缓慢,呈橄榄色到黑色。小培养及扫描电镜检查可见枝孢型和喙枝孢型产孢,分生孢子单细胞性,呈椭圆形或卵圆形。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。药敏试验显示伊曲康唑对F.monophora的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为1.0μg/mL,特比萘芬的MIC为0.015 6μg/mL。给予患者口服特比萘芬250 mg/d治疗,皮损缓慢好转;6周后加服伊曲康唑200 mg/d治疗,14周后皮损消退呈瘢痕化修复。结论依据临床及实验室检查确诊该病例为Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病,伊曲康唑联合特比萘芬治疗本病例显示较好疗效。

Fonsecaea monophora多聚酮合酶基因的扩增及敲除载体的构建

目的扩增Fonsecaea monophora中控制黑素合成的多聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)基因并测序,构建PKS基因敲除载体。方法扩增PKS基因,根据测序结果设计引物,从Fonsecaea monophora基因组DNA扩增PKS基因5’-同源臂和3’-同源臂,从质粒pBHt1中扩增潮霉素B抗性标记基因(hyg),最后将各片段插入载体PDHt/sk中。结果测序得到5 389bp大小的PKS基因序列,构建了PKS基因的敲除载体,用酶切及测序等方法鉴定载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora PKS基因敲除载体,为研究PKS基因及黑素的生物学功能奠定了良好的基础。

Fonsecaea monophora色素株促进巨噬细胞凋亡的研究

目的探讨Fonsecaea monophora(F.monophora)色素株对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响。方法将巨噬细胞分别与F.monophora色素株和白化株进行共培养,设置PBS对照组,Western blot检测PARP-1的表达;实时定量PCR检测各组中BCL-2、BAX的表达;Annexin V FITC荧光染色检测凋亡。结果孢子与巨噬细胞共培养后,F.monophora色素株较白化株贴壁的巨噬细胞明显减少,并且能明显切割PARP-1,下调BCL-2/BAX表达的比值,上调Annexin V FITC的阳性细胞数量。结论F.monophora色素株可能通过促进巨噬细胞凋亡,进而抵抗巨噬细胞的免疫杀伤作用;而白化株不能明显促使巨噬细胞的凋亡。

Fonsecaea monophora所致海南渔民着色芽生菌病1例

患者,男,80岁,渔民,捕鱼时右手腕关节擦伤后出现棕褐色结节11年。组织病理检查:慢性肉芽肿样改变,HE和PAS染色均可见到圆形、厚壁、棕色的硬壳小体。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。诊断为着色芽生菌病,予抗真菌联合治疗(伊曲康唑0.2 g,1次/d,特比萘芬0.25 g,1次/d),治疗4个月后患者疣状斑块增生明显好转,随访中。

Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体的构建

目的改造pFC332质粒,简化实验流程,构建Fonsecaea monophora PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体。方法设计引物PCR扩增pFC334质粒上的gRNA骨架,获得已经插入AarⅠ酶切位点的gRNA骨架片段后,使用PstI和MerI酶线性化pFC334载体,构建pFC334-AarⅠ载体,使用MreⅠ和BglⅡ酶对其和pFC332质粒进行双酶切,连接后获得pFC332-gRNA-AarⅠ载体,设计gRNA,最后将各片段插入到载体中。结果测序得到16533bp大小的改造后的pFC332-gRNA-AarⅠ质粒,构建了PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体,通过PCR,酶切以及测序的方法确定敲除载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体,为研究PKS1基因及DHN-黑素在Fonsecaea monophora的生物学功能奠定了良好的基础。

Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病1例

患者,男,63岁,因“左手腕结节斑块半个月”为主诉就诊我科门诊。左手腕肥厚性的肉色斑块,结节,表面疣状增生,病理活检见真皮及多核巨细胞胞浆内褐色厚壁圆形硬壳小体。PAS染色(+),真菌培养见暗棕至黑色菌落生长;经测序,最终确诊为Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病。予口服伊曲康唑治疗,但由于患者原发矽肺症状加重,后因矽肺引发并发症死亡。

Fonsecaea monophora色素对人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响

目的探究Fonsecaea monophora(F. monophora)色素对THP-1来源的人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响。方法将THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞,分别与F. monophora的标准株、色素株和白化株进行共培养,细胞免疫荧光检测细胞膜表面分子CD14和CD68的表达;定量PCR检测各组中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β的表达。结果 THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞后,膜表面分子表达由CD14转变为CD68。与F. monophora共培养后,标准株上调IL-6、IL-10和TGF-β的表达(P均<0.05),色素株上调IL-6和TGF-β的表达(P均<0.05),白化株上调IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的表达(P均<0.05);白化株较标准株能上调IL-1β的表达(P <0.05),标准株较色素株和白化株能上调IL-10和TGF-β的表达(P均<0.05)。结论 F. monophora标准株能促使人巨噬细胞往抗炎状态发展,白化株能促使人巨噬细胞往促炎状态发展,色素株则使人巨噬细胞处于促炎和抗炎的平衡状态,F. monophora色素可能会导致宿主炎症状态紊乱。

Fonsecaea monophora黑素的理化性质及其合成途径的分析研究

目的探讨Fonsecaea monophora黑素的理化性质及其合成途径。方法通过化学分析、紫外光谱、红外光谱和电子顺磁共振波谱等明确F.monophora黑素的理化性质;通过比对F.monophora菌株在基础培养基(马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基、L-DOPA PDA培养基)和含黑素抑制剂培养基(DOPA黑素抑制剂培养基、DHN黑素抑制剂培养基)的菌落生长情况,采用BioTek酶标仪EON定量分析其黑素合成,以明确F.monophora的黑素合成途径。结果 F.monophora黑素与合成L-DOPA黑素的理化性质相似;菌株在含L-DOPA培养基较PDA培养基产生更多的黑素,且在含DOPA黑素抑制剂叠氮化钠及DHN黑素抑制剂苯肽、三环唑培养基中其黑素合成均明显降低。结论 F.monophora黑素主要为LDOPA黑素,可能共同存在DOPA黑素和DHN黑素合成途径。

Fonsecaea monophora致着色芽生菌病1例

患者男,79岁,右手前臂内侧局部红丘疹伴疣状斑块10余年。皮损处脓液直接镜检可见棕色厚壁硬壳小体,组织病理PAS染色见棕色、圆形、厚壁硬壳小体,真菌培养生长速度较慢,可见暗棕色,橄榄色至黑色菌落生长,镜下可见枝孢型和喙枝孢型分生孢子梗。扩增真菌rDNA的ITS区得到606bp的片段,经序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。诊断:Fonsecaea monophora致着色芽生菌病。

Fonsecaea monophora致着色芽生菌病一例报道并文献复习

目的利用分子生物学方法鉴定1例Fonsecaea monophora致着色芽生菌病(CBM),观察伊曲康唑联合特比萘芬治疗的效果。方法回顾性分析2015-03-22广东省人民医院皮肤科收治的1例Fonsecaea monophora致CBM患者的临床资料。观察真菌培养、镜检、病理检查、DNA测序、体外药敏试验情况以及口服伊曲康唑联合特比萘芬治疗情况。复习相关文献并进行讨论。结果患者左手虎口部位创伤后引发疣状增生斑块长达11年。沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)上可见暗棕色、橄榄色至黑色菌落,镜下可见枝孢型和喙枝孢型分生孢子,病理结果显示可见棕色厚壁孢子。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora,结合临床特征及实验室检查确诊为Fonsecaea monophora致CBM,体外抗真菌药敏结果提示该Fonsecaea monophora菌株对伊曲康唑和特比萘芬敏感。口服伊曲康唑(200mg/d)联合特比萘芬(250 mg/d),共治疗9个月,病情痊愈,随访6个月未见复发。治疗过程中全程检测肝、肾功能,未发生异常。结论伊曲康唑联合特比萘芬成功治愈1例Fonsecaea monophora致CBM,并取得满意的治疗效果。

Fonsecaea monophora致着色芽生菌病1例

报道1例由Fonsecaea monophora所致的着色芽生菌病。患者男,72岁,因右肩部斑块20余年就诊,取皮损痂皮进行真菌镜检及培养,皮损组织做病理学检查,并对分离的菌株进行形态学和分子生物学鉴定。真菌直接镜检及组织病理HE染色均可见厚壁、棕色的硬壳小体。真菌培养可见黑褐色,绒毛状菌落生长。小培养可见枝孢型和喙枝孢型产孢,分生孢子单细胞性。ITS区序列分析鉴定为Fonsecaea monophora。给予特比萘芬250mg/d口服治疗,7个月后皮损痊愈。

伊曲康唑治疗Fonsecaea monophora所致着色芽生菌病1例

患者男,64岁,左前臂伸侧反复斑块3个月。皮肤科情况:左前臂伸侧散在暗红色疣状斑块,表面粗糙、痂皮覆盖,无破溃流脓;皮疹间可见切口瘢痕形成。皮损组织病理示:表皮内可见中性粒细胞微脓肿,真皮炎细胞混合性浸润,可见多核巨细胞及棕褐色圆形小体。真菌培养可见圆形棕褐色菌落,经ITS扩增测序鉴定为Fonsecaea monophora,诊断为着色芽生菌病。治疗予口服伊曲康唑,辅以外用萘替芬乳膏,用药后皮疹逐渐好转,停药3个月余未见复发。