口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。

O型口蹄疫抗体金标试纸盒检测免疫动物抗体效价与攻毒保护关系

本研究目的在于用O型口蹄疫金标试纸条研究免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的对应关系以及免疫牛抗体消长规律。用金标试纸条检测了口蹄疫O型疫苗质量标准规定的牛、羊和猪免疫和攻毒血清抗体效价及不同免疫程序的牛血清效价。结果显示,当牛、猪和羊免疫血清稀释≥1∶8时,试纸条是阳性结果,表示有99%的被免疫动物属于抗体水平保护范围;被检测血清稀释≤1∶2时,是阴性结果,表示被免疫动物抗体水平属于不保护范围;血清稀释1∶2～1∶8时,是阳性结果,表示有50%的被免疫动物属于抗体水平保护范围。牛在首次免疫8周后加强免疫可以获得良好的保护率和保护时间。通过本试验确定了金标试纸条检测免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的关系及牛加强免疫最佳的时间。

口蹄疫抗体免疫金标快速检测试纸法的建立

应用免疫学原理与胶体金层析技术,采用双抗原夹心ELISA建立了检测口蹄疫(O型)抗体水平的“口蹄疫抗体(O型)免疫胶体金快速检测试纸法”。应用该法与“口蹄疫正向间接血凝抗原法”对300份猪、鸡、鸭、牛、羊等血液或血清进行口蹄疫抗体水平检测试验,符合率达100%。试验结果显示,该法与间接血凝法一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积口蹄疫抗体普查。

O型口蹄疫单克隆抗体6H4株金标试纸条的制备

以制备的O型口蹄疫单克隆抗体为基础,结合免疫金技术,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,对6H4单克隆抗体进行标记,制备了该单克隆抗体的金标试纸条.研究结果表明,6H4单克隆抗体在pH 8.64下的稳定点为12 mg/L,可制备成金标记抗体及其反应膜.

胶体金免疫层析试纸条快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒含量方法的建立

采用胶体金为标记物制备了快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫层析试纸条,拟合检测曲线,用金标分析仪进行定量检测。应用实验室与田间的样品检测证实其有较好的敏感性和特异性。对Asia 1型FM—DV抗原定量检测可以在15 min内完成,灵敏度为0.78μg·mL^(-1),线性范围在0.78~7.84μg·mL^(-1);变异系数在0.2%~5%;回收率在91%~102%,证明定量检测、准确度高。结果表明,本研究建立的定量检测Asia 1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法能简便、廉价、快速、灵敏、特异、准确地定量检测样品中的Asia 1型口蹄疫病毒。

O、A、Asia 1型口蹄疫病毒胶体金定量检测免疫层析方法的建立

旨在建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗原血清型的快速分型和定量的检测方法,利用双抗体夹心法,将口蹄疫病毒的兔抗及豚鼠抗体作为标记胶体金与NC膜检测带的原料,分别制备出检测O、A、Asia 1血清型的3种层析试纸卡。通过对标定的抗原标准品146S检测,拟合出定量标准曲线。免疫层析方法的质量验证通过特异性、敏感性、重复性及与蔗糖密度梯度法(sucrose density gradient, SDG)的相关性进行评价。结果显示:建立的快速定量检测方法,3种血清型口蹄疫病毒间无交叉反应,同时与其他非口蹄疫病毒,如塞内卡病毒A型(SVA)、猪水疱病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)无非特异反应;敏感性研究,对O、A、Asia 1型病毒的最低检出量分别为0.567、0.693、0.219μg·mL^(-1),拟合的3条标准曲线的线性相关系数R~2>0.97,新建立方法与蔗糖密度梯度法检测结果的相关系数均>0.9, 3种层析试纸卡的变异系数均小于10%。综上表明,建立的口蹄疫O、A、Asia1型病毒胶体金免疫层析定量检测试纸卡方法,可以用于口蹄疫病毒抗原快速鉴别、血清分型与146S定量检测。

胶体金免疫层析技术在兽医临床中的应用

胶体金免疫层析技术(GICA)是将胶体金作为示踪物应用于硝酸纤维素膜上,在特定位置发生抗原抗体特异性反应信号的一种快速检测技术,以简便快速、成本低廉、安全无毒、特异性强等优点广泛应用于兽医临床检测。论文首先总结了GICA在动物疾病诊断和动物源性食品安全检验中的应用,然后综述了GICA新型标记材料和新技术的结合与应用,最后展望了GICA在兽医临床应用的发展趋势。

EV71-IgM检测在手足口病诊断中的价值

目的:回顾性分析评价应用胶体法检测EV71-Ig M抗体与RT-PCR法检测EV71病毒在手足口病重症病例早期识别中的作用。方法:收治手足口病疑似病例1 252例,分别采用血清胶体金法检测EV71肠道病毒Ig M抗体,RT-PCR法检测患者大便中肠道病毒及肠道病毒71-RNA。结果:胶体金法检测EV71阳性率28.67%;RT-PCR法检测肠道病毒阳性率81.15%,EV71阳性率44.89%。其中金标法检测阳性5例,RT-PCR法检测阴性。结论:EV71胶体金法可作为EV71感染的初筛早期快检,在临床手足口病重症病例早期识别及治疗中具有重要意义。

IgM胶体金法与RT-PCR法对手足口病诊断及随访的价值分析

目的分析IgM胶体金法与RT-PCR法用于手足口病诊断和随访的效果,为开展手足口病防治工作提供科学依据。方法本研究纳入了我院从2017年5月1日至2019年6月30日所有疑似手足口患者共计775例,其中363例患者分别采集发病3日内的咽拭子和末梢血标本进行手足口病毒核酸和IgM抗体检测,阳性患者于发病后两周和四周分别随访检测病毒核酸和IgM抗体。结果两种诊断方法用于是否感染手足口病毒,结果具有一致性,但一致性一般(kappa=0.398,P<0.001)。McNemar-Bowker检验结果 P<0.001,提示两种方法判读的结果差异有统计学意义。随着时间的延长,手足口病毒核酸阳性率呈明显的下降趋势。随访两周时,CA16阳性组、EV71阳性组、双阳性组的核酸阳性率分别为31.21%、6.25%和100.00%,随访4周时其阳性率分别为3.96%、1.25%、0。IgM抗体转阴时间更长。手足口患者随访两周CA16抗体组、EV71组、双阳组抗体阳性率分别为88.89%、57.89%、96.32%,随访4周时其阳性率分别为57.89%、38.60%和85.62%。结论胶体金法有其局限性,手足口病的诊断和随访过程中应结合核酸检测方法。手足口患儿的排毒时间会持续四周以上,建议重新制定患者隔离时间,并在隔离解除前进行病毒核酸检测。

胶体金免疫法对手足口病分型检测的研究

目的建立胶体金免疫法(CGIA)对手足口病(HFMD)分型的检测方法。方法用双抗体夹心检测原理建立CGIA对HFMD分型检测方法 ,分别检测136例HFMD患儿和30例健康儿童粪便中柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠病毒71型(EV71),以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)为金标准,评价CGIA检测性能。结果 CGIA与RT-PCR检测136例HFMD患儿粪便EV71阳性率分别为27.2%和28.6%;CGIA与RT-PCR检测136例手足口病患儿粪便CA16阳性率分别为33.8%和35.3%;以RT-PCR为金标准,CGIA检测手足口病患儿粪便EV71的敏感性89.7%,特异性89.7%,阳性预测值94.5%,阴性预测值95.9%,准确度95.5%;CGIA检测手足口病患儿粪便CA16的敏感性85.4%,特异性94.3%,阳性预测值89.1%,阴性预测值92.2%,准确度91.1%。结论 CGIA法操作简单、方便、快速,特异性和敏感性好,为HFMD病原学早期分型诊断提供了一个有效的检测手段。

肠道EV71病毒检测在临床中的运用

目的探讨血清肠道EV71病毒检测在临床中的运用。方法选取100例2016年6月—2017年6月本院收治的手足口病患儿为研究样本,用胶体金免疫层析法检测肠道EV71病毒特异性的Ig M。结果女性患儿的EV71-Ig M阳性检出率为35.6%,男性患儿为43.2%,两组间阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。5岁以上及小于1岁患儿的阳性率最低,分别为23.4%和24.6%;3~4岁和4~5岁患儿EV71-Ig M阳性检出率较高,分别为54.9%和42.5%;其次为2~3岁年龄段患儿,阳性检出率为34.5%。结论血清肠道EV71病毒抗体的检测特点为操作简便,用时短。

A型口蹄疫病毒抗体金标检测试纸条的研制

为快速、便捷地检测A型口蹄疫病毒(FMDV)抗体,将胶体金颗粒与口蹄疫A型疫苗株146S病毒粒子(FMDV-146S)结合,作为金标抗原(g FMDV-146S),与其抗体(FMDV-146S-Ab)分别作为检测带(T带)与质控带(C带)组装试纸条,通过检测已知各型FMDV阴性、阳性血清,水疱性口炎(VS)、猪水泡病(SVD)和羊传染性脓疱(CE)的阳性血清,验证其敏感性、特异性与稳定性;同时平行用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法进行对比检验。结果显示,该试纸条检测抗体效价最低达1∶128;SVD、VS、CE阳性血清及FMDV阴性血清的检测结果均为阴性,A型FMDV阳性血清100%显阳性,O型和Asia 1型的FMDV阳性血清仅出现10%的阳性率;该试纸条于4℃保存10个月,不同批次间、同一批次内的重复性检测结果差异不显著(P>0.01);与LPB-ELISA检测结果的相关性良好,以此建立该试纸条的半定量比色卡。本试验制备的A型口蹄疫抗体金标检测试纸条具有较好的灵敏度、特异性、稳定性,能够准确评价A型口蹄疫疫苗的免疫效果。

检测口蹄疫病毒非结构蛋白3AB抗体的斑点免疫金渗滤法的建立

为建立一种能够区分口蹄疫疫苗免疫与野毒感染动物的快速检测方法,将纯化的口蹄疫病毒3AB非结构蛋白抗原包被在硝酸纤维素膜上,加入待检血清样品后,利用胶体金标记SPA显色。应用斑点免疫金渗滤技术(DIGFA)和ELISA方法同时对150份猪血清进行检测,结果DIGFA法的阳性率为6%(9/150),ELISA法的阳性率为5.3%(8/150),两者符合率达99.3%。DIGFA操作简单,耗时短,结果易于判断,且与口蹄疫免疫猪血清、猪细小病毒、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应。结果表明,该法适用于生猪和牛等口蹄疫病毒3AB抗体的快速检测。

胶体金免疫层析技术在感染性疾病诊断和食品卫生检测中的应用

胶体金免疫层析技术是一种新型的免疫学检测技术，具有敏感性和特异性高、操作便捷、可快速判读结果等特点，尤其适合基层医务人员使用和现场普查。该技术已被广泛应用于医药卫生与食品安全等领域，该文综述了其在感染性疾病诊断与食品卫生检测中的应用。

肠道病毒IgM抗体快速检测在手足口病护理管理中的应用

目的探讨肠道病毒Ig M快速检测提升手足口病护理管理质量的作用。方法选择温州医科大学附属第二医院2015年5月份符合手足口病诊断的治疗病例126例纳入本次研究,进行随机对照试验(RCT),分别设立非病原学快速诊断组(Ⅰ组,62例)和病原学快速诊断组(Ⅱ组,64例)。Ⅰ组不进行肠道病毒Ig M抗体检测,仅采集咽拭子及粪便标本送检PCR检测,统一分配病房,并采取手足口病常规护理。Ⅱ组同时进行肠道病毒Ig M抗体(胶体金法)和PCR检测,根据病原学不同分别归入相应隔离病房,并采取不同的护理模式。比较2组患儿病原学的差异,比较Ⅱ组Ig M抗体和PCR检测结果的差异。比较2组患儿住院时间的差异,并调查出院2周内再次感染的情况。结果 2组患儿病原学比较差异无统计学意义(P=0.927),Ⅱ组胶体金法与PCR法检测的对应准确率为98.4%。Ⅱ组患儿住院时间较Ⅰ组患儿时间缩短(P<0.001)。Ⅰ组再次感染例数为8例,而Ⅱ组则没有再次感染病例,差异有统计学意义(P<0.001)。结论胶体金法检测手足口病病毒Ig M的方法,可快速检测病原学,医护人员可据此分别隔离并进行相应的治疗和护理,提高治疗和护理的针对性,提升护理管理质量,缩短住院时间,同时可降低病房内的二次感染。

肠道病毒IgM抗体金标卡应用评价

目的评价市售肠道病毒71型、柯萨奇A16-IgM胶体金试剂在临床手足口病诊断方面的应用。方法收集临床诊断为手足病发病7 d内的患儿血清标本658份,对患儿进行流行病学调查,明确感染日期和病程,利用市售肠道病毒71型、柯萨奇A16-IgM胶体金试剂检测IgM。结果共采集标本658份,肠道病毒阳性78份,阳性率为11.85%,其中男性患儿41例,女性患儿37例,男、女之比为1.11∶1。56份柯萨奇A16型、肠道病毒71型均出现阳性反应,交叉阳性结果达到71.79%（56/78）。4月、6月发病率较高,分别为16.35%、15.85%。各年龄段中,1岁-组患儿发病率最高,为37.18%。发病3 d后IgM抗体检出率最高,为28.21%。结论本试剂敏感性偏低,特异性较差,不适合临床早期诊断手足口病病原。