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Cloning and Prokaryotic Expression of VP1 Gene of Foot-and-Mouth Disease Virus (FMDV) Type O 被引量:1
1
作者 付薇 陈磊 +5 位作者 熊毅 潘琼 王常伟 陈进喜 胡晓静 刘棋 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第5期55-58,154,共5页
According to the complete genome of foot-and-mouth disease virus(FMDV)type O,a pair of special primers was designed to amplify VP1 gene.The VP1 gene was amplified by RT-PCR and subsequently inserted into the expressio... According to the complete genome of foot-and-mouth disease virus(FMDV)type O,a pair of special primers was designed to amplify VP1 gene.The VP1 gene was amplified by RT-PCR and subsequently inserted into the expression vector pGEX-6p-1 and induced by IPTG.Then SDS-PAGE showed the expressed protein was 51 kD in molecular weight.Then the product was purified by GSTrap FF columns.The product was detected through Western-blot that showed the protein has antigenicity.It provided fundamental data and materials for further investigation on diagnosis method of FMDV. 展开更多
关键词 foot-and-mouth disease virus structural protein VP1 CLONING Expression
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Comparison of Three ELISA Kits for the Differentiation of Foot-and-mouth Disease Virus-infected from Vaccinated Animals 被引量:2
2
作者 Yi-mei CAO Zeng-jun LU Zai-xin LIU Qing-ge XIE 《中国病毒学》 CSCD 2007年第1期74-79,共6页
研究被执行验证工具包为 FMDV 的区别在中国开发了的 3 FMDV 3ABC-I-ELISA 感染并且种牛痘的动物。从天真、种牛痘的牛以及从被感染了的牛的 sera 的集合被商业诊断工具包对 FMDV 的 nonstructural 蛋白质(NSP ) 为抗体测试, Ceditest... 研究被执行验证工具包为 FMDV 的区别在中国开发了的 3 FMDV 3ABC-I-ELISA 感染并且种牛痘的动物。从天真、种牛痘的牛以及从被感染了的牛的 sera 的集合被商业诊断工具包对 FMDV 的 nonstructural 蛋白质(NSP ) 为抗体测试, Ceditest 吗?FMDV-NS (Ceditest?工具包) , UBI?FMDV NONSTRUCTURAL 蛋白质 ELISA 方向插入(UBI?工具包) 并且一个 FMDV 3ABC-I-ELISA 工具包在 Lanzhou 发展了兽医研究院。三个工具包的测试参数(敏感和特性) 被决定,并且从 FMD 3ABC-I-ELISA 工具包获得的结果与从二个外国工具包获得了那相比。结果显示巧合在 FMDV 3ABC-I-ELISA 和 Ceditest 之间评价吗?工具包 98.05% 是,并且在 FMDV 3ABC-I-ELISA 和 UBI 之间的巧合率?工具包是 94.4% ;两 Ceditest 的敏感?并且 FMDV 3ABC-I-ELISA 工具包是 100% 。然而, UBI 的敏感?工具包仅仅是 81.8% 。与从天真或种牛痘的非感染的动物的 sera,所有测试的特性超过了 90% 。关键词 Foot-and-mouth 疾病病毒(FMDV )- 非结构的蛋白质 3ABC - ELISA CLC 数字 S852.65 基础项目:国家鈥 ? 73 鈥 ? 研究工程(G199901190, 2005CB23201 ) ;国际原子能机构(国际原子能机构)(10697/R2 ) 展开更多
关键词 foot-and-mouth disease virus (FMDV) Non-structural protein 3ABC ELISA
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Molecular and Serological Epidemiology of Foot-and-Mouth Disease Virus in North Region of Cameroon
3
作者 Simon Jumbo Dickmu Julius Awah-Ndukum +9 位作者 Niba Tatanja Aziwo Silas Lendzele Sevidzem Mohamed Moctar Mouliom Mouiche Carla Bravo de Rueda Labib Bakkali Kassimi Abel Wade Rebecca Garabed Abdul-Dahiru El-Yuguda Luis Rodriguez Saka Saheed Baba 《Advances in Microbiology》 CAS 2022年第10期579-595,共17页
The serological prevalence of foot and mouth disease virus (FMDV) among the cattle population in the North region of Cameroon was determined using ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) serological tests for struc... The serological prevalence of foot and mouth disease virus (FMDV) among the cattle population in the North region of Cameroon was determined using ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assays) serological tests for structural as well as non-structural proteins. In these cattle, FMDV RNA was identified, amplified, sequenced and the sequences were used to construct a phylogenetic tree. A sedentary cattle population randomly selected from six veterinary centres in the North region was sampled twice, six months apart. High prevalence of FMDV antibody was recorded in the first (402/466 (85.84%)) and second (358/411 (86.90%)) sampling periods. There was no significant difference (P > 0.05) in prevalence of FMDV antibody between the two sampling periods. Goudali and Peulh breeds of cattle and animals of three to five years old were the most infected with FMDV and mostly in the months of May and August. A seroprevalence of 100% (n = 14) of FMDV against serotypes A and O was observed in sera from convalescent animals in the study area. FMDV antigen detection ELISA showed a prevalence of 18/37 (48.65%) for serotypes SAT1 (8.1%), SAT2 (35.1%), A (10.8%) and O (2.7%) among the clinically infected animals. There was no significant difference (P > 0.05) in prevalence of FMDV RNA between the sampling periods. A prevalence of FMDV RNA (17.5% (n = 120) and 16.7% (n = 240)) was observed among the sedentary animals that were sampled four to five months apart. FMDV RNA prevalence of 28/37 (75.6%) among clinically infected animals was also observed, thus confirming all the 12 outbreaks investigated. Sequence analysis of VP1 coding gene of the SAT2 serotype showed that it was homologous to the Libyan isolates (that caused epidemics in northern Africa in 2012) and also clustered with the serotypes isolated from both Nigeria and Sudan in 2007. 展开更多
关键词 foot-and-mouth disease SEROPREVALENCE Non-structural protein structural protein ELISA Sedentary Cattle North Cameroon
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上海市松江区猪口蹄疫病毒3ABC抗体血清学调查
4
作者 金一春 《福建畜牧兽医》 2024年第1期7-8,12,共3页
为摸清上海市松江区2020-2022年猪口蹄疫感染情况,采集有代表性的规模场和专业户的猪血清样品共1 505份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测,结果阳性样品32份,阳性率2.13%。规模场、专业户阳性率... 为摸清上海市松江区2020-2022年猪口蹄疫感染情况,采集有代表性的规模场和专业户的猪血清样品共1 505份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测,结果阳性样品32份,阳性率2.13%。规模场、专业户阳性率分别为1.16%、3.78%。 展开更多
关键词 口蹄疫 非结构蛋白 酶联免疫吸附试验
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采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA
5
作者 张志彬 张健 +3 位作者 贺明 高倍瑶 贾琪 张立春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期1-5,共5页
为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融... 为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。 展开更多
关键词 小干扰RNA(siRNA) 口蹄疫(FMD) 绿色荧光蛋白(GFP) 多血清型 3C基因
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口蹄疫病毒3ABC、3AB、3BC基因克隆、表达及其抗体消长规律的研究 被引量:7
6
作者 王宏伟 孙明 +5 位作者 田克恭 陈西钊 王传彬 许燕辉 赵新力 赵德明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1065-1070,共6页
成功克隆了FMDV太保毒株3ABC全基因片段,并将ABC、3AB、3BC片段插入pGEX-4T-1表达载体构建了重组表达质粒,经Western blotting 分析表明,表达的3ABC、3AB蛋白与FMDV阳性血清有反应性,表达的3BC蛋白反应性差。以纯化的3ABC、3AB表达蛋白... 成功克隆了FMDV太保毒株3ABC全基因片段,并将ABC、3AB、3BC片段插入pGEX-4T-1表达载体构建了重组表达质粒,经Western blotting 分析表明,表达的3ABC、3AB蛋白与FMDV阳性血清有反应性,表达的3BC蛋白反应性差。以纯化的3ABC、3AB表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法,对背景清楚的试验牛血清进行检测。结果3ABC、3AB表达蛋白与空白对照组(C组)、灭活疫苗反复免疫组(CI组)和部分免疫后攻毒组(I组)牛血清均不发生反应,与未免疫直接攻毒组(D组)和部分I组血清均发生反应;未免疫直接攻毒组3ABC、3AB表达蛋白抗体持续时间几乎相同,至少在90d以上;免疫后攻毒组3ABC比3AB表达蛋白抗体持续时间长,说明3ABC表达蛋白更适合用于FMDV感染动物的检疫。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3ABC基因 3AB基因 3BC基因 基因克隆 基因表达 抗体消长
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口蹄疫病毒结构蛋白基因vp1的表达与应用研究 被引量:11
7
作者 邢继兰 潘洁 +4 位作者 陈波 饶忠 尤永进 徐泉兴 刘惠莉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期299-302,共4页
体外克隆口蹄疫病毒vp1基因,构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,进行诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导5h后表达量达到最高,表达产物大小约为33Ku~40Ku,表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生... 体外克隆口蹄疫病毒vp1基因,构建重组表达载体pET28a-vp1。将此重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,进行诱导表达,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导5h后表达量达到最高,表达产物大小约为33Ku~40Ku,表达蛋白能与口蹄疫病毒阳性血清产生特异性免疫反应。经HPLC纯化后,以重组蛋白为抗原,建立检测VP1蛋白抗体的ELISA方法,检测猪牛血清样品,免疫抗体检测结果与口蹄疫液相阻断ELISA检测结果呈正相关,能反映出免疫抗体动态变化,对临床样品口蹄疫病毒血清抗体检测,两种方法有一定相关性,但不显著。所以以重组VP1蛋白为检测抗原的ELISA方法有望用于口蹄疫免疫抗体监测。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白 vp1基因表达
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口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建 被引量:8
8
作者 刘艳红 李炯 +3 位作者 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期606-610,共5页
以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMD... 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 衣壳蛋白基因 蛋白酶基因 重组逆转录病毒表达载体
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区分动物疫苗免疫与病毒感染的口蹄疫非结构蛋白3AB鉴别诊断试剂盒的研制 被引量:6
9
作者 陈波 尤永进 +8 位作者 潘洁 朱彩珠 饶钟 陈倍娟 吴永明 顾晓峰 游丕荣 徐泉兴 卢永干 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期52-57,共6页
以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA,适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片段为模板,经RT-PCR扩增得到3AB基因片段,与pET32a连接后,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,表达的重... 以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA,适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片段为模板,经RT-PCR扩增得到3AB基因片段,与pET32a连接后,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,表达的重组3AB蛋白,分子量约为50Ku,ELISA结果显示,重组3AB蛋白可用于猪、牛口蹄疫病毒感染与疫苗免疫抗体的鉴别诊断。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 表达 纯化 酶联免疫吸附试验
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牛、羊、猪人工感染口蹄疫病毒3ABC抗体的变化 被引量:14
10
作者 杨苏珍 卢曾军 +3 位作者 曹轶梅 李冬 刘在新 贾宁 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第5期22-26,共5页
利用口蹄疫病毒(FMDV)3ABC抗体间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种病毒牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的变化.实验表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48 h后全数发病,第3天即出现可疑的3ABC抗体,第5天检测到阳性的3... 利用口蹄疫病毒(FMDV)3ABC抗体间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种病毒牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的变化.实验表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48 h后全数发病,第3天即出现可疑的3ABC抗体,第5天检测到阳性的3ABC抗体,至第8天3ABC抗体全部为阳性;10头同居牛(分别与接种感染猪和羊同居)在同居第7天时未检出3ABC抗体,在同居第15天时,3ABC抗体阳性率仅为30%;肌肉接种病毒羊3ABC抗体产生时间与接种病毒牛一致.同居羊在同居后第8天开始产生3ABC抗体,至第15天时所有表现出临床症状的羊3ABC抗体全部为阳性.猪无论是肌肉注射感染还是同居感染,其3ABC抗体与临床症状均具有很好的对应关系;发病猪最早可于接种病毒后第7天检测到可疑的3ABC抗体,至第15天均为阳性.牛、羊和猪均存在隐性感染的情况,即未出现临床症状,但3ABC抗体为阳性. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3ABC抗体 人工感染
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一种实用的筛选病毒抗原表位方法的建立(英文) 被引量:5
11
作者 孙涛 陆苹 王欣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期255-259,共5页
采用基因分段克隆、表达结合蛋白质印迹 ,筛选到了口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC上高结合力、保守的感染相关线性表位 ,分别位于 3ABC蛋白上第 10 6~ 15 5和 15 6~ 190位氨基酸 .这两个表位可与感染不同血清型口蹄疫病毒动物康复血清反... 采用基因分段克隆、表达结合蛋白质印迹 ,筛选到了口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC上高结合力、保守的感染相关线性表位 ,分别位于 3ABC蛋白上第 10 6~ 15 5和 15 6~ 190位氨基酸 .这两个表位可与感染不同血清型口蹄疫病毒动物康复血清反应 ,但不与来自健康免疫动物和未接触病毒动物的血清发生反应 .实验表明 ,用基因工程表达的多肽筛选抗原表位的方法是可行的 . 展开更多
关键词 基因 克隆 表达 蛋白质印迹 口蹄疫病毒 非结构蛋白 血清型 表位 基因工程 抗原
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用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究 被引量:10
12
作者 朱彩珠 尤永进 +5 位作者 葛艳 陈波 饶忠 卢永干 徐泉兴 张强 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期14-16,共3页
采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV 3AB)多肽为抗原,A G蛋白 辣根过氧化物酶为酶结合物,过氧化氢 四甲基联苯胺为底物溶液,建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I ELISA),... 采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV 3AB)多肽为抗原,A G蛋白 辣根过氧化物酶为酶结合物,过氧化氢 四甲基联苯胺为底物溶液,建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I ELISA),即3AB ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测,确定了该I ELISA的阳性 阴性判定临界值。该检测方法比VIAA AGID法检出率高,尤其是采用A G蛋白酶结合物后操作更简便。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 间接ELISA
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口蹄疫病毒非结构蛋白3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测 被引量:7
13
作者 付元芳 卢曾军 +5 位作者 曹轶梅 郭建宏 张小丽 田美娜 刘在新 才学鹏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期790-795,共6页
【目的】口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测。【方法】利用原核表达系统表达了FMDV NSP 3A、3B和富含B细胞抗原位点序列的2C蛋白。利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘... 【目的】口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3A、3B和2C基因的表达及产物纯化与活性检测。【方法】利用原核表达系统表达了FMDV NSP 3A、3B和富含B细胞抗原位点序列的2C蛋白。利用高浓度尿素裂解包涵体,采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对2C蛋白进行复性。用金属鳌合亲合层析的方法对表达的FMDV NSP 3A、3B和2C进行纯化。采用ELISA方法对比检测了3种纯化蛋白在检测羊血清NSP抗体的效果。【结果】检测得知3A和3B为可溶性表达蛋白,2C以包涵体形式表达。通过Western-blot分析,表明纯化后蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。纯化的3A、3B和复性后的2C融合蛋白与3ABC抗原的检测结果具有很高的符合性。【结论】该研究为建立鉴别FMDV自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的酶联免疫电转移印迹技术(EITB)提供了所需的材料。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 酶联免疫电转移印迹技术(EITB)
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:6
14
作者 李永亮 田美娜 +4 位作者 卢曾军 杨苏珍 付元芳 曹轶梅 刘在新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期296-300,共5页
用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接EL... 用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接ELISA法筛选获得6株能稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、4B1、4D7、4E11、7B2、8B11。鉴定结果显示,4B1和4E11细胞分泌IgG1,其余4株细胞分泌IgG2b;纯化后6株腹水单抗的纯度达90%以上,对3B蛋白的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;6株单抗均不与FMDV结构蛋白VP1和3D非结构蛋白发生反应;间接免疫荧光试验证明所制备的单抗能够识别3B蛋白;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存6个月后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B蛋白 单克隆抗体
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口蹄疫病毒3D基因的克隆及其编码蛋白的结构和功能预测 被引量:4
15
作者 杜平 尚佑军 +2 位作者 贺延玉 孙晓林 马军武 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期20-25,共6页
采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及... 采用RT-PCR技术,对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的3D基因进行克隆,并对其序列进行比对,同时利用Ex-pasy等生物软件对3D蛋白的二级、三级结构及生物学特性进行预测和分析.结果表明:3D蛋白在口蹄疫各血清型间高度保守,分子中含有一个糖基化位点及多个酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸位点,并存在一个单股正链RNA病毒依赖RNA多聚酶的催化区;结构特点显示3D蛋白为口蹄疫病毒复制所需的多聚酶. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D基因 生物信息学 结构分析
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口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达 被引量:6
16
作者 尤永进 朱彩珠 +5 位作者 葛艳 陈波 张强 饶忠 徐泉兴 卢永干 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期155-158,共4页
口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PC... 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3ABC基因 基因克隆 基因表达 口蹄疫 鉴别诊断 RT-PCR
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伪狂犬病毒PK基因缺失转移载体的构建 被引量:2
17
作者 寇叙 龚倩 +3 位作者 张守峰 刘晔 李清竹 扈荣良 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期574-576,590,共4页
以伪狂犬病毒TK/gI缺失疫苗株为亲本株,提取病毒基因组DNA,用限制性内切酶AscⅠ酶切基因组获得含完整PK基因的8.7 kb片段。将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ多克隆位点获得中间载体P8-AA。用限制性内切酶SacⅠ+NdeⅠ缺失质粒P8-AA中PK... 以伪狂犬病毒TK/gI缺失疫苗株为亲本株,提取病毒基因组DNA,用限制性内切酶AscⅠ酶切基因组获得含完整PK基因的8.7 kb片段。将此片段克隆入pPolyⅡ载体的AscⅠ多克隆位点获得中间载体P8-AA。用限制性内切酶SacⅠ+NdeⅠ缺失质粒P8-AA中PK基因的2 218 bp片段,在此缺失区插入已构建好的质粒pEGFP-CI-VP1中含绿色荧光蛋白基因和VP1基因的完整表达盒,构建出可用于同源重组的转移载体P8-EGFP-VP1。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 PK基因 口蹄疫病毒 VP1基因
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口蹄疫病毒结构蛋白P1研究进展 被引量:5
18
作者 廖德芳 李华春 《动物医学进展》 CSCD 2007年第B08期23-26,共4页
口蹄疫病毒P1基因编码的结构蛋白是构成口蹄疫病毒衣壳的基础,对诱导动物机体产生中和抗体和其他保护性免疫反应有重要作用。文章综述了口蹄疫病毒结构蛋白的结构、抗原特性以及利用重组P1基因制备口蹄疫新型疫苗和诊断检测制剂的最新... 口蹄疫病毒P1基因编码的结构蛋白是构成口蹄疫病毒衣壳的基础,对诱导动物机体产生中和抗体和其他保护性免疫反应有重要作用。文章综述了口蹄疫病毒结构蛋白的结构、抗原特性以及利用重组P1基因制备口蹄疫新型疫苗和诊断检测制剂的最新研究进展。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 P1基因 结构蛋白
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口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析 被引量:5
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作者 刘在新 赵启祖 +6 位作者 张显升 江鹏斐 常惠芸 陈应理 李冬 魏怀录 谢庆阁 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期153-157,共5页
以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终... 以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白P3区 基因序列
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口蹄疫病毒泛亚株全衣壳基因克隆和序列结构分析 被引量:2
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作者 田纯见 曹永长 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期89-92,共4页
应用RT PCR和nPCR实现了口蹄疫病毒O/PanAsia/10株的全衣壳基因的克隆和序列测定.对核苷酸和氨基酸的序列分析表明,与经典O型毒株比较存在较大变异.其中4种结构蛋白的变异顺序是VP1>VP3>VP2>VP4.P1基因G+C值约55%.全衣壳蛋白... 应用RT PCR和nPCR实现了口蹄疫病毒O/PanAsia/10株的全衣壳基因的克隆和序列测定.对核苷酸和氨基酸的序列分析表明,与经典O型毒株比较存在较大变异.其中4种结构蛋白的变异顺序是VP1>VP3>VP2>VP4.P1基因G+C值约55%.全衣壳蛋白相对分子质量约8 0×104.主要结构蛋白VP1呈碱性,等电点约9 5. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 泛亚株 衣壳蛋白 基因克隆 序列分析 RT-PCR nPCR 口蹄疫
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