豚鼠肺气肿模型肺组织Foxp_3、RORγt及IL-17的表达及意义

目的采用弹性蛋白主动免疫方法制造豚鼠肺气肿模型,与传统熏烟制造模型方法比较,探究弹性蛋白抗体对肺气肿的影响;探讨豚鼠肺气肿模型肺组织中叉头状/翅状螺旋蛋白3(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)的表达和意义。方法分别采用熏烟、弹性蛋白主动免疫的方法制造豚鼠肺气肿模型;测量各组模型中肺泡平均半径;免疫组化技术检测肺组织Foxp3、RORγt和IL-17。结果熏烟组及主动免疫组平均肺泡半径明显长于对照组(P<0.05)。熏烟组及主动免疫组较对照组肺组织中Foxp3阳性细胞数减少,RORγt阳性细胞增多,Foxp3/RORγt比值表达失衡,IL-17表达水平增强(P<0.05),熏烟组与主动免疫组比较差异无统计学意义。相关性分析提示豚鼠肺组织Foxp3/RORγt阳性细胞比值与IL-17及平均肺泡半径呈负相关(P<0.05)。结论弹性蛋白主动免疫可以导致豚鼠肺气肿发生;熏烟组及主动免疫组豚鼠肺气肿模型肺组织中存在Foxp3/RORγt表达失衡,这种失衡可能是免疫调节细胞CD4+T细胞及效应细胞Th17细胞表达失调的重要机制,从而可能参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)自身免疫调节,对COPD的发生发展有一定的促进作用。

孕晚期胎膜早破孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞FoxP3、STAT5表达及妊娠结局

目的:孕晚期胎膜早破(PROM)孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞叉头翼状螺旋转录因子3(FoxP3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)表达及其妊娠结局分析。方法:收集2020年6月-2021年12月本院收治的PROM孕妇(PROM组)123例和正常妊娠晚期孕妇(对照组)120例临床资料,检测分娩前阴道分泌物微生物分布,外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平及血清IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平,分析两组阴道菌群分布与FoxP3、STAT5 mRNA表达水平的差异。结果:PROM组乳酸杆菌患者占比(51.2%)低于对照组(75.0%),革兰阳性杆菌(15.5%)、革兰阳性球菌(13.0%)、溶血性葡萄球菌(21.1%)、粪肠球菌(25.2%)、阴沟肠杆菌(17.9%)占比高于对照组(6.7%、5.0%、8.3%、10.0%、7.5%),外周血单个核细胞FoxP3(0.78±0.12)、STAT5 mRNA(1.04±0.22)表达水平均低于对照组(1.26±0.34、1.75±0.42)(均P<0.05);与对照组比较,PROM组血清IFN-γ、IL-12水平升高,IL-4、IL-10水平降低,且PROM组阴道微生态失调孕妇外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于阴道微生态正常孕妇,妊娠结局不良者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于妊娠结局良好者(均P<0.05)。结论:PROM患者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平降低,与患者阴道内菌群变化和妊娠结局有关,可能是PROM发生的相关机制。

免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达及其与预后的关系

目的探讨免疫浸润相关基因mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达水平及其与预后的关系。方法选取延安大学附属医院2017年1月至2019年1月宫颈癌患者74例作为宫颈癌变组,宫颈癌前病变患者74例作为宫颈癌前病变组,另选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者74例作为宫颈正常组,比较3组免疫浸润相关基因[人类白细胞抗原G(HLA-G)、叉状头螺旋转录因子3(FOXP3)、T细胞免疫球蛋白粘连蛋白-3(TIM-3)]、恶性生物学行为相关基因[侵袭基因p21-活化的激酶6(PAK-6)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)、增殖基因血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、同源盒基因B7(HOXB7)]的mRNA相对表达量,分析免疫浸润相关基因与宫颈癌发生及宫颈癌恶性生物学行为的关系,并统计对比不同免疫浸润相关基因表达水平患者3年生存率。结果HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA相对表达量为宫颈癌变组>宫颈癌前病变组>宫颈正常组(P<0.05);不同临床分期、分化程度,以及有无淋巴结转移、有无脉管浸润患者的HLA-G、FOXP3、TIM-3、PAK-6、EZH2、ANGPTL4、HOXB7 mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者宫颈癌前病变进展至宫颈癌的风险分别是低表达患者的3.005倍、4.654倍、3.343倍;宫颈癌患者HLA-G、FOXP3、TIM-3 mRNA与侵袭相关基因PAK-6、EZH2 mRNA、增殖相关基因ANGPTL4、HOXB7的mRNA表达呈正相关(P<0.05);随访3年,失访2例,72例宫颈癌患者3年生存率为68.06%(49/72),HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA高表达患者3年生存率均低于低表达患者(P<0.05)。结论免疫浸润相关基因HLA-G、FOXP3、TIM-3的mRNA在宫颈癌与宫颈癌前病变中呈上调表达,会显著增加宫颈癌发病风险,且与宫颈癌恶性生物学行为密切相关,还可能对生存预后产生重要影响。

TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。

叉头／翼状螺旋转录因子3基因多态性与溃疡性结肠炎的关系

目的在浙江籍汉族人群中探讨叉头/翼状螺旋转录因子3 （Foxp3）基因多态性与溃疡性结肠炎（UC）易感性的关系。方法收集381例UC患者和490名年龄、性别相匹配的健康对照者，采用多重SNaPshot技术检测Foxp3基因4种单核苷酸多态性（SNP） （rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548），并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果男、女性UC组分别与男、女性对照组比较，Foxp3的4种SNP（rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548）的等位基因和基因型频率的差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。依据疾病严重程度和累及部位分层分析。男性重度UC患者中，rs2232365、rs2294021、rs3761548的等位基因C、G、A频率均显著高于男性对照组（69.6%比34.3%，P＝0.001；69.6%比34.3%，P＝0.001；39.1%比14.4%，P＝0.002）。与女性对照组相比，女性重度UC患者中不仅rs2232365、rs2294021、rs3761548的等位基因C、G、A频率更高（51.9%比38.0%，P＝0.049；63.5%比39.2%，P＝0.001；53.8%比21.4%，P〈0.001），而且基因型（TC＋CC）、（AG＋GG）、（CA＋AA）的频率亦更高（80.8%比57.7%，P＝0.022；84.6%比58.4%，P＝0.009；76.9%比34.7%，P〈0.001）。虽然上述4种SNP彼此紧密连锁，但男、女性UC组分别与男、女性对照组比较，各单倍型频率的差异均无统计学意义（P值均〉0.05）。结论浙江籍汉族人群中Foxp3（rs2232365、rs2294021、rs3761548）基因变异可能增加重度UC发病风险。

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P<0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P<0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P>0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P<0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P<0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P<0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P<0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P<0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P<0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P<0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。