FOXD1、FOXD3蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床特征和预后的相关性

目的分析食管鳞癌组织中叉头框转录因子D1(FOXD1)、叉头框转录因子D3(FOXD3)的表达情况及其与临床病理特征、预后的关系。方法收集本院2011年1月至2013年12月收治的105例食管鳞癌患者临床资料。比较食管鳞癌组织及癌旁正常组织中FOXD1与FOXD3的表达情况,并分析其与临床病理特征及与患者预后的相关性。结果食管鳞癌组织中FOXD1 mRNA相对表达量高于癌旁组织,而FOXD3 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05)。并且癌组织中FOXD1阳性表达率显著高于癌旁正常组织,FOXD3阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.01)。FOXD1、FOXD3表达与患者年龄、病理分化程度无关(P>0.05),与患者肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度以及是否合并淋巴结转移相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。FOXD1表达阳性以及FOXD3表达阴性是影响食管鳞癌患者总生存的独立危险因素。结论FOXD1、FOXD3在食管鳞癌组织中异常表达,其表达与肿瘤恶性生物学行为有关,二者有望成为评估患者预后的潜在分子标志物。

叉头框蛋白D3在胃贲门腺癌组织中的表达及其对SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的:探讨叉头框蛋白D3(forkhead box protein D3,FOXD3)在胃贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中的表达及其对SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法:从河北医科大学第四医院生物标本库中选取2014年6月至2016年12月手术切除的49例GCA组织及相应癌旁组织标本,qRT-PCR检测FOXD3在GCA组织、癌旁组织以及在5种胃癌细胞系中(BGC-823、SGC-7901、HGC-27、MGC-803及NCI-N87)的表达。向SGC-7901细胞转染pc-DNA3.1-FOXD3或pc-DNA3.1,采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验分别检测FOXD3过表达对SGC-7901细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响,qRT-PCR及WB法检测细胞转染前后上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA及蛋白的表达情况,流式细胞术检测转染前后细胞周期改变。结果:GCA组织中FOXD3 mRNA的表达量明显降低,其表达水平与患者临床分期和淋巴结转移密切关联;FOXD3在胃癌细胞系中的表达均低于正常细胞(均P<0.01)。FOXD3过表达能明显抑制SGC-7901细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力(均P<0.01),提高SGC-7901细胞中E-cadherin的表达水平,减少N-cadherin、β-catenin和vimentin的表达水平(均P<0.01),使细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.01)。结论:FOXD3在GCA组织中的表达明显下调,其过表达可以抑制胃癌细胞的生物学行为,FOXD3可作为抑癌基因为肿瘤治疗提供新思路。

急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与病情及预后的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA叉头盒D3反义RNA1(LncRNA FOXD3-AS1)水平与疾病风险、严重程度及预后的关系。方法选取该院收治的92例AIS患者为AIS组,92例体检健康者为对照组。按入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将AIS患者分为轻度组(42例)、中重度组(50例)。AIS患者出院后随访3个月,依据改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(48例)、预后不良组(44例)。检测血清LncRNA FOXD3-AS1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。比较AIS组和对照组临床资料、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平,并比较不同严重程度的AIS患者、不同预后的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平;分析AIS发生的危险因素,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与甘油三酯(TG)、尿酸的相关性,血清LncRNA FOXD3-AS1水平与AIS发生风险的关系。结果AIS组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05),血清TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于对照组(P<0.05)。高水平TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α是AIS发生的独立危险因素(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸均呈正相关(P<0.05),血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α呈正相关(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平越高,AIS发生风险越高。中重度组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于轻度组(P<0.05)。预后不良组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于预后良好组(P<0.05)。结论AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平较高,LncRNA FOXD3-AS1与AIS发生风险、严重程度、预后均有关。

敲低干细胞关键转录因子FoxD3对胃癌细胞SGC-7901的影响

目的探究shRNA FoxD3对胃癌细胞SGC-7901生长、运动及上皮间质转化的影响。方法将shRNA FoxD3载体和空质粒载体转染至SGC-7901细胞,根据处理方式不同,将细胞分为Control组、shRNA-NC组和FoxD3-shRNA2组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率;Transwell检测侵袭细胞数;划痕实验检测细胞划痕愈合率;显微镜观察上皮间质转化形态学变化;Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。结果与Control组比较,FoxD3-shRNA2组克隆形成率降低(P<0.05),Ki67、PCNA蛋白表达降低(P<0.05),侵袭细胞数减少(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),上皮间质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.05)。结论shRNA FoxD3可抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化。

miR-524-5p调控FOXD3对甲状腺癌细胞增殖凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA-524-5p(miR-524-5p)调控叉头框D3蛋白(FOXD3)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法人甲状腺癌细胞SW579,分为空白对照组(不转染)、mimic NC组(转染negative control-miR-524-5p)、miR-524-5p mimic组(转染hsa-miR-524-5p mimic)、siRNA NC组(同时转染hsa-miR-524-5p mimic和NC-siRNA)、共转染组(同时转染hsa-miR-524-5p mimic和FOXD3 siRNA),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-524-5p、FOXD3 mRNA表达;CCK-8法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡;Transwell法、划痕试验检测细胞侵袭、迁移能力;蛋白印迹(WB)法检测各组SW579细胞中FOXD3及EMT相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(Fibronectin)蛋白表达情况。结果与mimic NC组相比,miR-524-5p mimic组SW579细胞中miR-524-5p表达水平、细胞凋亡率、FOXD3 mRNA和蛋白表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞OD值、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与siRNA NC组相比,共转染组SW579细胞中miR-524-5p表达水平差异无统计学意义(P>0.05),细胞OD值、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、FOXD3 mRNA和蛋白表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P>0.05)。结论miR-524-5p可能通过调控FOXD3表达水平升高,进而抑制SW579细胞增殖、侵袭、迁移及EMT过程,并诱导癌细胞凋亡。

FOXD3基因在恶性肿瘤中的研究进展

人类叉头框蛋白(FOX)D3是FOX转录因子家族的成员之一,并可作为转录因子发挥许多生物功能,如调控细胞的形成、迁移和分化。此外,FOXD3还可通过与其他转录因子相互作用,参与广泛的生物学过程,如细胞分化、新陈代谢、增殖、迁移、凋亡,甚至肿瘤发生。FOXD3可作为抑癌基因,其在多种类型肿瘤中表达下调,并通过多种信号通路以及癌症相关基因相互作用促进肿瘤的发生和进展。将FOXD3作为恶性肿瘤治疗的新靶点,分析其与肿瘤发生发展的关系,对恶性肿瘤的诊治有重要意义。

叉头框家族D3和腺苷酸活化蛋白激酶5与胃癌顺铂耐药机制的研究

目的研究叉头框家族D3(FOXD3)和腺苷酸活化蛋白激酶5(ARK5)参与胃癌顺铂耐药的机制。方法将细胞株分为6组:SGC7901组(1组);SGC7901/DDP组(2组)、SGC7901/DDP-FOXD3组(3组)、SGC7901/DDP-FOXD3-NC组(4组)、SGC7901/DDP-shARK5组(5组)和SGC7901/DDP-shARK5-NC组(6组)。在第3组细胞株中转染过表达FOXD3质粒,第4组中转染FOXD3空白质粒作为对照,在第5组细胞株中转染敲降shARK5质粒,第6组细胞株转染敲降shARK5空白对照质粒。用Western blot法检测FOXD3和ARK5蛋白的表达水平,用噻唑蓝比色法测定顺铂半抑制浓度(IC;)。结果第1至6组中FOXD3蛋白相对表达量分别为27.15±7.53,22.04±3.92,45.39±5.17,23.39±2.56,21.99±4.74和24.27±5.39,ARK5蛋白相对表达量分别为25.33±5.11,27.56±3.45,27.82±5.40,27.21±5.22,10.33±0.82和28.44±1.63;第3组的FOXD3蛋白相对表达量均明显高于其他5组,差异均有统计学意义(均P<0.05);第5组的ARK5蛋白相对表达量均明显低于其他5组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。第1至6组的IC;分别为(1.92±0.41),(3.54±1.10),(1.54±0.31),(4.23±1.22),(1.94±0.40)和(5.06±1.32)mg·mL^(-1)。第2组的IC;明显高于第1组,第3组的IC;明显低于第4组,第5组的IC;明显低于第6组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论FOXD3表达升高可提高耐顺铂胃癌细胞对顺铂的敏感性,ARK5则促进耐顺铂胃癌细胞对顺铂的耐药性,二者的异常表达可能共同参与了胃癌的顺铂耐药机制。

依托咪酯通过下调叉头框转录因子D3反义RNA 1对胃癌细胞恶性表型调控作用

目的探讨依托咪酯对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,将细胞分为8组:正常对照组(细胞用常规培养基培养24 h)、依托咪酯组(细胞分别用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养24 h)、第1转染组(转染小干扰RNA阴性对照的细胞用常规培养基培养24 h)、第2转染组(转染FOXD3-AS1小干扰RNA的细胞用常规培养基培养24 h)、第3转染组(用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养转染空载体的细胞24 h)和第4转染组(用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养转染FOXD3-AS1过表达载体的细胞24 h)。用细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖(OD值),流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时定量-PCR法检测细胞中叉头框转录因子D3反义RNA 1(FOXD3-AS1)基因表达(2^(-△△Ct)值)。结果与正常对照组比较,依托咪酯组HGC-27细胞增殖水平(0.32±0.02 vs 0.66±0.07,)、迁移数[(42.80±5.35)个vs(165.28±12.86)个]、侵袭数[(31.57±3.46)个vs(125.26±11.56)个]及细胞中FOXD3-AS1基因表达(0.41±0.03 vs 1.01±0.03)均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);而凋亡率升高[(29.83±2.58)%vs(2.89±0.21)%,],差异有统计学意义(P<0.05)。与第1转染组比较,第2转染组HGC-27细胞增殖水平(0.40±0.03 vs 0.67±0.06)、迁移数[(59.11±7.15)个vs(163.11±11.99)个]和侵袭数[(40.33±3.12)个vs(121.89±10.39)个]均显著降低(P<0.05),而凋亡率显著升高[(23.87±1.98)%vs(2.53±0.33)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与第3转染组比较,第4转染组HGC-27细胞增殖水平(0.56±0.02 vs 0.34±0.02)、迁移数[(138.33±12.01)个vs(44.89±3.62)个]和侵袭数[(103.89±7.72)个vs 30.56±1.81)个]均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),而凋亡率显著降低[(9.96±0.73)%vs(29.39±2.36)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论依托咪酯可抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与下调FOXD3-AS1表达有关。

结肠癌中ID1上调OCT4信号通路的机制研究

DNA结合抑制蛋白-1(inhibitor of DNA binding 1,ID1)在结肠癌、肺癌和乳腺癌等多种肿瘤组织中异常高表达,并与肿瘤恶性进展及患者不良预后密切相关。已有研究发现,ID1在结肠癌中可以维持肿瘤细胞干细胞样特性,介导肿瘤干细胞耐药,但其分子生物学机制并未被完全阐明。通过免疫印迹、基因集富集分析、双荧光素酶报告基因检测及实时定量PCR,本研究发现ID1可从转录水平上调维持肿瘤细胞干性的关键转录因子八聚体结合蛋白(octamer binding transcription factor,OCT4)的蛋白表达及信号通路活性。利用体外成球实验,本研究证明过表达OCT4可逆转敲低ID1对干细胞成球能力的抑制作用。在进一步的机制研究中,利用JASPAR及GEPIA数据库,本研究预测并得到能够负向调控OCT4转录的转录抑制因子叉头蛋白D3(forkhead box D3,FOXD3)。通过免疫共沉淀、免疫荧光共聚焦及实时定量PCR等方法,本研究最终证明ID1通过与转录抑制因子FOXD3相互作用,抑制其活性从而上调OCT4的转录及信号通路活性。综上,本研究为结肠癌干细胞的分子调控机制提供了新的理论基础,研究中发现的ID1-FOXD3蛋白-蛋白相互作用为结肠癌治疗提供了新的潜在干预靶点。