外周血FOXO3a、VCAM-1水平评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值

目的探讨外周血叉头盒O类转录因子-3a(Foxo3a)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值。方法前瞻性选择2020年3月至2022年3月青岛市城阳区人民医院收治的2型糖尿病患者120例作为研究组,将同期体检的正常者50名作为对照组。采集所有入组者外周血,检测并对比两组FOXO3a、VCAM-1水平。将120例2型糖尿病患者按有无发生心血管疾病分为CVD组(n=45)及非CVD组(n=75),统计CVD组和非CVD组的一般资料、VCAM-1、FOXO3a水平等差异。采用单因素、多因素分析两组影响2型糖尿病患者发生心血管疾病的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)评估外周血FOXO3a、VCAM-1水平预测2型糖尿病患者发生心血管疾病的价值。结果研究组患者VCAM-1水平(3.25±0.69)ng/mL,高于对照组[(1.76±0.59)ng/mL],FOXO3a水平为0.42±0.06,低于对照组(0.91±0.24),差异均有统计学意义(P<0.05)。CVD组体重指数≥24 kg/m2占比、有心血管疾病家族史占比、收缩压≥140 mmHg占比、VCAM-1、甘油三酯、总胆固醇水平为66.67%、57.78%、62.22%、(4.02±1.02)ng/mL、(2.67±0.52)mmol/L、(5.36±1.02)mmol/L,均高于非CVD组[33.33%、37.33%、41.33%、(3.06±0.98)ng/mL、(2.01±0.50)mmol/L、(4.12±1.01)mmol/L],FOXO3a水平0.33±0.09,低于非CVD组(0.54±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析发现,体重指数≥24 kg/m2、有心血管疾病家族史、收缩压≥140 mmHg、VCAM-1≥3.817 ng/mL、FOXO3a≤0.440、甘油三酯≥2.338 mmol/L、总胆固醇≥4.483 mmol/L均是导致2型糖尿病患者发生心血管病的危险因素(P<0.05)。经过ROC曲线分析证实,VCAM-1、FOXO3a、甘油三酯、总胆固醇可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测,曲线下面积分别为0.735、0.936、0.893、0.833。结论2型糖尿病患者外周血VCAM-1、FOXO3a水平存在异常表达,可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测。

FoxO3a介导药根碱保护N2a-SW模型中损伤线粒体机制的初步探讨

目的探讨Fox O3a介导药根碱(JAT)保护稳转APP695swedish基因的小鼠神经瘤N2a细胞(N2a-SW)模型中损伤线粒体的机制。方法以小鼠神经瘤N2a细胞为对照组,N2a-SW细胞为AD模型组,应用不同浓度JAT进行处理后,检测JAT对模型组损伤线粒体中Fox O3a、m RNA及线粒体相关蛋白的表达影响。结果与N2a组相比较,SW模型组细胞形态呈明显损伤形态、细胞中Aβ蛋白表达增加至(176.01±17.47)%、细胞内活性氧ROS聚集升高至(264.14±8.93)%;与SW组相比,应用20μmol/L、40μmol/L JAT处理SW细胞24 h后,可以降低ROS水平分别至(170.06±8.20)%、(100.51±11.81)%;与SW组相比,不同浓度JAT(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)处理组不仅可以减少细胞色素C(Cyto-c)在胞浆中的释放[分别为(66.71±7.88)%、(67.99±6.89)%、(56.64±5.99)%],降低线粒体分裂调节蛋白Drp1的表达[分别为(67.62±5.87)%、(56.99±3.62)%、(38.00±10.16)%],还可抑制SW组Fox O3a磷酸化蛋白表达[分别为(66.49±3.11)%、(42.14±1.94)%、(51.12±4.55)%],并增加线粒体核心蛋白PGC1α的表达[分别为(201.51±12.43)%、(179.43±1.77)%、(157.80±16.32)%]及m RNA的表达[分别为(162.46±5.98)%、(244.92±2.67)%、(149.11±4.76)%],而总蛋白Fox O3a及m RNA不受影响,上述结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论JAT可能通过Fox O3a来发挥对阿尔茨海默病损伤线粒体的保护作用。

FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤U-2OS细胞顺铂耐药中的作用

目的:探讨FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法:利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a的表达水平,Western blotting检测转染FOXO3a-si RNA和HIF-1α-si RNA对细胞内FOXO3a和HIF-1α表达的影响,CCK-8和Annexin V/PI染色法检测FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用。结果:缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。FOXO3a的表达受HIF-1α调控,与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比,HIF-1α-siRNA组FOXO3a蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03)vs(0.89±0.08),(0.91±0.07),均P<0.01]。在缺氧条件下,FOXO3a-si RNA可降低U-2OS细胞对DDP的耐受性[(38.50±2.83)%vs(61.75±5.73)%,P<0.01],增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)%vs(32.38±2.23)%,(55.89±4.46)%,均P<0.05]。结论:缺氧通过HIF-1α依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a表达,从而增强瘤细胞对DPP的耐药性。

miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞生物学行为的影响及其机制研究

目的观察miR-182靶向调控PI3K/AKT/FOXO3a信号通路对胶质瘤干细胞(GSCs)生物学行为的影响,并研究其作用机制。方法成功从胶质瘤患者病灶组织中分离出GSCs并予以培养、传代及鉴定,分为空白对照组(生理盐水溶液)、miR-182 mimics组(细胞转染miR-182 mimics)及阴性对照组(细胞转染无意义序列),细胞转染后倒置荧光显微镜下观察miR-182 mimics的转染效率,检测各组miR-182 mRNA表达水平及增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为改变,同时检测PI3K/AKT/FOXO3a信号通路相关蛋白(PI3K、p-AKT、FOXO3a)表达水平。结果miR-182 mimics组miR-182 mRNA表达水平明显高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05);miR-182 mimics组细胞转染后24、48及72 h时的细胞增殖率及迁移、侵袭能力明显高于空白对照组及阴性对照组(P<0.05),而细胞转染后24、48及72 h时的细胞凋亡率明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),空白对照组与阴性对照组比较无统计学差异(P>0.05);miR-182 mimics组胶质瘤干细胞转染miR-182 mimics后PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),FOXO3a蛋白表达水平明显低于空白对照组、阴性对照组(P<0.01),而空白对照组与阴性对照组PI3K、p-AKT、FOXO3a蛋白表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。结论miR-182可能通过激活活化PI3K/AKT/FOXO3a信号通路而起到增强GSCs增殖、迁移及侵袭能力和抑制细胞凋亡的作用,可能作为临床治疗胶质瘤的新靶点。

Fangji Fuling Decoction Alleviates Sepsis by Blocking MAPK14/FOXO3A Signaling Pathway

Objective:To examine the therapeutic effect of Fangji Fuling Decoction(FFD) on sepsis through network pharmacological analysis combined with in vitro and in vivo experiments.Methods:A sepsis mouse model was constructed through intraperitoneal injection of 20 mg/kg lipopolysaccharide(LPS).RAW264.7 cells were stimulated by 250 ng/m L LPS to establish an in vitro cell model.Network pharmacology analysis identified the key molecular pathway associated with FFD in sepsis.Through ectopic expression and depletion experiments,the effect of FFD on multiple organ damage in septic mice,as well as on cell proliferation and apoptosis in relation to the mitogen-activated protein kinase 14/Forkhead Box O 3A(MAPK14/FOXO3A) signaling pathway,was analyzed.Results:FFD reduced organ damage and inflammation in LPS-induced septic mice and suppressed LPS-induced macrophage apoptosis and inflammation in vitro(P<0.05).Network pharmacology analysis showed that FFD could regulate the MAPK14/FOXO signaling pathway during sepsis.As confirmed by in vitro cell experiments,FFD inhibited the MAPK14 signaling pathway or FOXO3A expression to relieve LPS-induced macrophage apoptosis and inflammation(P<0.05).Furthermore,FFD inhibited the MAPK14/FOXO3A signaling pathway to inhibit LPS-induced macrophage apoptosis in the lung tissue of septic mice(P<0.05).Conclusion:FFD could ameliorate the LPS-induced inflammatory response in septic mice by inhibiting the MAPK14/FOXO3A signaling pathway.

老年肺癌放化疗期间并发肺部感染危险因素及其与FOXO3A基因多态性的关联

目的 探讨老年肺癌(LC)放化疗患者肺部感染的危险因素及其与叉头盒O组转录因子3A(FOXO3A)基因特定位点多态性的关联。方法 选取2020年6月-2023年6月在南阳医学高等专科学校第一附属医院就诊的老年LC患者213例,按照治疗期间肺部感染发生情况分为感染组(n=47)和非感染组(n=166),对感染病原菌分布进行分析,检测两组FOXO3A基因rs12212067位点多态性;多因素Logistic回归分析接受放化疗期间发生肺部感染的危险因素。结果 47例感染患者共分离出56株病原菌,其中革兰阴性菌35株,占比为62.50%;感染组FOXO3A基因rs12212067位点TT、TC基因型频率和T等位基因频率均高于非感染组(P<0.05);感染组患者年龄、糖尿病史、TNM分期Ⅳ期、治疗方案为放疗或(和)化疗占比、化疗周期>4周期、无预防性使用抗菌药物占比均高于非感染组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄和化疗周期是接受放化疗的老年LC患者发生肺部感染的危险因素(P<0.05),预防性使用抗菌药物是保护因素(P<0.05)。结论 老年LC放化疗患者肺部感染以革兰阴性菌为主,FOXO3A基因rs12212067位点TT基因型是发生肺部感染的危险基因型,年龄和化疗周期是接受放化疗期间发生肺部感染的危险因素,预防性使用抗菌药物是保护因素。

高迁移率族蛋白A2和叉头转录因子O亚型3a在胃癌组织中的表达及意义

目的 探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)和叉头转录因子O亚型3a(FOXO3a)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 选择45例胃癌组织标本为研究组,以其癌旁组织为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织及癌旁组织HMGA2 mRNA和FOXO3a mRNA,采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织中的HMGA2和FOXO3a,用SPSS 19.0软件对结果进行统计学分析。结果 HMGA2 mRNA在胃癌组织中表达水平显著高于癌旁组织,FOXO3a mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。HMGA2在胃癌组织中阳性率显著高于癌旁组织,FOXO3a阳性率显著低于癌旁组织(P<0.05)。TNM分期越高、分化程度越低、有淋巴结转移的HMGA2表达越高,FOXO3a表达越低(P<0.05)。HMGA2和FOXO3a成负相关(r=-0.435,P=0.000)。Kaplan-Meier生存分析显示,HMGA2低表达组比高表达组有更好的累积生存率,FOXO3a高表达组比低表达组有更好的累积生存率(P<0.05)。结论 HMGA2在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织、FOXO3a表达水平低于癌旁组织,其异常表达可作为胃癌诊断的分子标记物。

线粒体和叉头框蛋白O类3a

背景 叉头框蛋白O类（forkhead box protein O,FOXO）3a转录因子是细胞凋亡和细胞周期的调节者,也调控细胞生存或活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）生成.目的 阐述FOXO3a激活对细胞线粒体呼吸作用的调控,进一步说明FOXO3a是细胞应激的信息整合因子和细胞稳态的主要调控因子.内容 讨论FOXO3a转录因子在调节细胞稳态中的作用,重点在线粒体完整性、形态和活性.在神经肿瘤细胞中,FOXO3a诱发ROS积聚,短暂性增加线粒体外膜通透性,这对FOXO3a诱发凋亡是关键的.细胞ROS水平受FOXOa靶因子Bcl-2 interacting mediator of cell death （BIM）、B-cell lymphomaextra large（BCL-XL）和生存素影响.这3个蛋白定位于线粒体并影响线粒体膜电位、呼吸和细胞ROS水平.FOXO3a激活BIM引起线粒体去极化,引起细胞呼吸和ROS产生短暂性降低.趋向 FOXO3a调控线粒体ROS的产生和解毒过程间的动态平衡,在细胞死亡过程中具有重要作用.

叉头蛋白转录因子3a／p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制

目的观察紫铆因（Butein）的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a（FOX03a）／p27激酶抑制蛋白1（p27kipl）和氧化应激在该过程中的作用。方法常规培养A549细胞，分别给予25、50、100μmol／L的Butein处理24h后，检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性、活性氧（ROS）含量、总谷胱甘肽（GSH）水平，从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞。Westernblot法检测FOX03a、p27kipl、B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）的表达水平。进而采用小干扰RNA（siRNA）干扰法敲减FOX03a表达并检测FOX03a、p27kipl以及bax、bcl-2的表达水平，从而明确FOX03a／p27kipl通路在该过程中的作用。结果25、50、100μmol／L的Butein处理A549细胞24h后，细胞活力分别下降到（78．3±4．6）％、（63．5±4．8）％和（40．1±4．1）％（t=10．330，P=0．000），细胞划痕间距增大到（120．0±8．4）％、（150．0±10．6）％和（175．0±11.1）％（t=4．777，P=0．001）。Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强，ROS含量增多，总GSH减少。Westernblot结果显示Butein激活了FOX03a／p27kipl通路，上调了bax／bcl-2的比值。siRNA处理后阻断了FOX03a／p27kip1通路，逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少。结论Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移，该作用可能是通过激活FOX03a／p27kipl信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的。