miR-9-5p通过靶向FOXO1抑制急性淋巴细胞白血病进展

目的探究miR-9-5p通过靶向叉头框转录因子1(FOXO1)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖的影响。方法收集64例ALL患儿与29例非恶性血液病患儿的骨髓样本,qRT-PCR检测骨髓组织miR-9-5p、FOXO1及ALL细胞系miR-9-5p表达水平,分析miR-9-5p与ALL临床病理特征、与FOXO1表达水平的相关性。CEM/C1、Molt-3细胞慢病毒转染过表达miR-9-5p、FOXO1或miR-9-5p+FOXO1,MTT、克隆形成、EdU法检测各组细胞增殖能力,划痕、Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞周期变化。生物信息学分析、双荧光素酶报告基因检测验证miR-9-5p与FOXO1之间的靶向关系。Western blot检测骨髓组织、CEM/C1、Molt-3细胞FOXO1及细胞周期相关蛋白表达情况。48只小鼠建立ALL模型,尾静脉注射过表达miR-9-5p CEM/C1、Molt-3细胞,荧光标记活体成像观察ALL发展情况,记录小鼠生存情况与体质量变化,HE染色观察ALL小鼠骨髓、脾脏组织病理变化。结果ALL患儿骨髓miR-9-5p水平降低(P<0.05),FOXO1水平升高(P<0.05),其表达水平与白细胞计数、血小板计数、红细胞计数、危险分层相关(P<0.05)。过表达miR-9-5p可降低CEM/C1、Molt-3细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力(P<0.05),延长细胞G0/G1期,缩短S期(P<0.05),减小ALL细胞扩散范围,提高ALL小鼠生存率与体质量(P<0.05),减弱骨髓、脾脏组织肿瘤细胞浸润与结构变化程度。miR-9-5p靶向调控FOXO1表达,过表达FOXO1可逆转miR-9-5p对CEM/C1、Molt-3细胞恶性生物学行为的抑制效果。结论miR-9-5p在ALL患儿骨髓组织与细胞系中低表达,可能通过抑制FOXO1表达影响ALL细胞恶性生物学行为,抑制ALL发展。

靶向FoxO1通过调节脂质代谢影响非酒精性脂肪性肝病的初步机制研究

目的探讨FoxO1在高脂高胆固醇(high-fat high-cholesterol,HFHC)诱导的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠模型中肝脏脂质代谢作用和潜在机制。方法选择8周龄雄性C57BL/6J小鼠18只,分为3组:LFD组小鼠喂养低脂对照饲料;HFHC组小鼠喂养高脂高胆固醇(HFHC)饲料16周;HFHC+AS2856组小鼠在喂养HFHC饲料8周后再给予60 mg/kg/d FoxO1抑制剂AS1842856(简称AS2856)治疗8周。Western blot检测各组小鼠肝脏中FoxO1的磷酸化水平,观察小鼠体质量、肝脏组织形态学改变情况及非酒精性脂肪性肝病活动度评分(non-alcoholic fatty liver disease activity score,NAS),检测血清中谷丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)和空腹血糖(fasting plasma glucose,FBG),通过qPCR检测脂质代谢相关基因SREBP1c、FAS、ACC1 mRNA水平。结果FoxO1在HFHC小鼠肝脏中活性增加。与HFHC组相比,HFHC+AS2856组小鼠体重、肝重均明显下降,肝脏脂肪变性减轻以及血清TG水平明显下降(P<0.05),且TG合成相关的基因mRNA水平也显著降低了,包括SREBP1c,FAS和ACC1(P<0.05)。结论FoxO1抑制剂AS2856可下调NAFLD小鼠SREBP1c及其下游基因FAS和ACC1的表达,改善TG的累积,从而减缓肝脏脂肪变性。

长链非编码RNA ANCR在肺癌中的表达和作用

目的探讨长链非编码RNA ANCR(LncRNA ANCR)在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞增殖和凋亡的作用。方法收集50例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中LncRNA ANCR和叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA的表达水平。将A549细胞分为第1转染组(转染慢病毒阴性对照质粒)、第2转染组(转染pHRi-ANCR)、第3转染组(转染pHRi-sh-ANCR)、第4转染组(转染pHRi-FOXO1)和第5转染组(同时转染pHRi-sh-ANCR和pHRi-sh-FOXO1),未处理细胞为空白组。用RNA pull-down和RIP实验检测ANCR与FOXO1的相互作用。用RT-qPCR检测ANCR和FOXO1的表达水平,用EdU标记技术和流式细胞术分别检测A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果肺癌组织和癌旁组织中LncRNA ANCR的表达分别为2.78±1.36,1.33±0.51,FOXO1 mRNA的表达为1.28±0.57,3.03±0.72。第1,3,4,5转染组细胞增殖比例分别为(47.90±2.36)%,(27.93±2.37)%,(29.93±0.64)%,(74.27±4.06)%,阻滞于G0/G1期细胞比例分别为(37.43±1.96)%,(64.20±4.05)%,(65.47±1.86)%,(24.93±1.38)%,细胞凋亡比例分别为(8.93±0.53)%,(17.81±1.42)%,(16.18±1.07)%,(7.78±0.55)%。肺癌组织与癌旁组织相比、第3,4转染组与第1转染组相比、第5转染组与第3转染组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论LncRNA ANCR在肺癌中表达升高并通过抑制FOXO1的表达调控肺癌细胞的细胞增殖和凋亡。