黄芪莪术药对调控Akt/FoxO3a信号通路对胃癌前病变的影响研究

目的 基于蛋白激酶B(Akt)/叉头状转录因子O亚族3(FoxO3a)通路探究黄芪-莪术药对逆转胃癌前病变的机制。方法 取48只雄性Wistar大鼠,随机选择12只作为正常组,其余大鼠采用甲基硝基亚硝胍(MNNG)复合造模法建立胃癌前病变模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪-莪术组、叶酸组,每组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,黄芪-莪术组给予黄芪-莪术水煎浓缩液3.6 g/kg灌胃,叶酸组给予叶酸1.8 mg/kg灌胃,均1次/d,连续灌胃10周。观察大鼠日常生活情况、体重、精神状态,HE染色观察胃黏膜组织病理形态,RT-PCR法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、Beclin1、LC3-Ⅱ、p62 mRNA表达情况,Western blot法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠体重、食量、活力下降,精神变差;胃黏膜见腺体增大,腺体间细胞增生,少量炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,黄芪-莪术组和叶酸组大鼠精神、食量及活力均有好转;胃黏膜腺体细胞排列较为整齐紧密,未见出血、炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论 黄芪-莪术药对可一定程度逆转大鼠胃癌前病变,其可能是通过影响Akt/FoxO3a信号通路,激活增强体内自噬系统从而清除胃癌前病变细胞实现的。

活动性肺结核患者血清ATG3和FOXO3水平变化对患者病情进展及预后评估的相关性分析

目的分析活动性肺结核患者血清中自噬相关基因3(ATG3)和叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达水平变化以及与患者病情进展及预后的关系。方法以2019年9月~2022年9月于本院就诊的91例活动性肺结核患者(观察组)为研究对象,另选取同时期于本院体检的91例健康体检者作为对照组;酶联免疫吸附法检测血清中ATG3和FOXO3表达水平;利用Spearman相关分析活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度之间的相关性;采用Logistic回归分析影响活动性肺结核患者预后的因素;采用ROC曲线分析血清中ATG3和FOXO3表达水平对活动性肺结核患者预后评估的价值。结果与对照组相比,观察组血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与轻症组相比,重症组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与预后不良组相比,预后良好组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著升高(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者ESR、PCT、CRP、TNF-α、INF-γ和IL-2相比差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ESR、CRP、ATG3和FOXO3为影响活动性肺结核患者预后不良的因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清中ATG3和FOXO3表达水平联合预测活动性肺结核患者预后较ATG3和FOXO3单一指标预测效果更优(P<0.05)。结论活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降,且与活动性肺结核病情严重程度相关,二者联合对活动性肺结核患者预后具有较高的评估价值。

外周血FOXO3a、VCAM-1水平评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值

目的探讨外周血叉头盒O类转录因子-3a(Foxo3a)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值。方法前瞻性选择2020年3月至2022年3月青岛市城阳区人民医院收治的2型糖尿病患者120例作为研究组,将同期体检的正常者50名作为对照组。采集所有入组者外周血,检测并对比两组FOXO3a、VCAM-1水平。将120例2型糖尿病患者按有无发生心血管疾病分为CVD组(n=45)及非CVD组(n=75),统计CVD组和非CVD组的一般资料、VCAM-1、FOXO3a水平等差异。采用单因素、多因素分析两组影响2型糖尿病患者发生心血管疾病的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)评估外周血FOXO3a、VCAM-1水平预测2型糖尿病患者发生心血管疾病的价值。结果研究组患者VCAM-1水平(3.25±0.69)ng/mL,高于对照组[(1.76±0.59)ng/mL],FOXO3a水平为0.42±0.06,低于对照组(0.91±0.24),差异均有统计学意义(P<0.05)。CVD组体重指数≥24 kg/m2占比、有心血管疾病家族史占比、收缩压≥140 mmHg占比、VCAM-1、甘油三酯、总胆固醇水平为66.67%、57.78%、62.22%、(4.02±1.02)ng/mL、(2.67±0.52)mmol/L、(5.36±1.02)mmol/L,均高于非CVD组[33.33%、37.33%、41.33%、(3.06±0.98)ng/mL、(2.01±0.50)mmol/L、(4.12±1.01)mmol/L],FOXO3a水平0.33±0.09,低于非CVD组(0.54±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析发现,体重指数≥24 kg/m2、有心血管疾病家族史、收缩压≥140 mmHg、VCAM-1≥3.817 ng/mL、FOXO3a≤0.440、甘油三酯≥2.338 mmol/L、总胆固醇≥4.483 mmol/L均是导致2型糖尿病患者发生心血管病的危险因素(P<0.05)。经过ROC曲线分析证实,VCAM-1、FOXO3a、甘油三酯、总胆固醇可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测,曲线下面积分别为0.735、0.936、0.893、0.833。结论2型糖尿病患者外周血VCAM-1、FOXO3a水平存在异常表达,可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血清FOXO3a、LIN28B水平及其预后价值

目的探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清中叉头框转录因子O亚家族成员3a(FOXO3a)、Lin-28同系物B(LIN28B)表达水平及其对预后的评估价值。方法选取105例AECOPD患者为研究对象(加重组),选取同期收治的COPD稳定期患者60例作为稳定组,同期体检健康者60例作为对照组。检测血清FOXO3a、LIN28B水平;Pearson法分析血清FOXO3a、LIN28B水平相关性;根据加重组患者预后情况分为存活组(n=86)和死亡组(n=19);Logistic回归分析患者预后的影响因素;绘制AECOPD患者预后的受试者工作特征(ROC)曲线。结果对照组、稳定组及加重组白细胞计数(WBC)、血清降钙素原(PCT)、血清FOXO3a和LIN28B水平依次升高(P<0.05)。血清FOXO3a与LIN28B表达水平呈现正相关(r=0.548,P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现FOXO3a和LIN28B是影响AECOPD的独立危险因素。血清FOXO3a、LIN28B、联合预测AECOPD患者预后的AUC分别是0.922、0.799和0.942;灵敏度分别为94.74%、84.21%和94.74%;特异性分别为84.88%、65.12%和86.05%;二者联合优于血清LIN28B和FOXO3a单独预测(Z_(联合-LIN28B)=2.321,Z_(联合-FOXO3a)=2.874;P均<0.05)。结论AECOPD患者血清FOXO3a、LIN28B水平显著高于稳定组和对照组,可有效预测AECOPD患者预后状况。

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

稽留流产患者滋养细胞中FoxO3a转录因子的表达

目的:探讨稽留流产滋养细胞中叉头框转录因子3a(FoxO3a)的表达及其与凋亡的关系.方法:选取30例经B超及HCG动态监测证实为稽留流产病例的绒毛组织作为研究组,另选取30例因非意愿妊娠行人工流产的正常妊娠病例的绒毛组织作为对照组.免疫组织化学法检测两组绒毛组织标本中FoxO3a及Caspase-3的表达并采用图像分析技术对其阳性表达进行半定量分析.结果:FoxO3a的表达位于滋养细胞胞质或胞核,Caspase-3的表达位于绒毛滋养细胞胞质;与正常妊娠组相比,稽留流产组滋养细胞中的FoxO3a表达降低和Caspase-3表达增多;组内FoxO3a及Caspase-3的表达有线性相关(P<0.05).结论:稽留流产滋养细胞中FoxO3a表达降低可能与细胞过度凋亡有关.

miR-132靶向FoxO3a抑制细胞自噬在脑出血模型大鼠中的神经保护作用

目的研究微小RNA(miR)-132靶向叉形头转录因子O亚型3a(Fox03a)抑制细胞自噬在脑出血模型大鼠中的神经保护作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-阴性对照(NC)组、miR-132组,后三组采用Ⅶ型胶原酶注入苍白球的方式建立脑出血模型,对照组和模型组给予生理盐水侧脑室注射,miR-NC组和miR-132组分别给予miR-NC及miR-132侧脑室注射。造模后第7d,比较各组大鼠神经功能评分的差异,苏木精-伊红染色观察血肿周围脑组织病理改变,PCR检测miR-132的表达水平,Western blot检测FoxO3a、自噬基因(Beclin-1、Atg12、LC3)的表达水平;培养PC12神经元细胞,转染miR-NC或miR-132后,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-132靶向FoxO3a。结果在动物实验中,模型组大鼠的神经功能评分增加,血肿周围脑组织中FoxO3a、Beclin-1、Atg12、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达增加,miR-132的表达减少(P<0.05);miR-132组大鼠的神经功能评分降低,血肿周围脑组织中FoxO3a、Beclin-1、Atg12、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达减少,miR-132的表达增加(P<0.05)。在细胞实验中,miR-132组细胞中FoxO3a的表达水平及野生型FoxO3a 3’UTR双荧光素酶报告基因的荧光活力均低于miRNC组(P<0.05)。结论miR-132在脑出血模型大鼠中起保护作用,靶向FoxO3a并抑制自噬是可能的分子机制。

MiR-486-5p/FOXO1轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞增殖和迁移的调节作用

目的探讨miR-486-5p/叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O subfamily 1,FOXO1)轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞的增殖和迁移的调节机制。方法小鼠建立深二度烧伤模型,随机分为NC mimic+Vector组、FOXO1组、miR-486-5p mimic组和miR-486-5p mimic+FOXO1组。采用miR-486-5p mimic和(或)FOXO1处理伤面,观察伤面愈合情况。在烧伤后分别于不同时间点[止血(0 d)、炎症(1 d)和增殖(7 d和14 d)]采用原位杂交技术和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测伤面边缘组织中miR-486-5p表达部位和水平,免疫荧光染色法检测FOXO1表达。通过荧光素酶报告分析FOXO1与miR-486-5p结合关系。构建miR-486-5p过表达或敲低人永生化角质形成细胞(human HaCaTKeratinocytes,HaCaT)模型,通过EdU法和划痕试验考察细胞的增殖和迁移情况,Western blot法分析细胞中FOXO1蛋白表达。结果miR-486-5p在小鼠深二度烧伤伤面愈合过程中显著上调。体内模型显示,miR-486-5p通过抑制FOXO1表达促进伤面愈合。在HaCaT细胞中,miR-486-5p过表达增加了细胞的增殖和迁移,抑制miR-486-5p则具有相反的效果。FOXO1是角质形成细胞中miR-486-5p的直接靶标。FOXO1过表达导致HaCaT细胞的EdU阳性细胞的百分比和伤面愈合降低,并且逆转了miR-486-5p对EdU阳性细胞和伤面愈合的诱导作用。结论miR-486-5p是深二度烧伤创面修复的关键调节剂,通过抑制FOXO1表达促进角质形成细胞的增殖和迁移。

FoxO家族在心血管疾病中的作用研究进展

叉头框转录因子(Fox)O家族是Fox家族的重要成员,在细胞增殖、代谢、凋亡、氧化应激等方面具有重要作用,近年来备受关注。FoxO家族可在多种病理生理因素作用下调控心血管系统的生物学特性,其中FoxO1、FoxO3a和FoxO4是维持心脏功能和调节心脏应激所必需的转录因子,调控这些转录因子可直接影响心血管疾病的结局。但目前FoxO家族成员在心血管疾病中的作用机制尚未完全阐明,未来深入研究各成员在心血管疾病中的作用,可以为心血管疾病的治疗和预防提供新方向。

冠心病合并糖尿病患者外周血FoxO6、NF-κB的相关性及其与PCI术后支架内再狭窄的关系

目的探讨冠心病(CHD)合并糖尿病(DM)患者术前外周血叉头框转录因子O亚族6(FoxO6)、核因子-κB(NF-κB)对于经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄(ISR)的预测价值。方法选取琼中黎族苗族自治县人民医院心内科2020年1月至2022年1月收治的78例CHD合并DM患者,均行PCI治疗,所有患者术后随访6个月,根据期间是否发生ISR分为ISR组和正常组,检测外周血FoxO6、NF-κB水平,分析二者相关性,并分析二者对于ISR的预测价值。结果CHD合并DM患者不同DM病情程度FoxO6、NF-κB水平比较差异有统计学意义(t=18.811、10.501,P<0.05),不同CHD病情程度FoxO6、NF-κB水平比较差异有统计学意义(F=7.102、7.870,P<0.05),且随着CHD及DM病情程度加重,FoxO6、NF-κB水平也随之升高。相关性分析结果显示,CHD合并DM患者外周血FoxO6、NF-κB存在正相关性(r=P<0.05)。ISR组与正常组患者比较,冠脉病变严重程度、冠脉狭窄程度、DM严重程度、外周血FoxO6、NF-κB水平比较差异有统计学意义(t=7.941、5.038、9.180、6.328、5.038,P<0.05),两组患者性别、年龄、CHD病程、DM病程、支架直径、支架个数比较差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,冠脉病变严重程度、冠脉狭窄程度、DM严重程度、外周血FoxO6、NF-κB为PCI术后ISR的危险因素。ROC结果显示,FoxO6、NF-κB二者联合预测CHD合并DM患者PCI术后ISR的灵敏度0.902、特异度0.929、AUC分别为898(95%CI 0.860~0.935),大于单一检测(P<0.05)。结论CHD合并DM患者随着病情程度价值外周血FoxO6、NF-κB随之升高,并对于预测PCI术后ISR具有显著价值。

FoxO转录因子参与糖尿病心肌病脂代谢研究进展

糖尿病性心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并发症发病和死亡的主要原因,脂代谢异常是导致DCM纤维化进而引起舒张功能障碍的重要原因。叉头框转录因子O(Forkhead transcription factor O,FoxO)在糖尿病早期心肌脂代谢紊乱中承担重要角色。FoxO通过转录代谢相关靶基因参与糖尿病早期糖异生、胰岛素抵抗、心肌脂代谢紊乱以及由代谢异常引发的氧化应激与炎症。本文重点阐述FoxO(主要是FoxO1)参与糖尿病心肌脂代谢过程,为预防治疗糖尿病心血管并发症提供新的角度。

转录因子Fox家族与心肌梗死关系的研究进展

转录因子Fox家族在心肌梗死中发挥重要作用。FoxP1既调控巨噬细胞,加重炎症反应;也促进内皮细胞增殖,增加血管新生。FoxO3发挥抗氧化应激和调控自噬作用,同时促进心脏微血管内皮细胞凋亡或抑制心肌细胞凋亡。FoxO4和FoxO6促进心肌细胞凋亡和氧化应激。本文对Fox家族在心肌梗死中的作用及其分子机制作一综述,以期对心肌梗死的诊疗提供新方向。

FOXP3减少瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原分泌及相关机制初探

目的:探讨在瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblasts,KFB)中叉头样转录因子3(Forkhead-like transcription factor 3,FOXP3)对真皮胶原蛋白沉积及纤维化的影响及相关机制。方法:免疫组化检测瘢痕疙瘩组织中I型胶原蛋白(Collagen type I,COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen typeⅢ,COL3)、IL-6、TGF-β_(1)、FOXP3的表达。体外分离培养KFB,并采用腺病毒过表达FOXP3或给予TGF-β_(1)抑制剂处理。通过Western blot检测对照组、过表达组以及对照组和抑制剂组的COL1、COL3的表达,ELISA检测TGF-β_(1)、IL-6的表达,Masson染色观察胶原沉积情况。结果:与对照组相比,实验组中的COL1、COL3、IL-6、TGF-β_(1)蛋白水平升高,FOXP3蛋白水平降低。经过表达FOXP3或TGF-β_(1)抑制剂处理后,KFB的TGF-β_(1)和IL-6表达降低,胶原蛋白沉积减少。结论:在KFB中FOXP3可能通过抑制TGF-β_(1)的表达,减少组织纤维化和胶原蛋白沉积。

YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

Wenshen Yangxue decoction(温肾养血方) promotes follicular development in aged female mice via stimulation of the silent information regulator 3/forkhead transcription factor O1 3a pathway

OBJECTIVE:To primarily explore the effect and mechanism of Wenshen Yangxue decoction(温肾养血方)in promoting follicular development in elderly female mice.METHODS:Fifty Institute of Cancer Research mice were randomly divided into blank,controlled ovarian hyperstimulation(COH),low-dose Wenshen Yangxue decoction,medium-dose Wenshen Yangxue decoction,and high-dose Wenshen Yangxue decoction groups,with 10 mice in each group.The number of ovulations,number of fertilizations,mitochondrial adenosine triphosphate(ATP)level,and mitochondrial DNA(mt DNA)of oocytes in each group were compared.Reverse transcriptionpolymerase chain reaction and Western blotting were used to detect the m RNA and protein expression levels of silent information regulator 3(Sirt3)and forkhead transcription factor O13a(FOXO3a).RESULTS:Wenshen Yangxue decoction significantly increased the number of ovulations in mice(P<0.05)and promoted the formation of fertilized eggs.The ATP level and mt DNA copy number of mice oocytes in the highdose groups were significantly higher than those in the COH group(P<0.05).Wenshen Yangxue decoction significantly increased the m RNA and protein levels of Sirt3 and FOXO3a in mouse oocytes.CONCLUSION:Wenshen Yangxue decoction promoted the development of follicles in elderly female mice,increased the number of ovulations and improved fertility.Its mechanism may be related to increased mitochondrial energy metabolism and regulation of the Sirt3/FOXO3a pathway.

老年肺癌放化疗期间并发肺部感染危险因素及其与FOXO3A基因多态性的关联

目的 探讨老年肺癌(LC)放化疗患者肺部感染的危险因素及其与叉头盒O组转录因子3A(FOXO3A)基因特定位点多态性的关联。方法 选取2020年6月-2023年6月在南阳医学高等专科学校第一附属医院就诊的老年LC患者213例,按照治疗期间肺部感染发生情况分为感染组(n=47)和非感染组(n=166),对感染病原菌分布进行分析,检测两组FOXO3A基因rs12212067位点多态性;多因素Logistic回归分析接受放化疗期间发生肺部感染的危险因素。结果 47例感染患者共分离出56株病原菌,其中革兰阴性菌35株,占比为62.50%;感染组FOXO3A基因rs12212067位点TT、TC基因型频率和T等位基因频率均高于非感染组(P<0.05);感染组患者年龄、糖尿病史、TNM分期Ⅳ期、治疗方案为放疗或(和)化疗占比、化疗周期>4周期、无预防性使用抗菌药物占比均高于非感染组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄和化疗周期是接受放化疗的老年LC患者发生肺部感染的危险因素(P<0.05),预防性使用抗菌药物是保护因素(P<0.05)。结论 老年LC放化疗患者肺部感染以革兰阴性菌为主,FOXO3A基因rs12212067位点TT基因型是发生肺部感染的危险基因型,年龄和化疗周期是接受放化疗期间发生肺部感染的危险因素,预防性使用抗菌药物是保护因素。

参附注射液对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察参附注射液对大鼠失血性休克(HS)致肺损伤的影响并探讨潜在机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠36只,16~17周龄,体重400~600 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(SH组)、失血性休克组(HS组)和参附注射液组(SF组),每组12只。SH组麻醉后仅分离出右股静脉和股动脉,不行动静脉置管,HS组和SF组制备HS大鼠模型。HS组经静脉导管进行液体复苏,复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与生理盐水10 ml/kg,SF组复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与参附注射液10 ml/kg,灌注时间约60 min。于术后24、48 h随机处死6只大鼠,取肺组织检测湿重与干重比(W/D),采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)浓度,采用PCR法检测肺组织视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量,采用Western blot法检测RORγt、Foxp3、HIF-1α、水通道蛋白1(AQP1)和AQP5蛋白含量,肺组织行HE染色后在光镜下观察病理学改变并行肺损伤评分。结果与术后24 h比较,术后48 h SF组肺组织W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与SH组比较,术后24、48 h HS组和SF组W/D、IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β浓度、RORγt、Foxp3和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显升高(P<0.05),AQP1、AQP5蛋白含量明显降低(P<0.05),光镜下可见肺泡结构破坏,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量炎性细胞。与HS组比较,术后24、48 h SF组W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1和AQP5蛋白含量均明显升高(P<0.05),光镜下可见肺泡结构紊乱改善,水肿程度减轻,炎性细胞数量减少。结论参附注射液可调节促炎因子IL-6、IL-17与抗炎因子IL-10、TGF-β平衡,升高肺组织AQP1、AQP5蛋白含量,降低肺组织W/D和肺损伤评分,减轻HS大鼠肺损伤,机制可能与调节HIF-1α-RORγt/Foxp3平衡有关。

宫颈癌淋巴结转移患者PD-L1与TILs表达水平及其与预后的关系

目的探讨宫颈癌淋巴结转移患者程序性死亡配体-1(PD-L1)、肿瘤浸润淋巴细胞亚群(TILs)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2007年1月至2013年9月在梅州市人民医院诊治并接受宫颈癌根治性切除术后发生淋巴结转移的101例患者作为研究对象。采用免疫组织化学法检测PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、叉头翼螺旋转录因子3(Foxp3)^(+)TILs表达水平。比较不同PD-L1表达水平患者临床病理特征差异;采用Spearman相关对PD-L1表达水平与TILs密度的相关性进行分析;采用Kaplan-Meier生存分析法分析PD-L1表达水平、TILs密度及密度比值与累计生存率的关系;采用Cox比例风险模型分析患者预后的独立影响因素。结果PD-L1表达于肿瘤细胞的细胞质和(或)细胞膜,阳性表达率为34.65%(35/101);CD4^(+)TILs计数为94(45,190);CD8^(+)TILs计数为63(31,117);FoxP3^(+)TILs计数为6.0(2.5,13.5);FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值为0.109(0.036,0.193)。PD-L1阳性表达组与PD-L1阴性表达组CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达情况与CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度均呈正相关(r=0.305、0.222、0.222,P=0.002、0.026、0.026)。生存组与死亡组CD4^(+)TILs密度、CD8^(+)TILs密度和PD-L1表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。手术年龄<50岁、PD-L1阳性表达、CD4^(+)TILs高密度、CD8^(+)TILs高密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs低比值患者累计生存率均高于手术年龄≥50岁、PD-L1阴性表达、CD4^(+)TILs低密度、CD8^(+)TILs低密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs高比值患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值与宫颈癌淋巴结转移患者预后均有关,其中PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是宫颈癌淋巴结转移患者预后的独立保护因素。

慢病毒介导shRNA干扰FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠ的表达

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体并感染猪成肌细胞,用real-time PCR和Western印迹法检测FoxO1和肌球蛋白重链Ⅰ(myosin heavy chainⅠ,MyHCⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.测序结果证实,Lenti H1 RNAi FoxO1质粒构建正确,获得Lenti H1 RNAi FoxO1病毒颗粒滴度为8×107U/mL.病毒感染猪成肌细胞后,与对照组相比,siFoxO1a组FoxO1在转录水平上降低了58%,蛋白水平降低了77%,而MyHCⅠmRNA表达量提高了2.58倍.结果表明,本研究成功构建了猪FoxO1基因shRNA干扰慢病毒载体,且沉默FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠmRNA的表达.