白藜芦醇对糖尿病白内障大鼠正沉默信息调节因子2相关酶1基因表达的影响

目的探讨白藜芦醇对糖尿病白内障大鼠晶状体正沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)基因表达的影响。方法 80只Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组及白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组。糖尿病模型组、白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组一次性腹腔注射链脲菌素(STZ)(60 mg/kg)制备糖尿病大鼠模型。成模后低剂量组每日20 mg/kg,高剂量组每日100 mg/kg予白藜芦醇灌胃。裂隙灯显微镜照相机记录各组晶状体变化。12周实验结束时测定各组大鼠晶状体丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠晶状体SIRT1、肿瘤抑制因子P53、叉头转录因子1、核转录因子κB(NF-κB)表达情况。结果糖尿病模型组大鼠晶状体均发生不同程度混浊,甚至完全混浊,形成白内障。白内障糖尿病大鼠晶状体MDA(7.96±0.51)nmol/mg·prot较正常对照组(4.21±0.27)nmol/mg·prot升高(P<0.01),糖尿病白内障大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(31.92±5.03)和(7.43±1.53)u/mg·prot]较正常对照组[(61.86±6.17)和(13.61±2.27)u/mg·prot]降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体MDA(4.64±0.42)nmol/mg·prot较白内障糖尿病大鼠晶状体(7.96±0.51)nmol/mg·prot降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(52.41±6.54)和(12.76±1.72)u/mg·prot]较白内障糖尿病大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(31.92±5.03)和(7.43±1.53)u/mg·prot]增高(P<0.01)。白内障糖尿病大鼠晶状体SIRT1 mRNA表达(0.187±0.034)较正常对照组大鼠(0.523±0.089)降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体SIRT1 mRNA表达(0.497±0.072)较白内障糖尿病大鼠晶状体(0.187±0.034)增强(P<0.01)。白内障糖尿病大鼠晶状体P53、叉头转录因子1、NF-κB mRNA表达(0.816±0.153)、(1.269±0.231)、(0.896±0.029)较正常对照组(0.592±0.104)、(0.674±0.112)、(0.495±0.008)增强(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组糖尿病大鼠晶状体P53、叉头转录因子1、NF-κB mRNA表达(0.609±0.107)、(0.713±0.121)、(0.397±0.018)较白内障糖尿病大鼠(0.816±0.153)、(1.269±0.231)、(0.896±0.029)降低(P<0.01)。结论白藜芦醇可能通过调节SIRT1表达,进一步调节下游基因P53、叉头转录因子1、NF-κB的表达,抑制和延缓晶状体上皮细胞凋亡,延缓糖尿病大鼠白内障的发生发展。

FOXO转录因子参与银屑病表皮增殖失调

转录因子FOXO是叉头框基因家族的成员,其编码的FOXO蛋白家族在细胞代谢、增殖和凋亡等方面发挥重要作用。3-磷酸肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)和丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路以及microRNA等参与FOXOs翻译后修饰调节,调控FOXOs转录活性和亚细胞定位。FOXOs可能参与调控银屑病皮损角质形成细胞的过度增殖,但具体机制尚不明确。该文对FOXOs参与银屑病表皮过度增殖的可能机制进行综述。

实时定量PCR在先天性小睑裂综合征患者FOXL2基因检测中的应用

目的应用实时定量PCR技术鉴定先天性小睑裂综合征(BPES)患者中FOXL2基因的突变和(或)缺失。方法于2017年8月收集黑龙江省1个BPES患病家系,采集外周血提取基因组DNA,用PCR直接测序法和实时定量PCR法筛查FOXL2基因的全部外显子。结果在此例患病家系中,用PCR直接测序法排除了基因内突变,用实时定量PCR方法确定了FOXL2基因全缺失。这些变异在未患病亲属和50名正常人中并未被检测到。结论本研究是应用实时定量PCR技术检测中国BPES患者FOXL2基因缺失的报道,这项技术丰富了BPES患者的分子遗传学诊断方法。

实验性牙周炎大鼠体内外周血及牙周组织中Th17/Treg的检测

目的初步探讨实验性牙周炎大鼠外周血及炎症牙周组织中辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的表达。方法采用丝线结扎并牙龈卟啉单胞菌菌液涂抹法建立SD大鼠牙周炎模型,采集外周血、龈沟液以及颌骨样本。体视显微镜及苏木精-伊红染色法观察牙周组织病理改变,流式细胞术检测外周血Th17细胞与Treg细胞的比例,酶联免疫吸附法检测外周血及龈沟液中白细胞介素17(IL-17)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测牙周组织中RORγt、Foxp3 m RNA的表达。应用SPSS 22.0软件独立样本t检验及方差分析对数据进行统计学分析。结果实验大鼠牙周组织病理改变符合牙周炎病理改变特征,牙槽骨吸收明显。实验组外周血Th17(F=30.88,P=0.00)、Treg细胞(F=147.03,P=0.00)比例以及Th17/Treg比率较对照组均显著上升(F=219.53,P=0.00);实验组牙周组织中RORγt(F=35.61,P=0.04)和Foxp3m RNA(F=216.60,P=0.01)表达较对照组表达显著上升;RORγt/Foxp3 m RNA比率较对照组升高,但差异无统计学意义(F=0.63,P=0.44);实验组外周血血清中IL-10浓度较对照组显著上升(F=6.41,P=0.02),而IL-17(F=0.08,P=0.78)、TGF-β(F=3.48,P=0.06)浓度与对照组差异无统计学意义;实验组龈沟液中IL-17(F=9.03,P=0.01)较对照组显著上升;IL-10(F=5.85,P=0.08)及TGF-β含量(F=9.28,P=0.06)含量较对照组升高,但差异无统计学意义。结论实验性牙周炎大鼠外周血及牙周炎症组织中Th17与Treg表达均显著上调,可能与牙周炎症组织病理改变以及相关全身系统性疾病存在相关性。

茜草醇提物对佐剂性关节炎大鼠肝脏、脾脏损伤及Foxp3的影响

目的：以茜草醇提物干预AIA大鼠模型，探讨茜草醇提物对佐剂性关节炎（AIA）大鼠模型肝脏、脾脏损伤及脾脏组织中叉状头／翅膀状螺旋转录因子3（Foxp3）的影响。方法：将72只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松（0．125mg·kg^-1）组和茜草醇提物低、中、高剂量组（2．5，5，10g·kg^-1），每组12只。适应性喂养7d后，于其余5组大鼠右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂（CFA）0．1mL致炎，复制AIA模型，正常组给予等体积的蒸馏水，连续灌胃给药21d。给药期间，用排水法测定致炎侧大鼠足体积，观察大鼠行为、体质量增长情况。给药21d后，计算大鼠足肿胀度、脏器指数，检测肝脏组织中超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA），髓过氧化物酶（MPO），一氧化氮（NO）水平，苏木素一伊红（HE）染色观察肝脏、脾脏病理组织学变化，免疫组化法检测大鼠脾脏组织内Foxp3蛋白表达情况。结果：与正常组比较，模型组大鼠足肿胀显著升高，脾脏、肝脏脏器指数明显降低，肝脏组织中MDA和MPO含量明显增加，脾脏中Foxp3蛋白水平显著降低（P〈0．05，P〈0．01）。与模型组比较，茜草醇提物中、高剂量组及地塞米松组大鼠足肿胀明显降低（P〈0．05，P〈0．01），但茜草醇提物低剂量组无显著性差异；茜草醇提物低、中、高剂量组大鼠脾脏、肝脏脏器指数显著增加（P〈0．01）；改善肝脏及脾脏组织炎症变化，茜草醇提物低、高剂量组及地塞米松组均可以明显降低MDA和MPO的含量（P〈0．05，P〈0．01），仅茜草醇提物高剂量组及地塞米松组显著升高SOD活性和降低NO的含量（P〈0．01），茜草醇提物中、高剂量组及地塞米松组明显上调脾脏中Foxp3蛋白水平（P〈0．05，P〈0．01）。结论：茜草醇提物具有较好的抗炎作用，表明茜草醇提物可以改善AIA大鼠肝脏及脾脏损伤，增加肝脏中MDA和MPO的含量，并提高脾脏组织中Foxp3的表达水平来增强机体的免疫耐受能力。

黄芪甲苷调节PI3K/Akt/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生

目的:探讨黄芪甲苷对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝损伤保护潜在机制及肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1),磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)和葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达的影响。方法:6周高糖高脂饮食后,链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射(0.035 g·kg^-1)建立T2DM大鼠模型,随机分为正常组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组及二甲双胍组。黄芪甲苷低、中、高剂量组灌胃黄芪甲苷0.02,0.04,0.08 g·kg^-1·d^-1,二甲双胍组灌胃二甲双胍0.2 g·kg^-1·d^-1;给药8周后,于末次灌胃24 h禁食不禁水后处死,测血清肝生化指标,肝脏指数等;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理形态学变化;马松(Masson)染色观察纤维化程度;过碘酸希夫(PAS)染色反应观察细胞内糖原等变化;免疫组化及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肝中PI3K/Akt/FoxO1信号蛋白及PEPCK,G6Pase蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高(P<0.01),肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)的含量显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低(P<0.01),大鼠体质量显著减轻(P<0.01),PI3K/Akt/Fox O1信号减弱(P<0.01),PEPCK,G6Pase蛋白表达水平显著增强(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组及二甲双胍组肝功能指标ALT,AST,TC,TG的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),大鼠体质量明显增加(P<0.05,P<0.01),肝组织Fox O1,PEPCK及G6Pase蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Fox O1的磷酸化水平明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过调节PI3K/Akt/Fox O1信号通路抑制高脂高糖加小剂量STZ诱导T2DM肝糖异生,从而起到延缓T2DM大鼠肝脏损伤作用。

补气通窍方调控Treg/Th17平衡缓解变应性鼻炎大鼠鼻黏膜炎性损伤的机制

目的:探究补气通窍方通过调控Treg/Th17平衡缓解变应性鼻炎(AR)炎性损伤的分子机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、鼻炎康组,每组10只。卵白蛋白抗原佐剂混悬液复制AR大鼠模型。空白组不作任何处理,模型组4 mL/d纯净水灌胃,鼻炎康组给予鼻炎康462.5 mg·kg;·d;灌胃,中药组给予补气通窍方57.55 g·kg;·d;进行灌胃,共7 d。干预结束后HE染色观察各组大鼠鼻黏膜病理变化,ELISA检测血清中IgE、IL-10、IL-17、TGF-β水平;RT-PCR和Western Blot检测脾脏Foxp3、TLR4 mRNA和蛋白表达情况。结果:中药组可以下调TLR4水平,并且使AR大鼠紊乱的Treg/Th17平衡恢复正常,同时抑制血清中炎症反应因子IgE、IL-17水平,还可以加强IL-10、TGF-β的分泌,促进Treg细胞的分化,并修复AR大鼠鼻黏膜的病理损伤。结论:补气通窍方可以修复鼻黏膜病理损伤,降低炎症因子的表达,缓解AR大鼠鼻黏膜炎性损伤,其机制可能与抑制TLR4水平促进恢复Treg/Th17平衡有关。