质粒拷贝数对宋内氏菌I相O-抗原表达的影响

试图通过提高质粒拷贝数来提高宋内I相O 抗原的表达水平 ,先将宋内I相O 抗原基因亚克隆至高拷贝的pUC18和pGEM3Z ,但没能找到相应的阳性转化子 ,可能O 抗原基因在高拷贝质粒上表达水平太高对宿主产生毒性效应。再将其亚克隆至中等拷贝的pAT15 3,虽能找到阳性转化子 ,但表达水平仍不能满足以后实验的需要 ,表明质粒拷贝数与I相O 抗原的表达水平密切相关 ,要有效地表达宋内I相O 抗原 。

宋氏Ⅰ相抗原质粒的分子克隆及与Ⅰ相抗原突变株的互补检测

用“鸟枪”法克隆宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原质粒 pFEG 001,获得13株重组子。将其分别导入宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变株 BW 201～204进行互补检测,发现重组质粒 pBL 108可反式互补于Ⅰ相抗原突变质粒 paW 204,恢复Ⅰ相抗原的表达;该重组质粒中的插入片段分子量为1.0kb。互补结果提示该片段内至少含有1个与Ⅰ相抗原表达有关的基因,据此推测宋氏Ⅰ相抗原的表达受多基因控制。

宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变菌株的构建和鉴定

宋氏Ⅰ相抗原是由宋氏痢疾杆菌的毒力质粒决定的。应用转座子Tn3和Tn5分别对宋氏Ⅰ相抗原质粒进行转座试验,获得16株Ⅰ相抗原突变菌株,用内切酶对Tn3插入突变质粒进行分析,发现宋氏Ⅰ相抗原质粒pFEG 0011被Tn3插入后,其Sal Ⅰ第1及第2片段均发生插入突变而不能表达Ⅰ相抗原,表明该2个片段均系与Ⅰ相抗原表达有关的DNA序列,由此推测Ⅰ相抗原表达的有关基因可能是分散的或分布较大的范围。