A Novel Lignan Glucoside from Forsythia suspensa Vahl

从连翘果实中分离得到了五个单体化合物，根据理化性质和光谱分析鉴定为：对－羟基苯乙酸［ｐ－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ］（１），（＋）松脂素－β－Ｄ－葡萄糖甙［（＋）ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ］（２），（＋）表松脂素－４－β－Ｄ－葡萄糖甙［（＋）ｅｐｉｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－４－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ］（３），（＋）松脂素单甲基醚－β－Ｄ－葡萄糖甙［（＋）ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ］（４），连翘甙［ｐｈｉｌｙｒｉｎ］（５）。其中３未见文献报道。

连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的试管苗快速繁殖

【目的】连翘是中国常用中草药,也是庭院绿化的常用树种,需求量较大。建立连翘（Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl）的试管苗快速繁殖体系,以期为连翘的大规模栽培育种奠定基础。【方法】以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA与NAA诱导连翘幼茎外植体再生芽的发生;以1/2 MS为基本培养基,添加IAA、IBA或NAA等单一激素,诱导再生芽生根。【结果】结果表明,BA与NAA的比例对于新芽发生有重要影响,NAA的存在通常不同程度导致愈伤组织的发生,当NAA与6-BA比例达到2︰1时,茎段外植体完全脱分化形成愈伤组织。而不含有NAA,即仅含有6-BA单一激素情况下,更有利于芽的发生。对于生根诱导,低浓度IAA或NAA（0.1mg/L）均不能诱导连翘试管苗生根,高浓度（0.5mg/L）会导致茎基部先发生愈伤化,之后才有根从愈伤组织处长出。IBA在0.1~0.5mg/L范围内,均可以诱导90%以上的再生小芽生根。【结论】以连翘的幼茎为外植体诱导连翘的试管苗快速繁殖,MS＋6-BA 0.5 mg/L为最佳的芽诱导培养基;1/2 MS＋IBA 0.2mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率达到90%以上。

Three New Compounds from Forsythia Suspensa (Thunb.) Vahl

Three new compounds, suspenolic acid (1), forsythenside A (2), and forsythenside B (3) have been isolated from the fruits of Forsythia suspensa. Their structures were elucidated by spectral methods including IR, H-1- and C-13-NMR, DEPT, H-1-H-1 COSY, H-1-C-13 COSY, NOE difference, HMBC, FABMS, CIMS, and chemical reactions.

Hypoglycemic Effect of Forsythia suspensa Leaves on Diabetic Mice

[Objective] This study aimed to investigate the hypoglycemic effect of Forsythia suspensa leaves in diabetic mice. [Method] The model of hyperglycemia mice were obtained by injecting streptozotocin intraperitoneally to study the effect of F. suspensa leaves on lowering blood sugar of hyperglycemia mice and normal ani- mals. [Result] F. suspensa leaves could antagonize the streptozotocin-reducing mice hyperglycemia and significantly reduce the fasting blood glucose level of diabetic mice. [Coaclusion] F. suspensa leaves exhibits a good therapeutic effect on diabetic mice and has a good development prospect.

A new forsythenside from Forsythia suspensa

A new forsythenside, 4-hydroxy-4-[8-[[1-[（4-hydroxyphenyl）acetyl]-β-D-glucopyranosyl-6-]oxy]ethy1]-2,5-cyclohexadien-1- one, named forsythenside F, was isolasted from the plant of Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl. The structure of the new compound was established on the basis of various spectroscopic analysis, including ^1H NMR, ^13C NMR, 2D NMR techniques （HMBC and HSQC）, and HR-ESI-MS.

The updated weeping forsythia genome reveals the genomic basis for the evolution and the forsythin and forsythoside A biosynthesis

Weeping forsythia (Forsythia suspensa,Oleaceae) is a deciduous broad-leaved tree species distributed in the warm temperate zone of China.However,the species still lacks a chromosome-level genome.In this study,the former draft genome (Accession No.WIPI00000000) of weeping forsythia was assembled into 14 chromosomes with a 712.9 Mb genome size.Weeping forsythia underwent a and b whole-genome duplication events.After the divergence between weeping forsythia and Olea europaea,1 453 gene families had a significant expansion,and 1 146 gene families had a significant contraction.The enrichment pathways and ontologies of expanded genes suggested that the tillering,photosynthesis and growth capacity of weeping forsythia were enhanced after the divergence of weeping forsythia and O.europaea.The contracted genes suggested that the resistance of weeping forsythia to cold and drought was weakened.The last glacial period led to a significant decline in the effective population size of weeping forsythia.Forty-six candidate genes were identified for the synthesis of the forsythin and forsythoside A by genomic and transcriptomic data.In this study,we improved the previous draft genome of weeping forsythia.Our genome will provide genomic resources for the subsequent evolution and breeding research of weeping forsythia.

连翘挥发油化学成分、药理作用及其开发利用研究进展

连翘作为我国常用大宗中药材,具有清热解毒、消肿散结、疏散风热的功效。现代药理学研究表明,挥发油是连翘发挥药理作用的主要物质基础之一。连翘挥发油包含众多不同类型的化学成分,如萜类、烷烃类、烯烃类、醇类、醛类、酮类等,具有解热镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等广泛的药理活性。因此,连翘挥发油开发利用前景广阔,在医药、仓储防护、食品保鲜、化工及化妆品行业中均展现出较高的开发利用价值。基于对连翘挥发油研究进展的总结,对其化学成分、药理作用及开发利用现状等方面进行综述,并对其发展前景进行展望,以期为连翘质量控制及连翘挥发油的深入研究、开发和利用提供参考。

连翘种子品质检验及质量分级标准研究

目的建立连翘种子品质检验方法,制订连翘种子质量分级标准。方法通过测定不同产地连翘种子的生活力、净度、发芽率、含水量、千粒重、形态等指标,对16份来自全国连翘主产地的连翘种子进行品质检验,并且使用SPSS软件对所得数据进行K-均值聚类分析,初步制订连翘种子的质量分级标准。结果连翘一级种子黑褐色、圆润饱满,净度≥90%,千粒重≥3.2 g,含水量≤6.2%,生活力≥85%,发芽率≥85%;二级种子褐色、较饱满,净度≥75%,千粒重≥2.7 g,含水量≤5.5%,生活力≥65%,发芽率≥60%;三级种子黄棕色、瘦瘪,净度≥40%,千粒重≥2.2 g,含水量≤4.3%,生活力≥45%,发芽率≥35%。结论本研究制订了连翘种子分级标准,可为连翘种子的质量评价和人工栽培提供参考依据。

连翘叶茶对肝癌细胞增殖和迁移功能的影响及其作用机制

【目的】探究连翘叶茶粗提物及其主要成分连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3增殖和迁移功能的影响及其作用机制。【方法】利用水提法提取连翘叶绿茶和红茶,HPLC方法检测连翘绿茶和连翘红茶中有效成分连翘苷、连翘酯苷A的含量。采用CCK8实验,探究两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3增殖的影响;利用两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A培养肝癌细胞LM3,通过细胞划痕实验,观察24、48、72、96 h细胞迁移情况,检测两种连翘叶茶粗提物、连翘苷和连翘酯苷A对肝癌细胞LM3迁移的影响;使用RT-PCR技术,检测增殖迁移相关基因Ki-67、Erk、PI3K和mTOR的表达,揭示连翘叶茶粗提物及其主要成分连翘苷和连翘酯苷A影响肝癌细胞增殖迁移功能的分子机制。【结果】连翘叶绿茶和红茶粗提物、连翘苷均显著抑制肝癌细胞LM3的增殖和迁移,连翘酯苷A显著抑制肝癌细胞LM3的迁移。其中,连翘绿茶粗提物在低、中和高浓度,培养时间24、48、72 h,均可明显抑制肝癌细胞增殖和迁移。连翘红茶粗提物随着浓度升高对LM3细胞增殖和迁移的抑制效果不断增强,在高浓度72 h抑制效果最佳。RT-PCR结果分析,其主要作用机制可能是通过降低Ki-67基因表达量来实现的。【结论】连翘叶绿茶和连翘叶红茶粗提物及连翘苷和连翘酯苷A均能够通过降低Ki-67表达抑制肝癌细胞LM3的增殖或迁移。

连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(剂量为400、600、800μg/mL),分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型,采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异,并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组(400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(400、600、800μg/mL),采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型,通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL)和连翘配方颗粒处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL),采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果与模型对照组比较,连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量(P<0.001)和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),升高斑马鱼的存活率(P<0.01或P<0.001);减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集(P<0.05或P<0.01或P<0.001);并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用,两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的mRNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外,其他作用均无明显差异。

基于最大熵模型和ArcGIS的山西省连翘品质区划研究

目的构建山西省连翘药材生态适宜区,研究山西省不同产地连翘的品质区划,为连翘药材合理种植及野生抚育提供参考。方法利用最大熵模型和ArcGIS软件对山西省连翘生态适宜性进行研究;通过筛选得到的主要环境因子结合不同产地连翘中连翘苷、连翘酯苷A的含量,构建基于连翘苷、连翘酯苷A与环境因子的山西省连翘药材的品质区划。结果山西省连翘药材生态适宜区主要分布在山西省南部地区,以临汾市、运城市、长治市、晋城市地区为主;连翘药材中连翘苷和连翘酯苷A总体含量分布自山西省南部至北部逐渐减少;综合品质以山西省南部地区较高,以临汾市、长治市、运城市和晋城市地区品质较高。结论本研究结果与实际调查结果一致,山西省南部为高品质连翘的适合种植区域,该结果可为连翘的规范化种植和野生抚育提供参考。

基于选择清除分析挖掘连翘异型花柱候选基因

连翘(Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl)为多年生木本植物,花柱二型具有自交不亲和性。挖掘连翘异型花柱发育候选基因,利于揭示连翘异型花柱的进化与发育机理。对40株长花柱型与短花柱型连翘植株进行全基因组重测序,检测样本基因组的SNP变异位点,开展选择清除分析。利用遗传分化系数Fst和核苷酸多态性πratio结合的方法筛选候选区域(前5%水平),对差异基因进行GO数据库和KEGG数据库功能注释分析,采用qRT-PCR对候选基因在花柱发育不同时期的表达量进行检测。选择清除分析显示受选择基因295个,主要在植物的生长发育以及代谢调控方面发挥重要作用。分析植物激素调节相关的部分通路,确定连翘异型花柱候选基因CYP734A1(EVM0010386)、BRI1(EVM0011829)、CYCD3(EVM0018316),基因表达结果显示CYP734A1基因在连翘短花柱发育的关键时期持续高表达,露冠期BRI1与CYCD3基因表达水平在短花柱型中显著高于长花柱型。本研究挖掘的候选基因在连翘长花柱与短花柱中存在差异表达,油菜素甾醇参与了连翘异型花柱的发育,是产生连翘花柱异型的原因之一。本研究为连翘异型花柱的进化以及遗传发育调控机制解析奠定基础并提供思路。

含连翘中成药组方用药规律的数据挖掘分析

目的探讨含连翘中成药的组方用药规律,为连翘的临床用药及进一步开发提供依据。方法收集整理2020版《中国药典》《新编国家中成药》与《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》中含连翘的中成药处方并建立数据库,运用数据挖掘技术对其进行频次分析、关联分析和聚类分析,以探索含连翘中成药的组方用药规律。结果获得含连翘中成药处方183个,共涉及302味中药,出现频数较高的前5味中药依次为连翘、甘草、黄芩、薄荷和金银花。药性频数较高的为寒、温,药味频数较高的为苦、辛,归经以肺、胃常见。含连翘中成药处方中使用频数最多的为清热药,其次为解表药、补虚药、化痰止咳平喘药。含连翘中成药中剂型以丸剂、片剂居多。结论以连翘-金银花为代表的清热解毒类中药在含连翘的中成药中应用较多,主要用于治疗肺系病类,与现代药理学研究结果一致。

连翘叶茶对大鼠肝硬化的影响及其机理研究

【目的】研究连翘叶茶粗提物及其茶水对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝硬化的影响,阐明不同剂量连翘叶茶粗提物及茶水对肠道菌群多样性的影响及其机理。【方法】30只雄性SD大鼠按照平均体重相近的原则随机分为对照组、模型组、低、中、高剂量连翘叶茶灌胃组和茶水组,采用皮下注射CCl_(4)+灌胃CCl_(4)橄榄油混合液的方法构建肝硬化大鼠模型,建模成功后给予不同剂量连翘叶茶粗提物灌胃及茶水组干预10 d后,收取血清进行ELISA检测,肝脏组织通过HE染色和提取RNA进行RT-PCR检测,粪便样本进行16S rRNA测序。【结果】连翘叶茶粗提物及茶水组均能显著改善大鼠肝硬化形态,尤其茶水组可明显逆转肝硬化状态,肝细胞脂肪变性、中央静脉周围炎性细胞浸润和汇管区纤维结缔组织增生较模型组均明显改善;连翘叶茶粗提物及茶水组可显著提高益生菌Rothia、Parabacteroides和Lactobacillus丰度,促进不饱和脂肪酸合成和酸呼吸通路的富集;连翘叶茶粗提物及茶水组可抑制血液中DAO、TLR-4、LPS内毒素因子的水平,促进抑炎因子1L-4及肠道屏障功能因子ZO-1表达,各组之间肠道微生物组成与DAO、LPS、1L-4和TLR4相关,其中与肠道损伤指标DAO相关性最大。【结论】连翘叶茶粗提物及茶水组可能通过改善大鼠肝硬化形态、减弱炎症反应、改善肠道微生态功能失调及保护肠屏障功能抑制肝硬化发生。

连翘提取物FS-4体外诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡作用的研究

为了探讨连翘提取物FS-4体外对胃癌细胞SGC-7901的促凋亡作用,试验采用MTT比色法观察了FS-4对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制情况,AO/EB双荧光染色法和透射电子显微镜观察了细胞凋亡的形态学变化,并通过流式细胞术测定细胞的凋亡率。结果表明:FS-4对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用具有剂量和时间依赖性,其36 h的半数抑制浓度(IC_(50))仅为3.23μg/mL;FS-4作用后细胞均出现典型的凋亡细胞形态;FS-4对细胞的诱导凋亡作用呈现明显的浓度依赖性。说明FS-4可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并具有诱导其凋亡的作用。

土壤等主要生态因子对连翘质量的影响

以在井陉地区仿野生种植的连翘同生群为试材,通过样地调查法收集地形、气候因子信息,对样地土壤元素含量进行测定,采用相关性、逐步回归、通径和决策等分析方法逐层剖析,研究了连翘药用成分含量与生态因子的数量关系,以期为该区基地化连翘种植、管理提供参考依据。结果表明:连翘苷与光照呈显著负偏相关,与有效钙呈显著正相关,光照为其主要主导因子,其次是有效钙;连翘脂苷与土壤含水量呈显著负相关,与有效镁呈显著正相关,土壤含水量是其主要主导因子,其次是有效镁;挥发油与速效磷呈显著正相关,速效磷是其主要主导因子。因此在山地环境进行连翘生态化种植过程中,应保证土壤养分含量,尤其是钙、镁、磷3种元素,在必要时进行施肥处理,并在采收时应选择较为干旱的天气,尤其避免降雨后或持续高温天气时采收。

基于MaxEnt和ArcGIS的山西省连翘适宜性区划研究

目的:掌握影响连翘生长的主要生态因子,对连翘在山西省的适宜区分布进行预测,为山西省连翘资源的合理布局提供参考。方法:采用山西省“第四次中药资源普查”数据库收录的连翘样点分布数据,通过查询中国数字标本馆并检索相关文献记录进行补充,将筛选后的210个连翘样点分布数据和生态因子添加到MaxEnt模型中运行,筛选出影响连翘地理分布的主要生态因子及贡献率。应用地理信息系统(ArcGIS)软件对山西省连翘生态适宜区进行划分。结果:建立的MaxEnt模型AUC值为0.908,表明模型预测结果准确,共筛选出温度季节性变化标准差、植被类型、最冷月最低温、最湿月降水量等23个生态因子,其中气候因子是影响连翘分布最重要的生态因子,其次是生物因子与地形因子,土壤因子的影响最小。山西省连翘潜在适宜区主要分布在南部山区,呈现从南到北适宜等级逐渐降低的趋势。在当前气候条件下山西省连翘最适宜区面积为12830 km^(2),适宜区面积为15467 km^(2),次适宜区面积为34410 km^(2),不适宜区面积为93993 km^(2)。结论:基于MaxEnt模型和ArcGIS软件预测山西省连翘适宜区分布状况,对山西省连翘资源的保护与合理布局具有一定参考价值。

连翘多糖纳米硒的制备及体外抗氧化和降血糖能力

利用水提醇沉法从连翘中提取了连翘多糖(FP),经硝酸-亚硒酸钠法制备了连翘多糖纳米硒(FP-SeNPs),采用UV-Vis、FTIR、XRD和SEM对其进行了表征。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(·DPPH)、羟基自由基(·OH)、2,2-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(·ABTS^(+))清除实验考察了FP-SeNPs的体外抗氧化能力。采用α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性抑制实验考察了FP-SeNPs的体外降血糖能力。结果表明,FP-SeNPs中硒含量为908 mg/kg,其形成了颗粒状分布的表面结构,改变了多糖的表面形态,但未破坏多糖的基本结构。FP-SeNPs的UV-Vis吸收光谱在270 nm处出现新峰,其XRD谱图在2θ=20°~30°内出现一个弥散峰,表明FP和SeNPs之间存在相互作用,形成了FP-SeNPs复合物。FP-SeNPs对·DPPH、·OH和·ABTS^(+)的清除能力和对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的活性抑制能力均呈浓度依赖性,质量浓度为1.6 g/L的FP-SeNPs溶液对·DPPH、·OH和·ABTS^(+)的清除率分别为91.98%、56.81%和87.44%,对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的活性抑制率分别为55.61%和72.73%,显著高于FP的自由基清除能力和酶活性抑制能力(P<0.05)。

连翘总黄酮提取工艺优化及抗炎活性研究

通过单因素试验和响应面试验设计,评价浸泡时间、料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间对连翘(Forsythia suspensa)总黄酮提取率的影响,建立数学模型,得出二次回归方程,预测连翘总黄酮提取的最佳工艺条件,并对新工艺提取的连翘总黄酮进行小鼠耳廓急性炎症肿胀抑制效果评价,测试连翘总黄酮提取物的抗炎活性。结果表明,最佳工艺条件为料液比1∶20、浸泡时间30 min、提取温度58℃、乙醇浓度60%、提取时间79 min。经验证,新工艺的平均提取率为14.54%。新工艺提取的连翘总黄酮提取液处理二甲苯急性致炎的小鼠耳廓的肿胀值为(15.61±2.73)mg,低于生理盐水处理后的肿胀值(17.21±2.65)mg,体外抗炎试验表明连翘总黄酮提取物可抑制小白鼠耳廓的炎症肿胀。引入浸泡环节的连翘总黄酮提取工艺具有提取率较高、稳定可靠的特点,新工艺提取的连翘总黄酮具有一定的抗炎效果。