连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(剂量为400、600、800μg/mL),分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型,采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异,并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组(400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(400、600、800μg/mL),采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型,通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL)和连翘配方颗粒处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL),采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果与模型对照组比较,连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量(P<0.001)和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),升高斑马鱼的存活率(P<0.01或P<0.001);减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集(P<0.05或P<0.01或P<0.001);并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用,两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的mRNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外,其他作用均无明显差异。

连翘叶提取物通过PXR/CYP17A1影响孕马血清促性腺激素在肝脏的代谢

【目的】研究连翘叶提取物(Forsythia suspensa leaves extract,FSLE)对孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)在肝脏中代谢的影响,改善在畜牧生产中因PMSG代谢缓慢而造成的氧化应激。【方法】采用半仿生酶醇法提取连翘叶有效成分,给予昆明雌鼠不同含量的FSLE进行动物体内试验;收集小鼠血清,进行酶联免疫吸附试验,检测各组小鼠血清中PMSG的质量浓度;采集小鼠肝脏组织,检测氧化应激指标谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛和过氧化氢的水平;采用Western-blot检测小鼠肝脏组织孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)和细胞色素酶P45017A1(cytochrome P45017A1,CYP17A1)蛋白的表达水平。【结果】FSLE可显著降低小鼠血清中PMSG的质量浓度,且可以减缓PMSG代谢引起的氧化应激。Western-blot结果显示:FSLE可显著下调小鼠肝组织中PXR和CYP17A1蛋白的表达。【结论】连翘叶提取物可能是通过下调肝脏中PXR和CYP17A1的表达减缓PMSG代谢引起的氧化应激。

连翘多糖提取工艺优化及抗氧化和抑菌活性研究

以连翘果实为原料,采用超声波辅助水提醇沉法提取连翘粗多糖,以连翘粗多糖提取率为考察指标,在单因素试验的基础上,采用正交试验对连翘粗多糖提取工艺进行优化,进而采用DPPH法和ABTS法考察连翘多糖体外抗氧化活性,抑菌圈法考察连翘多糖对大肠埃希菌等食物腐败菌的抑菌活性。结果表明,连翘果实多糖的最佳提取工艺为:料液比1:20(g:mL),提取温度70℃,超声功率70 W,提取时间50 min。在此条件下,连翘果实多糖提取率为1.98%。连翘粗多糖对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均有良好的生长抑制作用,且对金黄色葡萄球菌的抑制作用优于大肠埃希菌。当连翘粗多糖质量浓度为2.5 mg/mL时,大肠埃希菌的抑菌圈平均直径为10.46 mm,金黄色葡萄球菌抑菌圈平均直径为11.73 mm。连翘多糖对DPPH·和ABTS·有较好的清除能力,并呈现良好的质量浓度-效应关系。连翘多糖不但对食品腐败菌有一定的抑菌活性,还具有良好的体外抗氧化活性。可见,连翘粗多糖具有开发成食品防腐保鲜剂的潜能。

饲料用连翘叶不同提取物体外抗炎抑菌活性的比较研究

研究旨在比较饲料用连翘叶不同提取物的体外抗炎活性和抑菌活性。运用脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7研究连翘叶水提取物、连翘叶40%乙醇提取物和连翘叶80%乙醇提取物的体外抗炎活性,并通过抑菌试验对3种连翘叶提取物进行了体外抑菌活性的比较研究。采用Griess法检测一氧化氮(NO)生成水平,酶联免疫分析法(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成水平。并使用纸片扩散法和微量肉汤倍比稀释法测定抑菌活性、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度,结果表明:3种连翘叶提取物均能抑制NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的生成,抗炎活性80%乙醇提取物>40%乙醇提取物>水提取物。抑菌活性40%乙醇提取物>水提取物>80%乙醇提取物,3种连翘叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强。饲料用连翘叶乙醇提取物具有较好的体外抗炎活性和抑菌作用,可作为新型饲料添加剂开发应用。

连翘总黄酮提取工艺优化及抗炎活性研究

通过单因素试验和响应面试验设计,评价浸泡时间、料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间对连翘(Forsythia suspensa)总黄酮提取率的影响,建立数学模型,得出二次回归方程,预测连翘总黄酮提取的最佳工艺条件,并对新工艺提取的连翘总黄酮进行小鼠耳廓急性炎症肿胀抑制效果评价,测试连翘总黄酮提取物的抗炎活性。结果表明,最佳工艺条件为料液比1∶20、浸泡时间30 min、提取温度58℃、乙醇浓度60%、提取时间79 min。经验证,新工艺的平均提取率为14.54%。新工艺提取的连翘总黄酮提取液处理二甲苯急性致炎的小鼠耳廓的肿胀值为(15.61±2.73)mg,低于生理盐水处理后的肿胀值(17.21±2.65)mg,体外抗炎试验表明连翘总黄酮提取物可抑制小白鼠耳廓的炎症肿胀。引入浸泡环节的连翘总黄酮提取工艺具有提取率较高、稳定可靠的特点,新工艺提取的连翘总黄酮具有一定的抗炎效果。

HPLC法测定不同青翘提取物中连翘苷的含量

目的以青翘为原料,比较不同提取工艺的提取效果,并重点分析不同青翘提取物中连翘苷的含量。方法采取控制变量法原则,分别使用加热回流提取法、超声波提取法、微波萃取法等提取工艺进行提取;采用WelchUltimateC18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(B)—水(A),V(乙腈):V(水)=30:70;流速为1.0mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长为277nm,进样量为10μL。结果通过比较分析,选择加热回流法进行提取具有最佳的提取效果,青翘提取物经AB-8型树脂纯化后使用HPLC进行定量检测,其连翘苷含量为1.386‰。结论该提取方法简便、提取效果充分,HPLC检测方法灵敏、准确、重现性好,可作为青翘中连翘苷含量测定和质量控制的依据。

低共熔溶剂法提取连翘总黄酮工艺研究

为探索连翘(Forsythia suspensa)总黄酮提取最佳工艺,采用低共熔溶剂(DESs)法提取连翘不同部位(叶、果和茎)总黄酮;以氯化胆碱为氢键受体,分别以尿素、乙二醇、丙三醇、柠檬酸、葡萄糖、1,2-丙二醇和山梨醇为氢键供体,配置不同DESs组合,测定不同组合的总黄酮提取率;以DESs摩尔比和含水量及液固比、提取时间和提取温度为单因素变量,以总黄酮提取率为评价指标,采用响应面法确定最佳提取工艺。结果表明,氯化胆碱/丙三醇组合的总黄酮提取率最高;连翘果中的总黄酮含量最高,叶中的总黄酮含量次之,茎中的总黄酮含量最低。采用响应面法优化得到的最佳总黄酮提取工艺为氯化胆碱/丙三醇摩尔比1∶2、DESs含水量21%、液固比35 mL/g、提取时间125 min和提取温度70℃。采用低共熔溶剂法提取连翘不同部位总黄酮具有可行性,可为连翘总黄酮提取和深度开发提供理论和试验依据。

连翘绿茶不同加工阶段提取物的抑菌及抗氧化活性分析

连翘绿茶的加工主要包括鲜叶摊放、杀青、捻揉和干燥4个过程。为探究连翘绿茶不同加工阶段所得产物的提取物对食源性细菌的抑制作用及抗氧化活性,以连翘鲜叶、杀青叶、捻揉叶和干燥茶叶为研究材料,7种常见食源性细菌为供试菌株,通过测定抑菌圈直径和DPPH、ABTS+自由基清除率及总抗氧化能力,明确不同产物提取物的抑菌及抗氧化活性,为连翘绿茶加工工艺的进一步优化提供科学指导,也为连翘绿茶的深度开发提供理论依据。结果表明,连翘绿茶不同加工阶段提取物对蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显抑制效果,对大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌肠亚种、福氏志贺氏菌、阪崎氏年轻泰坦杆菌和痢疾志贺氏菌5种细菌无明显抑制效果,说明连翘鲜叶、杀青叶、捻揉叶和干燥茶叶对革兰氏阳性菌抑制效果较好,其中,鲜叶和干燥茶叶提取物对蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度均为125 mg/mL,鲜叶和干燥茶叶提取物对蜡样芽孢杆菌的最小杀菌质量浓度均为250 mg/mL,鲜叶和干燥茶叶提取物对金黄色葡萄球菌最小杀菌质量浓度均为500 mg/mL;杀青叶对DPPH、ABTS+自由基的清除率及总抗氧化能力最高,分别为98.2%、90.3%和92.5%。连翘绿茶具有良好的抗细菌能力,但其抗氧化活性经高温处理后有所降低。

连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 以肺癌NCI-H226细胞为研究对象,将细胞分为对照组,连翘醇提物低、中、高浓度组(5、10、20 mg/mL),激活剂组[10 mg/mL连翘醇提物+0.5μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路激活剂PMA],抑制剂组(10 mg/mL连翘醇提物+10μmol/L NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082),阳性对照组(20μg/mL顺铂),除对照组细胞不作干预外,其余各组细胞加入相应药物培养24 h。检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,并计算增殖率、迁移率、侵袭细胞数;检测细胞中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平。结果 与对照组比较,连翘醇提物各浓度组和阳性对照组细胞的增殖率、迁移率、侵袭细胞数以及细胞中p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与连翘醇提物中浓度组比较,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数及细胞中上述蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而激活剂组均显著升高(P<0.05)。结论 连翘醇提物可抑制肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

复合植物提取物对奶牛瘤胃细菌菌群的影响

[目的]研究饲粮中添加蒲公英、益母草、金银花和连翘4种植物的乙醇提取物对泌乳期荷斯坦奶牛瘤胃细菌菌群的影响。[方法]采用完全随机试验设计,将24头泌乳期荷斯坦奶牛随机分为对照组和试验组,每组12头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+0.3%/(头·d)复合植物提取物。试验期共75 d,预试期15 d,正试期60 d。于试验正式期第60天通过口腔采集奶牛瘤胃液,提取瘤胃液样品总DNA,利用16S rDNA序列分析技术研究饲粮中添加复合植物提取物对奶牛瘤胃细菌菌群的影响。[结果]对照组与试验组的瘤胃微生物在OTU水平上可相互分离。试验组奶牛瘤胃细菌的α多样性指数与对照组差异不显著(P>0.05)。添加复合植物提取物改变奶牛瘤胃中17个细菌菌门相对丰度,但试验组与对照组差异不显著(P>0.05);在门水平上,2组的拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)在总菌群中占比最高;在属水平上,试验组瘤胃细菌相对丰度与对照组差异不显著(P>0.05),2组优势菌属均为普雷沃菌属1(Prevotella 1)。通过LEFse分析发现,与对照组相比,试验组奶牛瘤胃中的拟杆菌目(Bacteroidales)相对丰度显著(P<0.05)降低,而双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)的相对丰度显著(P<0.05)增加。[结论]在泌乳期奶牛饲粮中添加0.3%的蒲公英、益母草、金银花和连翘复合提取物具有调节瘤胃菌群的作用。

响应面优化连翘叶总三萜提取工艺及其抗肿瘤活性研究

以总三萜提取率为评价指标,利用超声波提取技术结合单因素试验和响应面试验优化连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)叶总三萜的最佳提取工艺;并利用6种大孔树脂进行进一步纯化,再采用CCK-8法检测连翘叶总三萜对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞,肝癌HepG2、SNU-739细胞,结肠癌HT29、HCT116细胞的增殖抑制作用。结果表明,连翘叶总三萜最优提取工艺为乙醇浓度85%、料液比1∶40 g/mL、提取时间35 min、提取温度60℃,在此条件下连翘叶总三萜的提取率可达14.13%;D101型树脂为最佳树脂,经纯化的连翘叶总三萜的含量可达72.89%,连翘叶总三萜对MCF-7、MDAMB-231、HepG2、SNU-739、HT29和HCT116细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(6.29±0.34)、(9.51±0.71)、(12.05±1.23)、(9.91±0.94)、(22.82±0.65)、(23.45±1.01)mg/L。优化后的连翘叶总三萜提取工艺稳定简单,且其纯化后具有较强的抗肿瘤活性。

连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

目的:分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响,初步探讨其免疫抑制作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM),检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、CD25、CD71的表达情况;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色,以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响。结果:终浓度为40、80、160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、CD25和CD71的表达有降低作用(P<0.05)。CFDA-SE染色分析显示,上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(P<0.05)。结论:FS对ConA诱导的T细胞早、中、后期活化和体外增殖有抑制作用。

连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05)。不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。

连翘花色苷的提取及其稳定性研究

以连翘花瓣为试材,研究了其花色苷的最佳提取方案及稳定性。结果表明,用体积分数为95%乙醇和0.5%盐酸在45℃条件下浸提7 h,效果最佳。pH对连翘花色苷稳定性影响显著。Na+、Cu2+、Ca2+对花色苷稳定性影响不显著,Zn2+对花色苷稳定性影响显著。花色苷的抗氧化性好,抗还原能力较差。葡萄糖、蔗糖等食品添加剂对花色苷稳定性无影响,而柠檬酸则影响较大。

基于人呼吸道上皮细胞炎症模型的连翘提取物抗炎活性实验研究

通过复制LPS诱导的BEAS-2B炎症模型，探讨连翘提取物对炎症反应中炎性因子分泌的作用。采用MTT法检测BEAS-2B细胞活力，筛选连翘乙醇提取物（FSEE）、60%连翘酯苷A（60% FTA）、90%连翘酯苷A（90% FTA）最佳给药浓度；采用倒置显微镜观察连翘提取物对细胞作用后的细胞形态；采用Griess Reagent法检测细胞培养上清NO含量；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的水平。毒性试验结果表明，连翘提取物浓度小于128 μg/mL时，对BEAS-2B细胞没有产生毒性；浓度在128-256 μg/mL时，60% FTA与90% FTA均表现出对细胞的毒性。抗炎结果表明，在给药浓度设置为25、50、100 μg/mL时，三种提取物均表现出减少NO分泌的效果（P〈0.01），90% FTA组存在剂量依赖关系；三种提取物可显著降低LPS诱导的BEAS-2B细胞胞内活性氧的水平（P〈0.05），且呈量效关系。另外，FSEE、60% FTA、90% FTA组间的治疗效果也逐渐增强。由此得出，90% FTA为连翘提取物抗炎作用的主要活性部位，其抗炎活性成分可能为连翘酯苷A，这将为连翘抗炎活性的进一步研究提供基础。

连翘叶提取物抑菌作用以及稳定性研究

对连翘叶提取物(Forsythia Suspensa leaves extract,FSLE)抑菌性能进行研究,同时以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌研究FSLE抑菌成分的稳定性。结果表明:FSLE的抑菌活性具有良好的热稳定性;在中性和弱酸性环境中FSLE抑菌活性较强;在大于30min紫外线照射对FSLE抑制枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌活性有一定影响;H2O2对FSLE抑菌活性影响较大;金属离子Na+、K+对FSLE抑菌性能影响不大,Ca2+、Cu2+、Fe3+有增强FSLE抑菌能力作用。

连翘花提取物活性成分及其稳定性

采用高效液相色谱方法对河南连翘花提取物中芦丁、金丝桃苷、连翘酯苷A、连翘苷、齐墩果酸、熊果酸含量进行分析,并对连翘花提取物稳定性进行研究。结果表明：连翘花提取物中含有较高含量的芦丁、金丝桃苷、连翘苷、齐墩果酸和熊果酸;在中性和弱酸性环境中连翘花提取物具有较强的稳定性;在25-75℃范围内,温度对连翘花提取物影响较小;室光和避光对连翘花提取物的影响小于自然光;金属离子K^＋、Na^＋、Ca^2＋对连翘花提取物的吸光度影响较小,Mg^2＋、Fe^3＋有增强连翘花提取物吸光度作用;氧化剂、还原剂、蔗糖、食盐和淀粉对连翘花提取物稳定性影响较小。本实验为综合利用连翘花提取物资源提供有用信息。

连翘叶成分及生物活性研究进展

连翘叶富含连翘苷、连翘脂苷A、连翘脂素、芦丁等化合物,具有抗病毒、抗氧化等功效,其中连翘酯苷等成分已证实对新型冠状病毒有抑制作用。随着新型冠状病毒肺炎疫情的爆发,连翘叶的开发引起了广泛关注。本文综述了连翘叶主要化学成分的提取工艺及药理功效,并阐述了连翘叶的未来研究方向及发展前景,为连翘叶在食品、功能食品、药品等领域的开发提供参考依据。

连翘叶提取工艺优选

目的优化连翘叶提取工艺,为制备连翘叶速溶茶奠定基础。方法采用正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、回流时间和回流次数4个因素对连翘苷、连翘酯苷A、芦丁的质量分数和出膏率的影响。结果优选的工艺为:6倍量体积分数50%乙醇,提取2次,每次0.5 h;其中回流次数对连翘叶提取工艺的影响具有统计学意义(P<0.05)。结论优化后的提取工艺稳定可靠,可为进一步制备连翘叶速溶茶提供参考。

连翘叶中连翘酯苷A、芦丁和连翘苷提取纯化工艺优化

对连翘叶提取液中同时分离连翘酯苷A、芦丁和连翘苷的提取纯化工艺进行优化。以连翘酯苷A、连翘苷和芦丁的质量浓度为指标,采用高效液相色谱法分析检测,比较不同型号的大孔吸附树脂和不同工艺条件对这3种活性成分的分离纯化能力。最佳工艺条件为:以AB-8大孔吸附树脂为吸附剂,药材-树脂比1.5∶1(g/g),上样流速2 BV/h,先用8 BV的水洗脱,再用6 BV的30%乙醇溶液和6 BV的50%乙醇溶液分别洗脱,洗脱流速3 BV/h;进一步采用C_(18)-硅胶柱反相层析法纯化连翘酯苷A,静置沉淀的方法纯化连翘苷和芦丁,纯化后连翘酯苷A和芦丁的纯度可达到97%以上,连翘苷纯度可达到95%以上。此工艺条件能得到高纯度的3种有效成分,为连翘叶资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。