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Aluminum-Magnesium Silicate enhances release of virions of cultured <i>Fowl Pox Virus</i>and inhibits the virus 被引量:2
1
作者 Maduike C. O. Ezeibe Emmanuel Ekeanyanwu +1 位作者 Augustine A. Ngene Ijeoma J. Mbuko 《Health》 2013年第9期1394-1396,共3页
Antiviral effects of a synthetic Aluminum-Magnesium Silicate (AMS) were tested on Fowl Pox Virus (FPV). Five batches of the Nigerian brand of FPV vaccine were used as sources of the virus. The reconstituted vaccines w... Antiviral effects of a synthetic Aluminum-Magnesium Silicate (AMS) were tested on Fowl Pox Virus (FPV). Five batches of the Nigerian brand of FPV vaccine were used as sources of the virus. The reconstituted vaccines were mixed with The Synthetic AMS on equal volume to weight basis and incubated at room temperature for one hour. They were centrifuged for 10 minutes at 2000 revolutions per minute. The incubation and centrifugation were repeated on a portion of each vaccine supernatant. The two sets of supernatants were tested by the Modified Passive Haemagglutination test, for FPV titres. Portions of the vaccines, not incubated with the AMS, were served as controls. Fowl Pox Virus titres of the vaccines increased from a mean of 2.8 ± 1.10 to 11.2 ± 4.38 when incubated with the AMS once. When incubation with the AMS was repeated, the titres reduced (P< 0.05) to zero in each sample. 展开更多
关键词 Aluminum-Magnesium Silicate–Nanoparticles Antiviral Effects Anticancer Potentials fowl pox VIRUS
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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价 被引量:14
2
作者 王云峰 智海东 +5 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期426-429,共4页
为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有... 为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有白斑出现 ,说明病毒纯度不够 ;经过 16代纯化的病毒 (rFPV -ILTVgB -C16)对细胞的嗜性加强 ,病毒的效价进一步升高 ,2 0代传代后蓝斑率仍然为 10 0 % ,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第 5 ,10 ,15 ,2 0代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种 2周龄SPF鸡 ,2 0天后分为两组 ,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株攻击 ,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击。鸡体内病毒传代试验表明 ,重组病毒在接种部位仅存在 6天 ,之后就检测不到病毒 ,重组病毒通过SPF鸡连续传代 ,不存在病毒返祖的可能。由此可以得出一个结论 ,rFPV -ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的 ,无论是在体外传代 ,还是在体内均可以稳定遗传 ,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能 ,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 鸡痘 重组鸡痘病毒疫苗 遗传稳定性
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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定 被引量:12
3
作者 王云峰 智海东 +5 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期441-444,共4页
将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5... 将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5× 10 6 PFU ,接种后 3天出现局部反应 ,5天局部肿胀达到最大 ,接种鸡无其它全身反应 ,精神、食欲以及发育等均不受影响 ,说明重组病毒对试验鸡是安全的。取其中的 2 0 0 0 0 3批疫苗 ,用生理盐水作 2 10 -2 ~ 2 10 -5稀释后 ,翅内侧无血管处皮下接种 4 0日龄SPF鸡 ,免疫后 4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株 ,结果表明 ,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力 ,在接种剂量为 2 10 -2 ~ 2 10 -40 .1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应 ,当接种剂量为 2 10 -50 .2ml/鸡时可以使部分试验鸡 ( 5 /15 )产生局部反应 ,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)。攻毒试验结果进一步证明 ,当接种剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力 ,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒 10 2株的攻击 ,降低鸡群的发病率和病死率。这些结果说明 。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 鸡痘 重组鸡痘病毒疫苗 最小免疫剂量 安全性试验
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口蹄疫重组鸡痘病毒诱导猪特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测 被引量:6
4
作者 郑敏 金宁一 +4 位作者 秦晓冰 田明尧 费东亮 李萍 何敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期50-54,共5页
目的:评价口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1诱导猪产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的能力。方法:用PCR方法亚克隆O型FMDVVP1基因C末端部分片段(第1 30~2 1 3AA)。将其插入真核表达载体pDisplay中,构建质粒pDisplay- mVP1。将pDis... 目的:评价口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1诱导猪产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的能力。方法:用PCR方法亚克隆O型FMDVVP1基因C末端部分片段(第1 30~2 1 3AA)。将其插入真核表达载体pDisplay中,构建质粒pDisplay- mVP1。将pDisplay -mVP1转染PK 1 5细胞,经3次G41 8加压筛选,并用RT- PCR和IFA鉴定,证明获得表达目的基因的PK 1 5 /pDisplay- mVP1细胞。最后,利用该细胞作为靶细胞,用LDH法检测口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫猪的特异性CTL杀伤活性。结果:vUTAL3CP1免疫组在效靶比2 5∶1和5 0∶1时,CTL裂解活性分别达到42 . 84%±3 2. 1 %和61 . 94%±4 2. 8% ,显著高于灭活疫苗组与其它对照组(p <0 . 0 1 )。结论:vUTAL3CP1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,为进一步的FMDV基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫 重组鸡痘病毒 特异性细胞毒性T淋巴细胞 杀伤活性 检测 活疫苗 细胞免疫
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禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较 被引量:15
5
作者 王景艳 李中明 +2 位作者 赵鹏 陈浩 崔治中 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第1期35-40,共6页
为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken em... 为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疫荧光试验,确认REV感染,命名为JS0809。提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因。测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1 761 bp。JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%~99.%。相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%~97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%~99.8%。它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%。本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒。 展开更多
关键词 禽痘病毒活疫苗 网状内皮组织增片病病毒 鉴定 序列分析
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口蹄疫病毒重组鸡痘病毒活载体疫苗和DNA疫苗免疫牛的试验研究 被引量:4
6
作者 郑敏 金宁一 +6 位作者 秦晓冰 金扩世 刘棋 田明尧 郭建顺 徐敬龙 李昌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期158-162,共5页
将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1-2A和猪白介素18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和... 将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1-2A和猪白介素18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组(vUTAL3CP1/pVIRIL18P1,pVIRIL18P1/vUTAL3CP1)诱导的中和抗体滴度分别达到1∶64、1∶64和1∶54,已接近于常规灭活疫苗水平(1∶90),而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多(P<0.01)。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫 重组鸡痘病毒 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫
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抗肿瘤重组鸡痘病毒体外抑制骨肉瘤细胞S180的效应 被引量:3
7
作者 张治宇 金宁一 +4 位作者 李霄 张新 金毅 杨英欣 李力卓 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期233-235,共3页
目的探讨Apoptin、HN和IL18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应。方法以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜... 目的探讨Apoptin、HN和IL18融合基因的重组鸡痘病毒(vFV3)对骨肉瘤细胞S180的抑制效应。方法以vFV3感染人骨肉瘤细胞S180,应用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪分析vFV3感染致S180细胞周期变化,并用Rhodamine123染色结合FCM检测线粒体跨膜电位,从细胞生物学角度探讨vFV3致S180肿瘤细胞凋亡的途径。结果vFV3感染可有效抑制S180肿瘤细胞,杀伤率达46.8%。感染使S180肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致S180肿瘤细胞凋亡。结论vFV3可诱导S180肿瘤细胞凋亡,并主要通过线粒体途径诱导凋亡。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 骨肉瘤细胞 细胞凋亡
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vUTAL3CP1重组载体疫苗与pVIRIL18P1 DNA疫苗在猪体内的免疫原性研究 被引量:3
8
作者 金宁一 郑敏 +6 位作者 秦晓冰 金扩世 刘棋 马鸣潇 田明尧 李昌 万遂如 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期260-264,268,共6页
目的评价本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及免疫辅助基因的重组鸡痘病毒vUTAL3CP1和重组DNA疫苗pVIRIL18P1在猪体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的能力。方法将上述2种疫苗采用4种不同的组合方式单独或联合给猪进行... 目的评价本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及免疫辅助基因的重组鸡痘病毒vUTAL3CP1和重组DNA疫苗pVIRIL18P1在猪体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的能力。方法将上述2种疫苗采用4种不同的组合方式单独或联合给猪进行肌肉注射,用ELISA方法和中和实验检测猪产生的抗体水平,T淋巴细胞增殖反应、CTL反应以及T淋巴细胞亚类。结果这2种基因工程疫苗均能诱导猪产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中单独免疫组vUTAL3CP1/vUTAL3CP1的效果最好,其诱导的抗体水平已接近于常规灭活疫苗,而细胞免疫水平则比后者高得多。联合免疫组中vUTAL3CP1/pVIRIL18P1可以诱导比vUTAL3CP1/vUTAL3CP1更高的CTL杀伤活性,但体液免疫水平略低。结论证实了这2种基因工程疫苗在猪体内均有良好的免疫原性。同时初步筛选出vUTAL3CP1/vUTAL3CP1和pVIRIL18P1/vUTAL3CP1组等较佳的免疫策略,为下一步的攻毒保护试验奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组鸡痘病毒 DNA疫苗 免疫原性
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鸡痘病毒分离株及疫苗株整合网状内皮组织增生病病毒的基因分析 被引量:2
9
作者 车国喜 孙洪磊 +3 位作者 于宏 李超 刘立涛 刘思当 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期864-868,共5页
为了解山东地区鸡痘病毒(FPV)野毒流行株整合禽网状内皮组织增生病病毒(REV)前病毒的情况,同时比较FPV分离株和弱毒疫苗株整合REV前病毒序列的差异,本研究对山东不同地区的14个FPV分离株和国内外不同厂家的5个FPV疫苗株进行了REV前病毒... 为了解山东地区鸡痘病毒(FPV)野毒流行株整合禽网状内皮组织增生病病毒(REV)前病毒的情况,同时比较FPV分离株和弱毒疫苗株整合REV前病毒序列的差异,本研究对山东不同地区的14个FPV分离株和国内外不同厂家的5个FPV疫苗株进行了REV前病毒整合区基因PCR扩增、核苷酸序列测定及基因分析。结果表明14个FPV分离株均整合了几乎全长的REV前病毒序列,这些序列与美国分离的FPV整合株AF246698的整合序列同源性最高,与REV标准株同源性较低;疫苗株均仅整合部分或完整的REV-LTR序列,但国产与进口疫苗株的整合序列不同,国产疫苗整合的LTR片段相对较小。研究表明所分离的山东FPV分离株均整合全长REV序列,疫苗株仅整合REV-LTR序列。然而FPV整合病毒株的致病特性、整合疫苗的安全性及对整合FPV野毒的免疫保护作用有待于进一步研究。 展开更多
关键词 FPV野毒株 疫苗株 REV 基因分析
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表达PRRSV ORF5和PCV2 ORF2基因的重组鸡痘病毒的构建及鉴定 被引量:1
10
作者 沈国顺 金宁一 +3 位作者 庄天中 韩贞珍 李阳 张金双 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期405-409,共5页
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞... 分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因,插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2-16-LacZ单一启动子和复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-ORF2。将该重组质粒与鸡痘病毒282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞,进行同源重组。通过3次溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)加压筛选,经RT-PCR、IFA和Western blot鉴定,表明重组鸡痘病毒中的目的基因在鸡胚成纤维细胞中得到表达,获得一株携带有目的基因ORF2和ORF5的重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5。 展开更多
关键词 PRRSV ORF5 PCV-2 ORF2 鸡痘病毒
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一起蛋雏鸡皮肤型鸡痘病毒与大肠埃希菌混合感染的病理学观察 被引量:2
11
作者 谢长清 王凯 +2 位作者 黄绍宋 程国富 谷长勤 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期174-177,共4页
采用细菌分离技术、病理组织学观察、PCR鉴定及致病性试验对临床一例疑似雏蛋鸡皮肤型鸡痘混合感染进行了确诊。结果显示,病鸡眼分泌物及脚趾结痂处均分离到大肠埃希菌,内脏器官未分离到细菌。组织学观察发现,在皮肤痘痂和眼睑组织内发... 采用细菌分离技术、病理组织学观察、PCR鉴定及致病性试验对临床一例疑似雏蛋鸡皮肤型鸡痘混合感染进行了确诊。结果显示,病鸡眼分泌物及脚趾结痂处均分离到大肠埃希菌,内脏器官未分离到细菌。组织学观察发现,在皮肤痘痂和眼睑组织内发现上皮细胞呈水泡变性,空泡化,胞质内出现圆形嗜酸性包涵体,腺胃胃壁增厚,复管腺腺腔内可见局灶性的淋巴细胞样细胞聚集,肺脏淤血,散在的肝细胞和肾小管上皮细胞变性、坏死,其他内脏器官未出现明显病变。体表病灶内PCR扩增出1 358bp的禽痘病毒的特异性片段。将痘痂病料接种9日龄的SPF鸡胚可致鸡胚死亡,呈暗红色。确诊该起病例为皮肤型鸡痘伴大肠埃希菌局部感染。 展开更多
关键词 鸡痘 大肠埃希菌 病理学观察 诊断
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12株禽痘疫苗毒中禽网状内皮组织增生病病毒5′LTR整合位点的比较研究 被引量:1
12
作者 孔祥伟 王丹 +3 位作者 王世新 王海明 杨树青 孙淑红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1062-1066,共5页
为探究近年来禽痘(FP)疫苗中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)5′长末端重复序列(LTR)的整合情况,收集2012—2014年不同地区不同批次的12株FP疫苗,稀释后接种鸡胚成纤维细胞(CEF),提取细胞DNA,扩增REV相关基因并测定序列。结果表... 为探究近年来禽痘(FP)疫苗中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)5′长末端重复序列(LTR)的整合情况,收集2012—2014年不同地区不同批次的12株FP疫苗,稀释后接种鸡胚成纤维细胞(CEF),提取细胞DNA,扩增REV相关基因并测定序列。结果表明,12个禽FP疫苗株均扩增出含REV-5′LTR和FPV片段在内的产物,其中2株国外疫苗扩增序列长度为745bp,10株国产疫苗扩增序列长度为485bp。经DNA-Star比对分析,2株国外疫苗整合了446bp的几乎完整的REV-LTR序列,另外10株国产疫苗整合的REV-LTR片段相对较小,仅为194bp。这12个FP疫苗株中整合的REV-LTR与中国近年分离到的REV野毒株HA1101的LTR的相似性为70.3%-82.6%,与国外已发表的FP毒株AY255632整合的REV-LTR的相似性高达98.6%-100%。结果提示,国内外FP疫苗整合有REV-LTR序列的现象普遍存在。本研究检测的12个FP疫苗株均整合有REV-LTR序列,一部分疫苗株整合了几乎完整的REV-LTR序列,而大部分疫苗株整合片段则相对较小,并且与国外已分离到的FP毒株的序列同源性更接近。 展开更多
关键词 禽痘疫苗 禽网状内皮组织增生病病毒 5′LTR
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口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1的构建与理化学特性研究 被引量:1
13
作者 金明兰 金宁一 +3 位作者 鲁会军 马鸣潇 郑敏 刘慧娟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第4期241-246,共6页
目的 构建含有口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体PI-2A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗并研究其理化学特性。方法选用鸡痘病毒作为载体,将FMDV的衣壳蛋白前体P1—2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中,构建重组鸡痘病毒转... 目的 构建含有口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体PI-2A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗并研究其理化学特性。方法选用鸡痘病毒作为载体,将FMDV的衣壳蛋白前体P1—2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1,并与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,通过药物BrdU加压筛选、间接免疫荧光实验以及Western blot等方法筛选并获得了一株重组鸡痘病毒。将其经酸、碱、加热、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理,接种到CEF上观察处理前后口蹄疫重组活载体疫苗vUTAL3CP1细胞病变,分析这些理化因子对口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1重组鸡痘病毒的影响。结果 在pH3.0~9.0范围内,pH值变化不会造成该口蹄疫重组活载体疫苗vUTAL3CP1毒价的显著变化;口蹄疫重组活载体疫苗VUTAL3CP1经50℃60min、55℃30min或60℃15min即可被灭活;对氯仿敏感;经胰蛋白酶37℃作用1h,毒价降低2.44log10TCID50对乙醚有抵抗力,经乙醚作用24h病毒滴度下降1.0log 10TCID50结论 筛选并鉴定了含有口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1,为疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫重组活载体疫苗vUTAL3CP1 构建 理化学特性
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表达重组鸡新城疫病毒免疫原蛋白基因的研究 被引量:1
14
作者 刘惠莉 刘洪云 +2 位作者 曹殿军 孙凤萍 顾庆国 《上海农业学报》 CSCD 1999年第3期58-61,共4页
以 N D V H N 基因重组禽痘病毒载体与禽痘病毒转染液为材料,以载体质粒的 Lac Z报告基因为筛选标记,在含有 Xgal的培养基上筛选蓝色空斑的阳性重组子,对初次筛选到的蓝色空斑经过三轮蚀斑纯化(蓝斑形成率达90%... 以 N D V H N 基因重组禽痘病毒载体与禽痘病毒转染液为材料,以载体质粒的 Lac Z报告基因为筛选标记,在含有 Xgal的培养基上筛选蓝色空斑的阳性重组子,对初次筛选到的蓝色空斑经过三轮蚀斑纯化(蓝斑形成率达90% 以上),得到了能稳定增殖的病毒子;再分别提取病毒子感染细胞、正常对照细胞基因组 D N A, Bam HⅠ酶切后,以 D I G 标记的探针进行 Southern 杂交检测,发现重组病毒感染的细胞基因组 D N A 在7 kb 处有一 D N A 片段,能与 H N 特异性探针呈阳性反应,而对照细胞没有,从而利用 Lac Z报告基因、 H N 探针杂交检测,我们成功地筛选并获得了 N D V H N 基因重组禽痘病毒,为下一步的研究工作奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 重组禽痘病毒 噬斑筛选 疫苗
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鸡痘病原分离鉴定及油乳剂灭活苗研制 被引量:1
15
作者 王老七 陶海静 杨自军 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第1期67-69,共3页
从发病鸡病变组织采集病料 ,通过鸡胚接种和细胞培养分离病毒 ,经电镜观察、包涵体检查和理化特性检查证明分离病毒为鸡痘病毒 ;用分离毒株研制出鸡痘油乳剂灭活苗 ,配合鸡痘鹌鹑化弱毒苗使用 ,用于鸡痘的预防 ,经临床应用效果良好。
关键词 鸡痘 病原分离鉴定 油乳剂灭活苗
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鸡痘病毒的分离鉴定 被引量:1
16
作者 徐春厚 程葛 +1 位作者 姜野 王绍辉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 1996年第4期4-6,共3页
利用鸡胚绒毛尿囊膜培养、透射电镜现察、包涵体检查及抗原检测,从某种鸡场发病鸡群的鸡冠部痘疹上分离鉴定出两株鸡瘟病毒(ML 株和 MM 株)。两株病毒能在尿囊膜上形成痘斑和包涵体,病毒粒子大小为250×350nm,具有囊膜和血凝毒,对... 利用鸡胚绒毛尿囊膜培养、透射电镜现察、包涵体检查及抗原检测,从某种鸡场发病鸡群的鸡冠部痘疹上分离鉴定出两株鸡瘟病毒(ML 株和 MM 株)。两株病毒能在尿囊膜上形成痘斑和包涵体,病毒粒子大小为250×350nm,具有囊膜和血凝毒,对乙酰、氯仿和 pH3敏感,56℃30 min 可灭活,人工感染试验结果表明,两株病毒具有较强的致病性。 展开更多
关键词 痘病毒 分离 鉴定
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不同接毒方法培养鸡痘细胞苗维持液与细胞内病毒含量的测定 被引量:1
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作者 袁建琴 高斌战 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第3期308-311,共4页
以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步... 以同步接毒和异步接毒培养鸡痘细胞苗,在其他条件相同前提下,发现同步接毒维持液的pH变化、细胞病变与异步接毒存在一定差异。为明确两种接毒法对病毒增殖效果的影响,本试验分别对维持液和病变细胞的毒价进行了监测。经过试验测得同步接毒法的细胞内含毒量明显高于异步接毒法。 展开更多
关键词 鸡痘苗 细胞苗 鸡胚成纤维细胞 同步接毒法 异步接毒法
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猪圆环病毒2型鸡痘病毒活载体疫苗诱导的CTL杀伤活性检测
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作者 秦晓冰 牛晋国 +3 位作者 杨瑞梅 韩先杰 孙月平 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期9-14,共6页
通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细... 通过基因工程的方法获得猪圆环病毒2型(PCV-2)二联重组鸡痘活载体疫苗vUTAL-P1-ORF2ORF1和核酸疫苗pVAX1IL-18ORF2ORF1。将采取不同的免疫方案接种本体动物猪,在二免后15 d分别采猪抗凝血,用淋巴细胞分离液处理,得到淋巴细胞作为效应细胞;构建重组质粒p Display-ORF2,并转染PK-15传代细胞,用G418多次筛选得到靶细胞。借助CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒从细胞免疫水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性评价该重组鸡痘活载体疫苗的免疫效果。结果表明,采用"Pri me pVAX1-ORF2ORF1,boost vPUTAL-P1-ORF2ORF1"的免疫方案所获得的杀伤活性最高达66.005%±2.671%(效靶比50∶1)和38.870%±2.883%(效靶比25∶1),显著高于对照组(P<0.01)。说明vUTA-P1-ORF2ORF1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,且以核酸疫苗首免,重组鸡痘活载体疫苗追加免疫的接种方案最优,为PCV-2基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 特异性 细胞毒性T淋巴细胞 猪圆环病毒2型 重组鸡痘活疫苗 细胞免疫
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含HN基因的重组鸡痘病毒抑制骨肉瘤细胞SAOS-2的体外实验研究
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作者 张治宇 苑福升 +3 位作者 李力卓 胡硕 孔大亮 高志学 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第5期816-818,共3页
目的探讨含HN的重组鸡痘病毒(rFPVHN)对骨肉瘤细胞SAOS-2的抑制效应。方法以rFPVHN感染人骨肉瘤细胞SAOS-2,应用MTT法检测细胞活性,罗丹明123结合FACS测定线粒体跨膜电位,测定肿瘤细胞表面唾液酸含量,底物染色反映检测Caspase-3活性。结... 目的探讨含HN的重组鸡痘病毒(rFPVHN)对骨肉瘤细胞SAOS-2的抑制效应。方法以rFPVHN感染人骨肉瘤细胞SAOS-2,应用MTT法检测细胞活性,罗丹明123结合FACS测定线粒体跨膜电位,测定肿瘤细胞表面唾液酸含量,底物染色反映检测Caspase-3活性。结果 rFPVHN感染可有效抑制SAOS-2肿瘤细胞,杀伤率达58.9%。感染使SAOS-2肿瘤细胞线粒体膜电位下降,导致SAOS-2肿瘤细胞凋亡。细胞表面唾液酸水平明显下降;Caspase-3活性被激活。结论 rFPVHN可诱导SAOS-2肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 骨肉瘤细胞 细胞凋亡
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应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒 被引量:1
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作者 肖履中 《青海畜牧兽医杂志》 2000年第2期15-16,共2页
用丹麦产NUNC一次性细胞培养瓶、199培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞 ,结果显示 ,细胞生长快 ,贴壁良好 ,2 4h单层细胞即长满瓶底 ,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞 ,4d后细胞出现预... 用丹麦产NUNC一次性细胞培养瓶、199培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞 ,结果显示 ,细胞生长快 ,贴壁良好 ,2 4h单层细胞即长满瓶底 ,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞 ,4d后细胞出现预期的典型病变 ,并且可见大量多核巨细胞形成 ,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能 ,而且说明 ,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒 ,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜 ,形成白色典型痘斑。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 鸡胚成纤维细胞 细胞培养 白色痘斑
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